發(fā)布時間：2018-10-25 08:07

【摘要】：缺血性腦中風(fēng)(ischemic stroke)又稱腦缺血,是腦部動脈因痙攣或栓塞導(dǎo)致該動脈供血區(qū)的血流暫時或永久地減少所致。目前已研究證實的腦缺血后谷氨酸神經(jīng)細(xì)胞毒、鈣超載,細(xì)胞凋亡、氧自由基及線粒體損傷等級聯(lián)反應(yīng)是導(dǎo)致神經(jīng)元壞死的病理生理機(jī)制。鐵是人體內(nèi)必需的化學(xué)元素之一,是神經(jīng)遞質(zhì)及髓鞘蛋白合成的重要酶的輔基。鐵離子也是一種催化劑,顯著增加活性氧(reactive oxygen species, ROS)的濃度。研究表明腦缺血后活性氧及脂質(zhì)過氧化導(dǎo)致神經(jīng)元損傷。因此,鐵代謝失衡作為腦缺血損傷的新機(jī)制具有重要的研究意義。益氣活血中藥腦泰方提取物(NTE)具有良好的腦缺血治療臨床效果。方中選用黃芪為君藥,有效成分包括：黃芪甲苷、黃芪黃酮。黃芪借其力專、性走,周行全身,大補脾胃元氣,令氣旺則血活,血活則瘀除,以治其本；川芎活血行氣,氣行則血行,是為臣藥,其活性成分為川芎嗪、阿魏酸；地龍有效成分地龍肽、僵蠶則含蛋白質(zhì)、促蛻皮甾醇、白僵茵黃色素等。地龍、僵蠶具有通經(jīng)活絡(luò),化痰熄風(fēng)的功效,兩者均為佐藥,諸味配合,共奏益氣活血通絡(luò),祛風(fēng)化痰之效。腦缺血前期研究中,我們通過蛋白芯片技術(shù)檢測到模型大鼠術(shù)后24小時內(nèi)出現(xiàn)血清及腦脊液中轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin, TF)濃度明顯升高,而腦泰方提取物灌胃后人血紅素氧合酶(Human heme oxygenase, HO-1)表達(dá)上調(diào)。因此,腦泰方提取物是否可通過調(diào)節(jié)腦缺血后鐵平衡,減輕神經(jīng)元損傷值得探討。 目的： 1.明確腦缺血后不同時間點各鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白的變化,闡明缺血性腦中風(fēng)后鐵代謝失衡是引起腦損傷的病理機(jī)制之一。 2.闡明益氣活血中藥腦秦方調(diào)節(jié)腦缺血后神經(jīng)元鐵代謝失衡的新機(jī)制。 3.離體實驗揭示益氣活血中藥腦泰方通過PI3K及p38MAPK信號通路,調(diào)節(jié)鐵代謝失衡,對腦缺血后神經(jīng)元的保護(hù)作用。 方法： 選擇Sprague-Dawley(SD)大鼠通過大腦中動脈閉塞(MCAO)線栓法制備腦缺血模型。 1.電鏡觀察神經(jīng)元內(nèi)鐵離子顆粒,采用免疫組化及PCR法檢測海馬CA2區(qū)各鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白TFR、Fpn、FLVCR.BCRP不同時間點的表達(dá)； 2.中藥NTE干預(yù)后,各組通過神經(jīng)功能學(xué)評分、HE染色、TTC染色、尼氏染色檢測神經(jīng)功能恢復(fù)及觀察神經(jīng)元損傷情況,電鏡觀察神經(jīng)元內(nèi)鐵離子顆粒分布情況,采用免疫組化及PCR、WB法檢測各鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白TFR、DMT1、Fpn、FLVCR、BCRP； 3.離體實驗選用18d胎齡SD大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng),中藥NTE干預(yù)后,通過MTT法檢測比較各組神經(jīng)元的存活率,PI3K及p38MAPK抑制劑干預(yù)后,免疫熒光檢測評價FLVCR和Fpn的表達(dá)。 結(jié)果： 1.腦缺血后鐵樣顆粒聚集及各鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白的動態(tài)表達(dá)： (1)電鏡下MCA0術(shù)后神經(jīng)元內(nèi)鐵樣顆粒聚集。 (2)非血紅素鐵轉(zhuǎn)運蛋白TFR及Fpn的表達(dá)：缺血后第12h,TFR表達(dá)明顯增加,并在24h和72h維持高水平(P0.05)。Fpn于缺血后12h達(dá)到峰值,24h和72h持續(xù)下降(P0.05)。 (3)血紅素鐵轉(zhuǎn)運蛋白FLVCR及BCRP的表達(dá)：腦缺血后第2h、6h、12h、24h海馬CA2區(qū)FLVCR高表達(dá),72h FLVCR表達(dá)明顯降低(P0.05)。BCRP的表達(dá)2h、6h較高,12h、24h、72h表達(dá)明顯降低(P0.05)。 2.腦泰方提取物干預(yù)對各鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白的影響： (1)電鏡下腦泰方各劑量組神經(jīng)元內(nèi)鐵樣顆粒聚集較少。 (2)非血紅素鐵轉(zhuǎn)運蛋白TFR及Fpn的表達(dá)：腦泰方高劑量組神經(jīng)行為學(xué)評分較模型組明顯降低,梗死面積相對減小,且NTE高劑量組尼氏體含量較多,胞核較清晰顯示,缺血海馬CA2區(qū)TFR及TFR-mRNA表達(dá)明顯降低(P0.05),Fpn及Fpn-mRNA的表達(dá)明顯增高(P0.05)。 (3)血紅素鐵轉(zhuǎn)運蛋白FLVCR及BCRP的表達(dá)：各腦泰方組FLVCR及FLVCR-mRNA的表達(dá)增高(P0.05),BCRP表達(dá)無明顯改變。 3.離體實驗揭示腦泰方對神經(jīng)元的保護(hù)及鐵代謝的調(diào)節(jié)： (1)糖氧剝奪(OGD)后不同劑量腦泰方組與缺糖缺氧組比較,神經(jīng)元存活率增強。 (2)NTE高劑量+缺糖缺氧組中,P13K抑制劑加入,Fpn與FLVCR表達(dá)減少。p38MAPK抑制劑加入后,Fpn表達(dá)減少。 結(jié)論： 1.鐵代謝失衡可能是腦缺血損傷發(fā)病的新機(jī)制,各鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白TFR.DMT1、FPn.FLVCR及BCRP在腦神經(jīng)元鐵跨膜轉(zhuǎn)運中發(fā)揮作用。 2.抑制鐵的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運,促進(jìn)鐵外排,可能是腦泰方減輕腦缺血后神經(jīng)元損傷的新機(jī)制。 3.腦泰方可能是通過PI3K及p38MAPK的信號通路調(diào)節(jié)腦缺血后Fpn的表達(dá)；通過PI3K信號通路調(diào)節(jié)FLVCR的表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 胡國恒;祝美珍;;活血化瘀法防治腦缺血損傷的理論探討[J];中華中醫(yī)藥雜志;2008年06期

2 黨紅梅,馬萬云,韓慧婉;川芎嗪對腦缺血下大鼠紋狀體區(qū)痕量氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報;2005年10期

3 吳宏偉;高健;李韶菁;唐力英;許海玉;唐仕歡;楊洪軍;;基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的氨基酸代謝組學(xué)方法研究黃芪注射液治療腦缺血[J];分析化學(xué);2013年03期

4 金竹青;;活絡(luò)效靈丹通過抑制腦組織炎癥反應(yīng)對缺血性腦損傷的保護(hù)作用[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2013年09期

5 陳敏;朱惠斌;葛金文;陳懿;劉吉勇;;腦泰方對腦缺血再灌注大鼠血管新生作用的實驗研究[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2010年01期

6 廖君;葛金文;;鐵跨膜轉(zhuǎn)運蛋白與腦神經(jīng)疾病的相關(guān)性研究進(jìn)展[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2011年11期

7 沙杜鵑;李啟明;李瑾;朱震寒;張均;;β-七葉皂甙鈉對腦缺血小鼠腦組織白介素-1β、水通道蛋白-4表達(dá)及腦梗死體積和腦水腫的影響[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2011年04期

8 段小花;代蓉;李秀芳;段為剛;吳盛友;林青;;天麻酚類成分對腦缺血模型大鼠海馬一氧化氮和一氧化氮合酶的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2011年07期

9 張宏偉;孫偉倫;李鳳;于曉風(fēng);曲紹春;睢大{|;;人參皂苷Rb_3對大鼠實驗性腦缺血的保護(hù)作用[J];人參研究;2013年03期

10 何正光;陳剛;�；埒P;葉蘭;徐曉玉;;葛根素注射液對大鼠腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中國藥理學(xué)通報;2011年08期

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本文編號：2293124