【摘要】：目的觀察miR-145對大鼠腦動脈血管平滑肌細胞(VSMC)增殖和遷移的影響,并探討其作用機制。方法利用組織貼塊法分離大鼠腦基底動脈VSMC,將細胞分為3組,對照組轉染空載體;miR-145組轉染miR-145;miR-145+MMP-9組轉染miR-145后再轉染MMP-9。采用q PCR方法檢測各組MMP-9 mRNA表達,Western blotting法檢測MMP-9蛋白表達。向三組細胞中加入50 ng/mL TNF-α刺激細胞增殖,采用CCK8法檢測細胞增殖情況,Transwell小室檢測細胞遷移能力。根據Target Scan和miRanda數據庫預測,野生型MMP-9的3'-UTR區(qū)域含有miR-145靶向結合片段,采用雙熒光素酶報告基因檢測驗證miR-145和MMP-9的靶向關系。結果 miR-145組MMP-9 mRNA和蛋白表達均低于對照組(P均0.05),miR-145+MMP-9組MMP-9 mRNA和蛋白表達均高于miR-145組(P均0.01)。加入TNF-α處理后,miR-145組的細胞增殖OD值低于對照組,miR-145+MMP-9組的細胞增殖OD值高于miR-145組(P均0.01);miR-145組細胞遷移數低于對照組,miR-145+MMP-9組細胞遷移數高于miR-145組(P均0.01)。雙熒光素酶報告檢測結果顯示,miR-145能夠抑制野生型MMP-9的熒光素酶活性(P0.01),但不能抑制突變型MMP-9的熒光素酶活性。結論 miR-145能夠通過下調MMP-9抑制TNF-α誘導的大鼠腦動脈VSMC增殖和遷移。
[Abstract]:Objective to observe the effect of miR-145 on the proliferation and migration of vascular smooth muscle cells (VSMC) in rat cerebral artery and to explore its mechanism. Methods VSMCs were isolated from rat basilar artery by tissue patch method. The cells were divided into three groups. The control group was transfected with miR-145 and then MMP-9 was transfected with miR-145. The expression of MMP-9 mRNA in each group was detected by Q PCR method. Western blotting was used to detect the expression of MMP-9 protein. 50 ng/mL TNF- 偽 was added to the three groups to stimulate cell proliferation. The cell proliferation was detected by CCK8 assay and the cell migration ability was detected by Transwell chamber. According to the prediction of Target Scan and miRanda database, the 3'-UTR region of wild type MMP-9 contains miR-145 targeted binding fragment. Double luciferase reporter gene detection was used to verify the targeting relationship between miR-145 and MMP-9. Results the expression of MMP-9 mRNA and protein in miR-145 group was lower than that in control group (P0. 05). The expression of MMP-9 mRNA and protein in MMP-9 group was higher than that in miR-145 group (P0. 01). After treatment with TNF- 偽, the OD value of cell proliferation in the miR-145 group was lower than that in the control group (P 0.01). The cell migration number in the miR-145 group was lower than that in the miR-145 group (P 0.01). The results of double luciferase report showed that miR-145 could inhibit the luciferase activity of wild-type MMP-9 (P0.01), but could not inhibit the luciferase activity of mutant MMP-9. Conclusion miR-145 can inhibit the proliferation and migration of rat cerebral artery VSMC induced by TNF- 偽 by down-regulating MMP-9.
【作者單位】： 南華大學附屬南華醫(yī)院;
【基金】：湖南省醫(yī)藥衛(wèi)生科研計劃項目(C2016087)
【分類號】：R743.3

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