【摘要】：實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是多發(fā)性硬化(MS)的動物模型,是由Th1和Th17細胞介導的一種中樞神經系統(tǒng)自身免疫性炎性脫髓鞘疾病。主要累及青壯年,是造成青壯年神經系統(tǒng)功能性殘障的主要因素之一。在中樞神經系統(tǒng),滲入的自身活化的Th1/Th17(CD4+)細胞,CD8+T細胞,巨噬細胞/樹突狀細胞,肥大細胞以及活化的小膠質細胞,會產生大量的促炎性細胞因子IFN-γ,IL-17,TNF-α,GM-CSF和IL-23等,促進細胞介導的免疫反應。針對其炎性反應的特點,目前臨床上多發(fā)硬化的治療多以抗炎和免疫調節(jié)為主。但是,高昂的價格嚴重制約了我國多發(fā)硬化患者對該類藥物的使用。目前我國患者主要采取激素治療的方法,效果不佳且副作用嚴重。因此,尋找價格低廉、副作用小的免疫抑制和免疫調節(jié)藥物分子用以我國多發(fā)硬化患者的治療顯得尤為迫切。中藥在我國有著長久的用藥歷史,一些藥用成分也具有較強的抗炎或免疫調節(jié)的活性,是可能的廉價免疫抑制或免疫調節(jié)藥物的來源。因此,本研究選取具有較強免疫調節(jié)的中藥單體—丹酚酸B,利用EAE動物模型,研究其對疾病的作用及可能的作用機制,取得的研究結果如下:(1)利用200μg MOG35-55免疫8-12周雌性C57BL/6小鼠,小鼠發(fā)病后,每天腹腔注射30 mg/kg的丹酚酸B,以給予腹腔注射同等體積生理鹽水的實驗組為對照,結果表明腹腔給予丹酚酸B可有效緩解EAE的嚴重程度,丹酚酸B組的臨床評分和發(fā)病率均較對照組顯著降低,而實驗組的體重則明顯優(yōu)于對照組;(2)利用HE免疫組化分析顯示,丹酚酸B治療組中樞神經系統(tǒng)的炎性浸潤明顯減少。小鼠充分灌注后,利用Percoll密度梯度離心法分離實驗組和對照組脊髓中的單個核細胞,計數(shù)發(fā)現(xiàn)丹酚酸治療組中樞神經系統(tǒng)含有更少的單個核細胞的浸潤。同時脊髓冰凍切片后利用免疫熒光染色分析發(fā)現(xiàn)丹酚酸B治療抑制了中樞神經系統(tǒng)白細胞的浸潤;(3)取脊髓冰凍切片,利用GFAP及Iba-1的特異性免疫熒光分析發(fā)現(xiàn),丹酚酸B治療組GFAP陽性細胞數(shù)以及Iba-1陽性細胞數(shù)顯著減少,表明丹酚酸B治療減少了EAE小鼠astrogliosis的形成和中樞神經系統(tǒng)中活化的小膠質細胞和巨噬細胞的數(shù)量;(4)利用細胞計數(shù)和流式細胞儀分析顯示丹酚酸B的治療并沒有顯著減少脊髓中CD4+T細胞的數(shù)量,然而治療組脾臟中CD4+T細胞的數(shù)量相對于對照組顯著降低。進一步細胞內染流式分析顯示丹酚酸B治療顯著降低了外周淋巴系統(tǒng)中Th1細胞的數(shù)量,但對Th17細胞的數(shù)量影響不顯著;(5)分離免疫后9天的EAE小鼠脾臟中的單個核細胞體外培養(yǎng),并用20μg/ml的MOG35-55刺激MOG特異性T細胞的增殖,同時培養(yǎng)液中分別加入丹酚酸B和PBS,3天后,流式分析Th1和Th17細胞的所占的比例并收集上清用ELISA分析IFN-γ的釋放,結果表明丹酚酸B抑制了MOG特異性Th1細胞的增殖和IFN-γ的釋放。(6)體外誘導致炎性Th1和Th17細胞,分別建立Th1和Th17細胞介導的過繼免疫EAE動物模型,在細胞移植后持續(xù)每天一次給予30 mg/kg的丹酚酸B治療,結果表明,丹酚酸B特異性的緩解了Th1細胞過繼免疫介導的EAE疾病。上述結果表明,中藥單體成分丹酚酸B可有效治療Th1細胞介導的EAE疾病,提示其在MS/EAE的治療中可能發(fā)揮作用,有望基于此開發(fā)出價格低廉的多發(fā)硬化治療藥物,對我國該類疾病的有效治療具有重要意義。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R744.51

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本文編號：2357226