【摘要】：實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是多發(fā)性硬化(MS)的動(dòng)物模型,是由Th1和Th17細(xì)胞介導(dǎo)的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性炎性脫髓鞘疾病。主要累及青壯年,是造成青壯年神經(jīng)系統(tǒng)功能性殘障的主要因素之一。在中樞神經(jīng)系統(tǒng),滲入的自身活化的Th1/Th17(CD4+)細(xì)胞,CD8+T細(xì)胞,巨噬細(xì)胞/樹突狀細(xì)胞,肥大細(xì)胞以及活化的小膠質(zhì)細(xì)胞,會(huì)產(chǎn)生大量的促炎性細(xì)胞因子IFN-γ,IL-17,TNF-α,GM-CSF和IL-23等,促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。針對(duì)其炎性反應(yīng)的特點(diǎn),目前臨床上多發(fā)硬化的治療多以抗炎和免疫調(diào)節(jié)為主。但是,高昂的價(jià)格嚴(yán)重制約了我國多發(fā)硬化患者對(duì)該類藥物的使用。目前我國患者主要采取激素治療的方法,效果不佳且副作用嚴(yán)重。因此,尋找價(jià)格低廉、副作用小的免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)藥物分子用以我國多發(fā)硬化患者的治療顯得尤為迫切。中藥在我國有著長(zhǎng)久的用藥歷史,一些藥用成分也具有較強(qiáng)的抗炎或免疫調(diào)節(jié)的活性,是可能的廉價(jià)免疫抑制或免疫調(diào)節(jié)藥物的來源。因此,本研究選取具有較強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)的中藥單體—丹酚酸B,利用EAE動(dòng)物模型,研究其對(duì)疾病的作用及可能的作用機(jī)制,取得的研究結(jié)果如下:(1)利用200μg MOG35-55免疫8-12周雌性C57BL/6小鼠,小鼠發(fā)病后,每天腹腔注射30 mg/kg的丹酚酸B,以給予腹腔注射同等體積生理鹽水的實(shí)驗(yàn)組為對(duì)照,結(jié)果表明腹腔給予丹酚酸B可有效緩解EAE的嚴(yán)重程度,丹酚酸B組的臨床評(píng)分和發(fā)病率均較對(duì)照組顯著降低,而實(shí)驗(yàn)組的體重則明顯優(yōu)于對(duì)照組;(2)利用HE免疫組化分析顯示,丹酚酸B治療組中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎性浸潤明顯減少。小鼠充分灌注后,利用Percoll密度梯度離心法分離實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組脊髓中的單個(gè)核細(xì)胞,計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)丹酚酸治療組中樞神經(jīng)系統(tǒng)含有更少的單個(gè)核細(xì)胞的浸潤。同時(shí)脊髓冰凍切片后利用免疫熒光染色分析發(fā)現(xiàn)丹酚酸B治療抑制了中樞神經(jīng)系統(tǒng)白細(xì)胞的浸潤;(3)取脊髓冰凍切片,利用GFAP及Iba-1的特異性免疫熒光分析發(fā)現(xiàn),丹酚酸B治療組GFAP陽性細(xì)胞數(shù)以及Iba-1陽性細(xì)胞數(shù)顯著減少,表明丹酚酸B治療減少了EAE小鼠astrogliosis的形成和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的數(shù)量;(4)利用細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀分析顯示丹酚酸B的治療并沒有顯著減少脊髓中CD4+T細(xì)胞的數(shù)量,然而治療組脾臟中CD4+T細(xì)胞的數(shù)量相對(duì)于對(duì)照組顯著降低。進(jìn)一步細(xì)胞內(nèi)染流式分析顯示丹酚酸B治療顯著降低了外周淋巴系統(tǒng)中Th1細(xì)胞的數(shù)量,但對(duì)Th17細(xì)胞的數(shù)量影響不顯著;(5)分離免疫后9天的EAE小鼠脾臟中的單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng),并用20μg/ml的MOG35-55刺激MOG特異性T細(xì)胞的增殖,同時(shí)培養(yǎng)液中分別加入丹酚酸B和PBS,3天后,流式分析Th1和Th17細(xì)胞的所占的比例并收集上清用ELISA分析IFN-γ的釋放,結(jié)果表明丹酚酸B抑制了MOG特異性Th1細(xì)胞的增殖和IFN-γ的釋放。(6)體外誘導(dǎo)致炎性Th1和Th17細(xì)胞,分別建立Th1和Th17細(xì)胞介導(dǎo)的過繼免疫EAE動(dòng)物模型,在細(xì)胞移植后持續(xù)每天一次給予30 mg/kg的丹酚酸B治療,結(jié)果表明,丹酚酸B特異性的緩解了Th1細(xì)胞過繼免疫介導(dǎo)的EAE疾病。上述結(jié)果表明,中藥單體成分丹酚酸B可有效治療Th1細(xì)胞介導(dǎo)的EAE疾病,提示其在MS/EAE的治療中可能發(fā)揮作用,有望基于此開發(fā)出價(jià)格低廉的多發(fā)硬化治療藥物,對(duì)我國該類疾病的有效治療具有重要意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R744.51

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