【摘要】：研究背景： 有關(guān)廢用性肌萎縮的研究機制表明,蛋白質(zhì)降解增加和合成的減少被認(rèn)為是肌萎縮的發(fā)生機制,近年來蛋白質(zhì)水解途徑已被引起廣泛的關(guān)注。課題組實驗發(fā)現(xiàn),廢用條件下比目魚肌會出現(xiàn)胞漿鈣超載,進而啟動泛素途徑將蛋白質(zhì)降解。因此我們認(rèn)為細(xì)胞胞漿鈣超載是引起蛋白質(zhì)降解的因素之一。另一方面,有人認(rèn)為,骨骼肌胞漿鈣超載與細(xì)胞凋亡之間有著密切的聯(lián)系。因此本實驗選用冬眠黃鼠腓腸肌肌纖維鈣離子濃度和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因為指標(biāo),從骨骼肌胞漿鈣水平和細(xì)胞凋亡水平探討冬眠黃鼠抗肌萎縮的重要原因。 研究目的： 1.通過對冬眠過程中達烏爾黃鼠(Spermophilus dauricus)腓腸肌肌纖維內(nèi)Ca2+濃度的檢測,研究廢用對冬眠動物胞漿鈣水平的影響,進而探討冬眠動物骨骼肌抗廢用性肌萎縮的可能機制； 2.通過測定冬眠不同時期達烏爾黃鼠腓腸肌琥珀酸脫氫酶(Succinodehydrogenase,SDH)活性的變化,從氧化能力的角度研究冬眠動物骨骼肌抗廢用性肌萎縮的可能機制； 3.通過測定冬眠不同時期達烏爾黃鼠腓腸肌促凋亡基因Bax mRNA和凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的相對表達量和其比率的變化,從細(xì)胞凋亡水平來探冬眠動物骨骼肌抗廢用性肌萎縮的可能機制； 4.通過測定后肢去負(fù)荷14d大鼠腓腸肌肌纖維胞漿Ca2+濃度、琥珀酸脫氫酶(Succinodehydrogenase, SDH)活性、促凋亡基因Bax mRNA和凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的相對表達量以及其比率的變化,探討廢用性肌萎縮的可能機制及川芎嗪對廢用性肌萎縮的作用機制。 研究方法： 1.腓腸肌肌纖維鈣離子濃度通過激光掃描共聚焦技術(shù)測定； 2.腓腸肌琥珀酸脫氫酶(SDH)的活性使用分光光度計測定； 3.通過使用實時熒光定量PCR技術(shù)測定大鼠腓腸肌Bax基因和Bcl-2基因mRNA的相對表達水平。 研究結(jié)果： 1.與冬眠前組(Pre-H)相比,冬眠中組(H)和激醒組(IB-A)腓腸肌肌纖維Ca2+濃度分別升高了49.0%(P0.05)和196.4%(P0.01)。與冬眠中組(H)相比,激醒組(IB-A)腓腸肌肌纖維Ca2+濃度升高了99.0%(P0.01)。與激醒組(IB-A)相比,出眠組(Post-H)腓腸肌Ca2+濃度降低了164.5%(P0.01)。 2.與冬眠前組(Pre-H)相比,冬眠中組(H)、激醒組(IB-A)和出眠組(Post-H)黃鼠腓腸肌SDH均明顯升高,分別升高了46.1%、49.1%和34.5%(P0.01)。 3.與冬眠前組(Pre-H)相比,冬眠中組(H)和激醒組(IB-A)促凋亡基因Bax mRNA相對表達量分別升高了47.6%和56.0%(P0.05),抗凋亡基因Bcl-2mRNA相對表達量分別升高了80.5%和83.2%(P0.05),出眠組(Post-H)黃鼠腓腸肌Bax/Bcl-2比率降低了22.2%(P0.05)。 4.與正常組(CON)相比,大鼠后肢去負(fù)荷(HLU+W)14d后,腓腸肌肌纖維Ca2+濃度明顯升高了189.6%(P0.01)；灌胃川芎嗪組(HLU+Tmp)比后肢去負(fù)荷組(HLU+W)大鼠腓腸肌Ca2+濃度顯著降低了119.3%(P0.01)。 5.與正常組(CON)相比,大鼠后肢去負(fù)荷(HLU+W)14d后,腓腸肌SDH活性明顯下降了24.3%(P0.05)。 6.大鼠后肢去負(fù)荷(HLU+W)14d后,其腓腸肌促凋亡基因Bax mRNA和抗凋亡基因Bcl-2mRNA的相對表達量及Bax/Bcl-2比率分別升高了140.1%、70.9%和37.5%(P0.01)；川芎嗪灌胃組(HLU+Tmp)的促凋亡基因Bax mRNA和抗凋亡基因Bcl-2mRNA的相對表達量及Bax/Bcl-2的比率比正常組分別升高了106%(P0.01)、42.3%(P0.05)和42.0%(P0.01)。 研究結(jié)論： 1.冬眠期間黃鼠腓腸肌鈣離子水平逐漸升高,陣間激醒時達到最高,但出眠時腓腸肌Ca2+水平下降至冬眠前水平,這說明胞漿鈣超載可能是誘發(fā)陣間激醒的重要因素之一,陣間激醒的運動可能是其恢復(fù)胞漿鈣穩(wěn)態(tài)的重要機制之一。 2.冬眠期間黃鼠腓腸肌SDH活性顯著升高,冬眠期間氧化代謝能力的增強可能是其抗廢用性肌萎縮的機制之一。 3..冬眠期間黃鼠腓腸肌促凋亡基因Box mRNA和抗凋亡基因Bcl-2mRNA均升高,但抗凋亡基因的升高遠(yuǎn)大于促凋亡基因,冬眠期間抗凋亡基因Bcl-2mRNA表達的升高可能是其對抗廢用性肌萎縮的重要機制。 4.大鼠后肢去負(fù)荷14d后,腓腸肌肌纖維出現(xiàn)胞漿鈣超載,氧化能力降低,出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,川芎嗪可以抑制后肢去負(fù)荷所產(chǎn)生的胞漿鈣超載現(xiàn)象。
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【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：Q78;R746.4

【參考文獻】

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本文編號：2328304