【摘要】：目的:1比較不同來源空腸彎曲菌經(jīng)消化道感染豚鼠致周圍神經(jīng)病變率的差異;2構(gòu)建通過自然途徑感染豚鼠致周圍神經(jīng)病變的動(dòng)物模型。方法:1菌株的選擇:選取自GBS患者的糞便標(biāo)本中分離、培養(yǎng)出的空腸彎曲菌Lulei株、Li Chang(LC)株,以比較哪株菌用來構(gòu)建動(dòng)物模型更佳;腹瀉來源的NCTC11168株,以觀察非GBS來源的腹瀉菌株是否可致周圍神經(jīng)病變;Lu Lei變異株為Lu Lei株經(jīng)小鼠反復(fù)灌胃分離得到的C.jejuni,此菌株在反復(fù)小鼠灌胃過程中導(dǎo)致了一只小鼠發(fā)生癱瘓,最終死亡,在此實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步觀察其致周圍神經(jīng)病變力;Fowl株分離自雞的糞便,通過此實(shí)驗(yàn)觀察C.jejuni作為禽類的天然宿主對(duì)豚鼠神經(jīng)的致病性;Xiao Tian株為2013年自GBS病人的糞便中分離得到的C.jejuni,同20年前GBS源C.jejuni的致周圍神經(jīng)病變進(jìn)行比較。2菌株培養(yǎng),鑒定及菌懸液的制備:將實(shí)驗(yàn)室凍存的以上6株空腸彎曲菌在實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)的微需氧條件(42℃,10%CO2、5%O2、85%N2)下培養(yǎng)24小時(shí),傳代至第三代后,對(duì)其進(jìn)行革蘭染色及馬尿酸水解實(shí)驗(yàn)鑒定。將鑒定后的菌株制備成空腸彎曲菌菌懸液,濁度為3×109CFU/ml。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:將SPF級(jí)健康的4周齡Hartley豚鼠56只,隨機(jī)分為6組實(shí)驗(yàn)組和1組對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組根據(jù)攻毒菌株不同分為Lu Lei組、Lu Lei變異組、Li Chang組、Xiao Tian組、Fowl組、NCTC11168組和對(duì)照組,每組8只。4攻毒方案:每次灌胃前禁食12小時(shí)、禁水3小時(shí)。Lulei組、Lulei變異組、Li Chang組、Xiaotian組、Fowl組和NCTC11168組每只Hartley豚鼠每次分別灌胃空腸彎曲菌Lu Lei株、Lu Lei變異株、Li Chang株、Xiao Tian株、Fowl株、NCTC11168株3×109CFU/ml的菌懸液1ml,對(duì)照組給予滅菌的布氏肉湯1ml,每周連續(xù)灌胃三天,灌胃四周,其中每組有兩只為灌胃3周,每周連續(xù)灌胃3天。5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察、解剖取材:自首次灌喂起每天觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的臨床癥狀并稱取體重等。豚鼠癱瘓?jiān)u分參考Hartley豚鼠EAN模型的癱瘓?jiān)u分標(biāo)準(zhǔn)[1]:將癱瘓程度分為0~5級(jí),0級(jí):無異常;1級(jí):兩后肢腳趾輕微拖拽地面;2級(jí):兩后肢腳趾較明顯拖地,但未累及其他部位;3級(jí):兩后肢顯著拖地,常見兩后肢偏向同一側(cè);4級(jí):兩后肢完全癱瘓;5級(jí):四肢均受累,甚至呼吸抑制。共灌胃3周的每組2只豚鼠于首次灌胃后第4周解剖,其余豚鼠依次每周每組解剖2只,共分4周解剖完成。取雙側(cè)坐骨神經(jīng)保存于4%多聚甲醛中,后對(duì)其進(jìn)行鋨酸染色,觀察周圍神經(jīng)病變。對(duì)每只豚鼠進(jìn)行腸道大體觀察,有無水腫、出血及壞死等。6統(tǒng)計(jì)分析:每只豚鼠隨機(jī)分離100根坐骨神經(jīng)的神經(jīng)單纖維,于顯微鏡下觀察拍照,記錄病變神經(jīng)纖維數(shù)及正常神經(jīng)纖維計(jì)算周圍神經(jīng)病變率(周圍神經(jīng)病變率=病變纖維數(shù)/100×100%)。使用SPSS13.0進(jìn)行χ2檢驗(yàn),比較不同組周圍神經(jīng)病變率有無差異。對(duì)各組豚鼠的體重變化利用重復(fù)測(cè)量法,比較各組體重變化有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察:1.1臨床癥狀:參考豚鼠癱瘓?jiān)u分標(biāo)準(zhǔn):各組評(píng)分均為0級(jí)。Fowl組有2只豚鼠在攻毒后有小片毛發(fā)稀疏;NCTC11168組有3只發(fā)生脫毛,一只腸脫垂死亡;Li Chang組兩只脫毛,其中一只翻身反應(yīng)差,2天恢復(fù);Lulei變異組有兩只發(fā)生脫毛。其他豚鼠在觀察期間無腹瀉,癱瘓及脫毛等明顯臨床表現(xiàn)。1.2體重變化:利用重復(fù)測(cè)量的方法對(duì)各組豚鼠體重進(jìn)行比較,雙側(cè)性檢驗(yàn),得出各組之間體重變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.3腸道大體觀察:在首次攻毒后第27天即末次攻毒后第4天NCTC11168組6號(hào)豚鼠發(fā)生腸脫垂,其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道大體觀察無明顯異常。2鋨酸染色周圍神經(jīng)病理表現(xiàn)對(duì)照組豚鼠坐骨神經(jīng)可見:髓鞘完整光滑、郎飛氏結(jié)正常;實(shí)驗(yàn)組豚鼠坐骨神經(jīng)主要病變表現(xiàn)為:結(jié)旁區(qū)髓鞘皺縮呈齒狀或長城樣、髓鞘脫失聚集成片狀或卵圓狀、神經(jīng)纖維粗細(xì)不均、郎飛氏結(jié)延長改變、神經(jīng)纖維有蟲蝕樣缺損、整條纖維皺縮等。3周圍神經(jīng)病變率結(jié)果統(tǒng)計(jì):采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,對(duì)鋨酸染色所見的各組豚鼠坐骨神經(jīng)的病變數(shù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。雙側(cè)性檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。得出各組間發(fā)病率不全相等。為進(jìn)一步進(jìn)行比較兩組間的差別,采用χ2分割法,并對(duì)檢驗(yàn)水準(zhǔn)進(jìn)行校正。得出各實(shí)驗(yàn)組同對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組周圍神經(jīng)病變率從高到低依次為:Lulei組(32%)Fowl組(21.88%)Lulei變異組(20.88%)Li Chang組(19.75%)Xiaotian組(17.38%)NCTC11168組(15.63%)對(duì)照組(4.38%);Lulei組同各實(shí)驗(yàn)組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且病變率高于其他各組;NCTC11168組與Lulei組、Fowl組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,病變率低于此兩組;NCTC11168組與Lulei變異組、Li Chang組、Xiaotian組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)中GBS源的Lulei株、Li Chang株、Xiaotian株,來源于雞的Fowl株,腹瀉來源的NCTC11168及GBS源不同生長狀態(tài)的Lulei變異株空腸彎曲菌可導(dǎo)致豚鼠均發(fā)生周圍神經(jīng)病變,但每只豚鼠周圍神經(jīng)纖維的病變率不同,以AMAN型GBS來源的Lulei株所致的周圍神經(jīng)病變率最高,NCTC11168所致周圍神經(jīng)病變率最低。2以往未注意到有誘發(fā)周圍神經(jīng)病變的典型腹瀉來源的NCTC11168株也發(fā)現(xiàn)了周圍神經(jīng)纖維的病變。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R745

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2366599