【摘要】：目的研究微小核糖核酸592(miR-592)對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251凋亡的影響。方法首先通過定量聚合酶鏈反應(yīng)分析miR-592在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織和癌旁組織中的表達(dá)變化;隨后向U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-592的擬合物,并通過流式細(xì)胞技術(shù)分析miR-592過表達(dá)對U251細(xì)胞凋亡的影響;通過生物信息學(xué)分析,找到miR-592的潛在靶分子,并通過熒光素酶雙報告實驗以及蛋白免疫印跡法等進(jìn)行驗證;進(jìn)一步,轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞Runx2的下調(diào)si RNA,繪制細(xì)胞的生長曲線,并對U251細(xì)胞的凋亡進(jìn)行分析。結(jié)果定量PCR結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),miR-592在腫瘤組織中明顯低表達(dá)(t=2.752,P=0.013);miR-592過表達(dá)能明顯抑制U251細(xì)胞的生長,與對照組比較,培養(yǎng)36 h、48 h后存在統(tǒng)計學(xué)差異(t=2.127,P=0.031;t=2.284,P=0.026);流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示,miR-592顯著促進(jìn)U251細(xì)胞凋亡:對照組晚期凋亡率為7.2%±0.68%,而轉(zhuǎn)染miR-592組晚期凋亡率為17.47%±1.45%,存在統(tǒng)計學(xué)差異(t=3.294,P=0.007);熒光素酶雙報告實驗以及蛋白免疫印跡法實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-592直接靶向Runx2的3’-UTR來抑制Runx2蛋白的水平;檢測下調(diào)Runx2對U251細(xì)胞生長的影響,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了Runx2 si RNA的細(xì)胞生長明顯比對照組低(t=3.124,P=0.011),流式細(xì)胞技術(shù)對周期的檢測顯示,Runx2下調(diào)表達(dá)上調(diào)U251細(xì)胞的凋亡率。通過繪制腫瘤生長曲線,發(fā)現(xiàn)miR-592過表達(dá)明顯抑制腫瘤的生長。同時,Runx2的下調(diào)表達(dá)也明顯抑制腫瘤的生長。結(jié)論 miR-592通過直接靶向Runx2來誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡,進(jìn)而抑制細(xì)胞的生長。
[Abstract]:Objective to study the effect of microRNA 592 (miR-592) on apoptosis of glioma cell line U251. Methods the expression of miR-592 in gliomas and adjacent tissues was analyzed by quantitative polymerase chain reaction (QPCR). The miR-592 fitting was transfected into U251 cells and the effect of overexpression of miR-592 on the apoptosis of U251 cells was analyzed by flow cytometry. The potential target molecules of miR-592 were identified by bioinformatics analysis and verified by luciferase double report assay and Western blot. Furthermore, the down-regulated si RNA, of U251 cells transfected with Runx2 was used to draw the growth curve of U251 cells, and the apoptosis of U251 cells was analyzed. Results the results of quantitative PCR analysis showed that the expression of miR-592 was significantly lower in tumor tissues (tr 2.752). Overexpression of miR-592 could significantly inhibit the growth of U251 cells. Compared with the control group, there was a significant difference in the growth of U251 cells cultured for 36 h or 48 h (t = 2.127, P = 0.031, P = 2.284, P = 0.026). Flow cytometry analysis showed that miR-592 significantly promoted U251 cell apoptosis: the late apoptosis rate was 7.2% 鹵0.68 in the control group and 17.47% 鹵1.45% in the miR-592 transfection group. P0. 007); The results of luciferase double report assay and Western blot assay showed that miR-592 directly targeted the 3'-UTR of Runx2 to inhibit the level of Runx2 protein. The effect of down-regulation of Runx2 on the growth of U251 cells was detected. The results showed that the growth of U251 cells transfected with Runx2 si RNA was significantly lower than that of the control group (tr 3.124). Flow cytometry showed that the down-regulated expression of Runx2 upregulated the apoptosis rate of U251 cells. By drawing the tumor growth curve, it was found that overexpression of miR-592 significantly inhibited tumor growth. At the same time, the down-regulated expression of Runx2 also significantly inhibited the growth of tumor. Conclusion miR-592 can directly target Runx2 to induce glioma cell apoptosis and then inhibit the growth of glioma cells.
【作者單位】： 濱州市中心醫(yī)院腫瘤科;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒外一科;
【分類號】：R739.41

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本文編號：2351107