【摘要】：目的：觀察苦參素（MAT）對實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎（EAE）的防治作用，探討MAT對EAE大鼠防治作用的機(jī)制，為其治療多發(fā)性硬化（MS）尋找理論依據(jù)。方法：將6-7周齡、體重180-220g的雌性Wistar實(shí)驗(yàn)大鼠50只按每組10只的數(shù)量隨機(jī)分成5組。以豚鼠脊髓勻漿（GPSCH）作為致敏抗原，完全福氏佐劑（CFA）作為抗原佐劑，兩者混合后制成致敏劑對隨機(jī)選出的4組大鼠進(jìn)行致敏后建立EAE模型，并設(shè)為EAE對照組，低、中、高劑量MAT組(MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組)，剩余1組為正常對照組。自造模當(dāng)日起，正常對照組和EAE對照組不做任何處理常規(guī)飼養(yǎng)，MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組連續(xù)15日分別應(yīng)用MAT膠囊50mg／kg·d、100mg／kg·d、200mg／kg·d劑量灌胃一次。造模后需每日定時(shí)觀察各組Wistar實(shí)驗(yàn)大鼠的臨床表現(xiàn)如精神飲食、體重變化、肢體活動等以確定發(fā)病潛伏期、進(jìn)展期，并進(jìn)行高峰期神經(jīng)功能障礙評分。未發(fā)病的大鼠觀察1月后處死，發(fā)病的EAE大鼠以連續(xù)3天觀察神經(jīng)功能障礙評分未加重，或出現(xiàn)嚴(yán)重共濟(jì)失調(diào)、肢體完全癱瘓、瀕死的時(shí)間作為實(shí)驗(yàn)終止時(shí)間。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)終止時(shí)留取大鼠外周靜脈血、腦組織等保存待檢測。通過病理檢查、ELISA等檢測方法，觀察大鼠發(fā)病高峰期腦組織炎癥病理改變及腦組織勻漿中Th1、Th2、Th17代表性細(xì)胞因子濃度變化和靜脈血髓鞘堿性蛋白(MBP)濃度、T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD8+）比例變化。根據(jù)EAE和MS的免疫機(jī)制選定γ-干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)分別作為Th1、Th2、Th17代表性細(xì)胞因子。通過SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：1．大鼠發(fā)病情況：(1)臨床表現(xiàn)：正常對照組大鼠精神、飲食、睡眠及活動同平時(shí),未見有發(fā)病表現(xiàn)。EAE大鼠造模后不同程度出現(xiàn)毛色暗淡、精神差、飲食睡眠下降、活動減少、尾巴無力、肢體癱瘓、大小便失禁，，甚至抽搐死亡等現(xiàn)象。各MAT組大鼠的臨床表現(xiàn)較EAE對照組輕，其中以MAT-H組最輕。(2)發(fā)病潛伏期：EAE大鼠發(fā)病潛伏期時(shí)間以EAE對照組最短，為9.30±0.94天；MAT-H組最長，為16.60±0.97天。與EAE對照組相比，各MAT組潛伏期時(shí)間延長顯著(P0.01)；MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠潛伏期時(shí)間依次延長，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。(3)疾病進(jìn)展期：各組EAE大鼠疾病進(jìn)展期時(shí)間以EAE組最長，為7.20±1.14天；MAT-H組最短，為2.90±0.74天。與EAE對照組相比,各MAT組進(jìn)展期時(shí)間顯著變短(P0.01)；MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠進(jìn)展期時(shí)間依次縮短，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。(4)發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分：疾病高峰期各組EAE大鼠神經(jīng)功能障礙評分以EAE對照組最高，為3.70±0.95分；MAT-H組最低，為2.00±0.82分。與EAE對照組相比，各MAT組神經(jīng)功能障礙評分顯著下降(P0.01、P0.05)；MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠神經(jīng)功能障礙評分依次降低，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(5)發(fā)病癥狀嚴(yán)重程度及死亡率：各組EAE大鼠發(fā)病癥狀及死亡率以EAE對照組最高，MAT-H組最低；與EAE對照組相比，各MAT組發(fā)病癥狀及死亡率降低(P0.01、P0.05)。MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠發(fā)病癥狀及死亡率依次降低，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）病理變化：(1)腦組織病理變化：各組EAE大鼠腦組織均可見數(shù)量不等的炎性細(xì)胞，對腦組織及血管的浸潤程度不同，以EAE對照組最為明顯，MAT-H組最輕，正常對照組未見異常。EAE對照組腦組織病理切片改變典型，表現(xiàn)為散在白質(zhì)炎性脫髓鞘及少突膠質(zhì)細(xì)胞破壞，嚴(yán)重可見軸索結(jié)構(gòu)破壞，呈空泡樣缺失。MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠腦組織炎癥病理改變程度依次減輕。(2)腦組織炎癥病理評分：各組EAE大鼠病理評分以EAE對照組最高，為2.9±0.32分；MAT-H組最低，為1.2±0.63分。與EAE對照組相比，各MAT組病理評分降低明顯(P0.01、P0.05)；MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠腦組織炎癥病理評分依次降低，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01、P0.05)。3.大鼠腦組織勻漿中細(xì)胞因子含量變化：與正常對照組腦組織勻漿中IFN-γ、IL-17濃度及IFN-γ/IL-4值相比，EAE對照組、各MAT組其值顯著上升(P0.01)；與EAE對照組相比，各MAT組腦組織勻漿中IFN-γ、IL-17濃度及IFN-γ/IL-4值水平明顯下降(P0.01)。MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠腦組織勻漿中IFN-γ、IL-17濃度及IFN-γ/IL-4值依次下降，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01、P0.05)。與正常對照組腦組織勻漿中IL-4濃度相比，EAE對照組、各MAT組其濃度水平下降明顯(P0.01)；與EAE組相比，各MAT組腦組織勻漿中IL-4濃度水平明顯上升(P0.01)。MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠腦組織勻漿中IL-4濃度依次升高，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。4.大鼠靜脈血中MBP濃度:與正常對照組靜脈血中MBP濃度相比，EAE對照組、各MAT組其濃度水平顯著上升(P0.01)；與EAE對照組相比，各MAT組靜脈血中MBP濃度水平明顯下降(P0.01)。MAT-L組、MAT-M組、MAT-H組大鼠靜脈血中MBP濃度依次下降，各MAT組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01、P0.05)。5.T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+、CD8+）比例變化：與正常對照組大鼠相比，EAE對照組、各MAT組靜脈血中CD4＋、CD8＋淋巴細(xì)胞比例降低（P 0.01、P0.05），CD4＋/CD8＋值升高（P0.05）。與EAE對照組相比，各MAT組靜脈血中CD4＋、CD8＋淋巴細(xì)胞比例升高(P0.01)，CD4＋/CD8＋值降低（P0.01）。與MAT-L組相比，MAT-M組、MAT-H組靜脈血中CD4＋、CD8＋淋巴細(xì)胞比例升高(P0.01、P0.05），CD4＋/CD8＋值降低（P0.01、P0.05）。與MAT-M組相比，MAT-H組靜脈血中CD4＋、CD8＋淋巴細(xì)胞比例升高(P0.01、P 0.05），CD4＋/CD8＋值降低（P0.05）。6．大鼠發(fā)病高峰期免疫生化指標(biāo)與臨床及病理相關(guān)性分析：(1)EAE對照組及各MAT組大鼠腦組織勻漿中IFN-γ水平與發(fā)病潛伏期呈負(fù)相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01）；與疾病進(jìn)展期、高峰期神經(jīng)系統(tǒng)功能受損、腦組織炎癥病理改變呈正相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01）。(2)EAE對照組及各MAT組大鼠腦組織勻漿中IL-4水平與發(fā)病潛伏期呈正相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01、P0.05）；與疾病進(jìn)展期、高峰期神經(jīng)系統(tǒng)功能受損、腦組織炎癥病理改變呈負(fù)相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01、P0.05）。(3)EAE對照組及各MAT組大鼠腦組織勻漿中IL-17水平與發(fā)病潛伏期呈負(fù)相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01、P0.05），與疾病進(jìn)展期、高峰期神經(jīng)系統(tǒng)功能受損、腦組織炎癥病理改變呈正相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01、P0.05）。 結(jié)論：1.EAE大鼠發(fā)病高峰期機(jī)體免疫失去平衡，CD4＋、CD8＋淋巴細(xì)胞比例下降，兩者比值上升；促炎癥因子IFN-γ、IL-17分泌增加，抗炎癥因子IL-4分泌減少；MBP濃度升高。2.MAT具有減輕EAE大鼠的發(fā)病癥狀程度，使發(fā)病潛伏期延長、疾病進(jìn)展期縮短,降低發(fā)病高峰期神經(jīng)系統(tǒng)功能受損，減輕腦組織炎癥細(xì)胞的病理損害作用，其影響程度與MAT劑量大小呈正相關(guān)。3.MAT防治EAE大鼠機(jī)制可能與使CD4＋、CD8＋淋巴細(xì)胞比例上升，兩者比值下降；降低促炎癥因子IFN-γ、IL-17及升高抗炎癥因子IL-4的分泌；使Th1細(xì)胞表達(dá)下降，Th2細(xì)胞表達(dá)升高,維護(hù)Th1/Th2軸平衡等有關(guān)，從而發(fā)揮對EAE大鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用，其調(diào)節(jié)程度與MAT劑量大小呈正相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R744.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2363970