【摘要】：癲癇是最常見(jiàn)的嚴(yán)重的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,給患者、家庭、社會(huì)造成了沉重負(fù)擔(dān),它影響全球約6500萬(wàn)人。我國(guó)約有900萬(wàn)人受其危害,且約25%-30%被診斷為難治性癲癇。其中,顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy, TLE)為該類(lèi)型中最常見(jiàn)的。氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇大鼠的行為學(xué)及海馬神經(jīng)元的病理學(xué)的改變跟人類(lèi)的顳葉癲癇極為相似,故此模型在當(dāng)前的癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus, SE)和TLE的相關(guān)研究中被廣泛使用。在過(guò)去的十年中,雖然關(guān)于影響癲癇預(yù)后的病理生理機(jī)制和因素的研究已經(jīng)有了很大的進(jìn)展,但是對(duì)于其確切的發(fā)病機(jī)制仍未研究透徹,因此雖然有一部分癲癇患者能夠被治愈,卻尚有約三分之一的患者表現(xiàn)出耐藥性。因此深一步研究關(guān)于癲癇的確切發(fā)病機(jī)制、探索新型高效神經(jīng)保護(hù)藥物的意義重大。組蛋白有多種共價(jià)修飾的方式,其中乙�；揎棡榛蜣D(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要機(jī)制之一。組蛋白乙�；臓顟B(tài)主要由組蛋白乙酰化酶(histone acetylases, HATs)和組蛋白去乙�；�(Histone deacetylases, HDACs)調(diào)節(jié)。HATs主要是促進(jìn)蛋白乙�；岣呋蜣D(zhuǎn)錄活性；而HDACs可使組蛋白脫乙酰化,抑制基因表達(dá)。組蛋白的乙�；�、脫乙�；胶獾母淖儠�(huì)影響著細(xì)胞多方面的功能。近年不少研究證實(shí)了HDAC抑制劑在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如缺血性中風(fēng)模型、亨廷頓氏病、多發(fā)性硬化癥的積極作用。然而目前HDAC抑制劑在癲癇領(lǐng)域的應(yīng)用還較少,尤其一些高效的新型HDAC抑制劑的應(yīng)用研究更少。HDACs抑制劑11r,一個(gè)新的N-羥基肉桂酰胺基衍生物,在Medicinal chemistry上被李曉陽(yáng)等人第一次進(jìn)行報(bào)道,且被證明是高效的HDAC1/3的選擇性抑制劑,并對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)有著明顯的抑制作用。目前尚缺乏關(guān)于其對(duì)于癲癇所致腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用的研究。因此,本課題建立氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)的癲癇大鼠模型,從而觀察SE后各組大鼠的行為學(xué)改變和大鼠海馬CA1及CA3區(qū)腦組織形態(tài)學(xué)改變情況、神經(jīng)元存活情況；檢測(cè)大鼠海馬CA1及CA3區(qū)組蛋白乙�；�;并通過(guò)Morris水迷宮來(lái)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)大鼠的認(rèn)知功能,以探討新型HDAC抑制劑11r對(duì)匹魯卡品誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)所致腦損傷是否具有保護(hù)作用。本研究分為兩個(gè)部分：第一部分氯化鋰-匹魯卡品大鼠癲癇模型的建立及大屬海馬神經(jīng)元病理學(xué)改變的觀察目的觀察氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇大鼠的行為學(xué)變化及癲癇導(dǎo)致的海馬組織的病理改變情況。方法成年體健雄性Sprague Dawley大鼠,通過(guò)腹腔注射氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)SE,從而觀察大鼠的行為學(xué)改變情況。SE后約60分鐘,通過(guò)腹腔注射地西泮來(lái)終止SE。致癇后24小時(shí),對(duì)大鼠進(jìn)行灌注取腦,制備石蠟切片, 用HE、Nissl染色來(lái)觀察各實(shí)驗(yàn)大鼠海馬神經(jīng)元的病理改變情況。結(jié)果1.依據(jù)Racine評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),達(dá)到Ⅳ及以上發(fā)作者,被定義為SE誘發(fā)成功。SE的表現(xiàn)為：雙側(cè)前肢陣攣、雙側(cè)后肢強(qiáng)直,身體背曲強(qiáng)直伴有直立、跌倒等。氯化鋰-匹魯卡品致癇的成功率為90.0%；平均潛伏期為36.3±10.8min；72 h內(nèi)的死亡率為13.0%。2.HE染色及Nissl染色結(jié)果：正常組大鼠的海馬CA1和CA3區(qū)：見(jiàn)大量、致密的錐體及顆粒細(xì)胞,細(xì)胞排列緊密,且胞漿內(nèi)的尼氏小體豐富,胞核為圓形、橢圓形,核仁清晰,染色質(zhì)的分布均勻。SE后24 h,大鼠海馬CA1、CA3區(qū)的神經(jīng)元出現(xiàn)排列紊亂,細(xì)胞腫脹、破裂,細(xì)胞輪廓變模糊；變性、壞死神經(jīng)元呈現(xiàn)為三角形,胞漿內(nèi)的尼氏小體減少,核固縮。結(jié)論結(jié)果證實(shí)：氯化鋰-匹魯卡品可成功誘發(fā)大鼠的癲癇發(fā)作,并導(dǎo)致大鼠海馬神經(jīng)元的變性、損傷。角形,胞漿內(nèi)的尼氏小體減少,核固縮。第二部分組蛋白脫乙�；敢种苿�11r對(duì)氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及其可能機(jī)制目的研究新型HDAC抑制劑11r對(duì)氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇大鼠的海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用,并觀察11r對(duì)SE后海馬CA1、CA3區(qū)組蛋白乙�；降挠绊�,探討11r潛在的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。方法60只成年Sprague Dawley大鼠隨機(jī)分為5組(每組12只)：對(duì)照組、匹魯卡品組、治療I組、治療Ⅱ組、11r預(yù)處理組。觀察各組大鼠行為學(xué)差異； SE后72小時(shí)Nissl染色計(jì)量大鼠海馬神經(jīng)元CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元存活數(shù),免疫組織化學(xué)法測(cè)定大鼠海馬CA1及CA3區(qū)組蛋白乙�；�；SE后11天,Morris水迷宮測(cè)定大鼠的認(rèn)知功能。結(jié)果1.行為學(xué)觀察：與匹魯卡品組相比,11r預(yù)處理可延緩匹魯卡品誘導(dǎo)的SE發(fā)作潛伏期(P0.05),并能降低死亡率(P0.05),對(duì)照組未出現(xiàn)癲癇發(fā)作。2.Nissl染色結(jié)果：對(duì)照組：大鼠海馬Ca1、CA3區(qū)見(jiàn)致密的錐體、顆粒細(xì)胞,胞漿內(nèi)的尼氏小體豐富。匹魯卡品組海馬CA1、和CA3區(qū)神經(jīng)元變性壞死,胞漿內(nèi)尼氏小體減少。治療Ⅰ組及治療Ⅱ組的錐體細(xì)胞存活數(shù)要明顯高于匹魯卡品組(P0.05),但治療Ⅰ組及治療Ⅱ組之間的差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。11r預(yù)處理組的錐體細(xì)胞存活數(shù)目要高于匹魯卡品組(P0.05)。說(shuō)明11r預(yù)處理對(duì)于癲癇導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷有一定的保護(hù)作用。3.免疫組織化學(xué)方法結(jié)果：免疫標(biāo)記物質(zhì)呈藍(lán)灰色,存在于細(xì)胞核內(nèi)。匹魯卡品組的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于治療Ⅰ組及治療Ⅱ組和11r預(yù)處理組,即其組蛋白乙�；降陀谶@三組(P0.05),陰性對(duì)照無(wú)免疫染色。4.Morris水迷宮結(jié)果：與對(duì)照組、11r預(yù)處理組、治療Ⅰ、Ⅱ組比較,匹魯卡品組的逃避潛伏期均出現(xiàn)明顯延長(zhǎng)(P0.05)。治療Ⅰ組與治療Ⅱ組之間差異不具有顯著性(P0.05)。結(jié)論新型HDAC抑制劑11r對(duì)癲癇導(dǎo)致的海馬神經(jīng)元損傷及認(rèn)知功能下降有改善作用并有一定的抗驚厥作用,說(shuō)明11r對(duì)于癲癇導(dǎo)致的腦損傷有一定的保護(hù)作用。HDAC抑制劑的抗炎作用可能在這種保護(hù)機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R742.1

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 魏瑛,劉子建,朱長(zhǎng)庚,劉慶瑩;海仁酸致癇大鼠海馬組織AMPA受體GluR2表達(dá)的變化[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2003年03期

2 李國(guó)良,張寧,肖波,吳志國(guó),朱丹彤,沈璐,章蓓,謝光潔;匹羅卡品癲癇大鼠海馬TrkB受體表達(dá)與苔蘚纖維突觸重建的關(guān)系[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2003年04期

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本文編號(hào)：2370902