發(fā)布時(shí)間：2018-11-21 13:20

【摘要】：目的：圍產(chǎn)期窒息引起的新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)可導(dǎo)致幸存新生兒出現(xiàn)嚴(yán)重的認(rèn)知障礙,其機(jī)制可能與缺氧缺血導(dǎo)致的髓鞘化障礙有關(guān),但是,HIE后髓鞘化障礙的發(fā)生機(jī)制不清。本課題從微管相關(guān)蛋白(MAPs)、離子型三磷酸腺苷(ATP)受體與米諾環(huán)素的神經(jīng)保護(hù)作用入手,研究系統(tǒng)性缺氧后新生鼠腦tau蛋白及其磷酸化水平、谷氨酸與髓鞘堿性蛋白(MBP)的動(dòng)態(tài)變化,探討ATP受體P2X4亞型在HIE后遠(yuǎn)期行為異常中的作用機(jī)制以及米諾環(huán)素對(duì)HIE神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)理。方法：1POd SD大鼠系統(tǒng)性缺氧3.5h,建立新生鼠HIE模型。隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NG)、缺氧組(Hy)、吡多醛磷酸鹽-6-含氮(苯-2,4-二磺酸)四鈉鹽水合物組(PPADS選擇性阻斷P2X1-3,5-7受體lOmg/kg ip, Hy P)和2’,3’-0-(2,4,6-三硝基苯基)腺苷5’-三磷酸鹽組(TNP-ATP阻斷P2X1-7受體2mg/kg ip, Hy T),米諾環(huán)素組(45mg/kg ip,之后減至22.5mg/kg ip,連續(xù)6天,Hy M)。2.P60d大鼠進(jìn)行T2加權(quán)成像(T2WI)及彌散張量成像(DTI),觀察大鼠腦白質(zhì)及髓鞘發(fā)育的情況。3.透射電鏡(TEM)觀察大鼠胼胝體(CC)及海馬CAl超微結(jié)構(gòu)的變化。4.經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳檢測(cè)大鼠MBP,總tau蛋白及Thr205、Thr231、Ser396、Ser404、Tyr18位點(diǎn)磷酸化水平的動(dòng)態(tài)變化。5.經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC/MS/MS)檢測(cè)大鼠腦內(nèi)谷氨酸水平的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果：1.T2WI：缺氧后大鼠出現(xiàn)腦室擴(kuò)大,側(cè)腦室三角區(qū)T2信號(hào)增高。CC變薄,白質(zhì)丟失。DTI:CC尤其是胼胝體中部(CCM) (CC p0.01,CCM p0.001 vs NG)各向異性分?jǐn)?shù)(FA)明顯下降。阻斷P2X4受體／米諾環(huán)素干預(yù)后上述病變改善,CC及CCMFA值升高(Hy T vs Hy:CC p0.01, CCM p0.001; Hy M vs Hy:CCp0.01, CCMp0.01)。2.TEM：缺氧導(dǎo)致大鼠CC少突膠質(zhì)細(xì)胞(OLs)壞死(4h、1d),髓鞘分層、溶解(14d、30d),海馬CA1神經(jīng)元受損、神經(jīng)氈水腫。阻斷P2X4受體／米諾環(huán)素干預(yù)后髓鞘形態(tài)及完整性得到修復(fù)。3. SDS-PAGE電泳：OMBP：正常大鼠在出生后早期(4h、1d)腦室周圍區(qū)域即出現(xiàn)MBP表達(dá)。其表達(dá)在缺氧后3d下降,4h、7d和14d增高(p0.05 vsNG)。阻斷P2X4受體可抑制系統(tǒng)性缺氧后7d MBP水平(p0.05 vs Hy),但是PPADS/米諾環(huán)素干預(yù)不能影響MBP的病理性表達(dá)(p0.05 vs Hy)。②總tau蛋白及其磷酸化水平：腦室周圍,總tau蛋白在缺氧后7d和14d增高(p0.05 vs sNG),P2X4受體阻斷不能抑制其病理性表達(dá)(p0.05 vs Hy)；pT205在缺氧后4h、3d和14d增高(p0.05 vs NG), TNP-ATP (p0.05 vs Hy)及PPADS (p0.01 vs Hy)治療可抑制14d時(shí)pT205水平;pT231在缺氧后4h、1d下降,7d增高(p0.05 vsNG),阻斷P2X4受體可抑制7d時(shí)pT231水平(p0.05 vs Hy)；pS396在缺氧后7d增高(p0.05vsNG),阻斷P2X4受體可抑制其病理性磷酸化(p0.05 vs Hy)。海馬,總tau蛋白在3d升高,7d降低(p0.05 vsNG)；pT231在3d降低,7d增高(p0.05 vsNG),pT205及pS396水平未發(fā)現(xiàn)異常(p0.05 vsNG)。P2X4受體阻斷不能抑制海馬tau蛋白病理性表達(dá)及磷酸化(p0.05 vs NG)。 Ser404和Tyr18在各觀察時(shí)間點(diǎn)未出現(xiàn)病理性磷酸化(p0.05 vs NG)。米諾環(huán)素不能抑制系統(tǒng)性缺氧后腦tau蛋白病理性表達(dá)及磷酸化(p0.05 vs Hy)。本研究經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析還發(fā)現(xiàn),缺氧后總tau蛋白與MBP病理性表達(dá)間存在相關(guān)性(p0.01,r=0.5865)。4LC/MS/MS:缺氧后4h及1d腦室周圍谷氨酸水平增高(p0.05 vs NG)。P2X4受體阻斷可下調(diào)谷氨酸水平(p0.05 vs Hy),而阻斷其它亞型P2X受體僅在4h對(duì)谷氨酸有抑制作用(p0.051 vs Hy)。米諾環(huán)素對(duì)系統(tǒng)性缺氧后腦內(nèi)谷氨酸水平?jīng)]有抑制作用(p0.05 vs Hy)結(jié)論：1.HIE后,P2X4受體活化引起大鼠腦髓鞘化障礙。2.HIE后tau蛋白病理性磷酸化集中于腦室周圍區(qū)域,為該區(qū)域的選擇性易損現(xiàn)象提供了新的依據(jù)。3.Tau蛋白病理性表達(dá)及磷酸化是新生鼠HIE后髓鞘化障礙發(fā)生的可能機(jī)制。4.P2X4活化介導(dǎo)大鼠腦室周圍谷氨酸上調(diào),誘導(dǎo)tau蛋白的病理性磷酸化,進(jìn)而導(dǎo)致HIE后大鼠髓鞘化損傷及遠(yuǎn)期行為異常。5.米諾環(huán)素對(duì)HIE后髓鞘損傷具有修復(fù)作用,但并非通過抑制谷氨酸以及tau蛋白病理性磷酸化途徑實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742

【共引文獻(xiàn)】

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10 石計(jì)朋;唐成和;尚云;曹銀利;高俊;楊衛(wèi)紅;;硫化氫和胱硫醚β合酶在腦室周圍白質(zhì)軟化新生大鼠腦組織中的表達(dá)[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年01期

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本文編號(hào)：2347075