【摘要】：目的：本研究通過建立DEACMP大鼠模型，應用Morris水迷宮實驗、組織病理學、免疫組織化學染色法、TUNEL細胞凋亡檢測法等技術檢測大鼠行為學和病理形態(tài)學變化，探討HIF-1α及VEGF在相應動物模型中的表達變化，確定其在DEACMP發(fā)病機制中的作用，為進一步研究DEACMP提供新的思路和方法，為臨床治療提供實驗依據(jù)。方法：將78只健康雄性成年SD大鼠（SPF級）隨機分為三組：空白對照組（BC組）18只、空氣對照組（AC組）30只、急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病組（CO組）30只。其中CO組采用腹腔注射法建立急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病大鼠模型，AC組采用腹腔注射法注射等量空氣，BC組不進行任何手術（腹腔注射）操作。按中毒后1d、3d、7d、14d、21d、28d六個時間點將三個組各分為6個亞組，其中CO組和AC組每個亞組5只大鼠，BC組每個亞組3只大鼠。各組大鼠在造模前通過Morris水迷宮實驗測試記憶力、定向力等認知功能，7d、14d、21d、28d時間點亞組的大鼠在處死取腦前也進行Morris水迷宮實驗以測試認知功能改變。各組大鼠的腦組織切片均應用HE染色法觀察大鼠海馬區(qū)病理變化，應用免疫組化染色法檢測其海馬區(qū)HIF-1α、VEGF蛋白的表達，用TUNEL細胞凋亡檢測法檢測其海馬區(qū)錐體細胞凋亡情況。運用SPSS17.0軟件對檢測結果進行統(tǒng)計學分析。結果：1.DEACMP大鼠模型的建立：（1）CO組大鼠腹腔注射CO氣體后出現(xiàn)明顯的中毒反應。表現(xiàn)為染毒后5~15min陸續(xù)出現(xiàn)煩躁、多動，行為表現(xiàn)輕度活躍；染毒20min后大鼠開始出現(xiàn)拒食少動，抖動，呼吸急促，呼吸幅度增大，口唇鼻黏膜和下腹部、肢端皮膚呈現(xiàn)明顯的櫻桃紅色，及行動遲緩，步態(tài)異常等。部分大鼠出現(xiàn)躁狂、撞籠、抽搐、角弓反張，繼而四肢癱軟、昏迷。給予通風、保暖，約36.7％大鼠在染毒24h內死亡，存活大鼠約8小時后完全蘇醒，觀察至染毒后第28天，部分大鼠出現(xiàn)反應偏遲鈍，進食量減少，活動減少等表現(xiàn)，其余大鼠日常行為活動未見明顯異常。（2）AC組大鼠腹腔注射等量空氣后未見明顯行為學異常，AC組大鼠無死亡。2.Morris水迷宮實驗結果：（1）定位航行實驗：三個組平均逃避潛伏期在染毒前和染毒后第7d無顯著差別，無統(tǒng)計學意義（P0.05）；染毒后第14d、21d、28d時，CO組平均逃避潛伏期均長于BC、AC組，有統(tǒng)計學差異（P0.05)，BC組與AC組間無統(tǒng)計學差異（P0.05）。（2）空間探索實驗：1）第IV象限（平臺所在象限）游泳時間/總時間：染毒前、染毒后第14d三個組第IV象限游泳時間/總時間無統(tǒng)計學差異（P0.05）；染毒后第7d、21d、28d時CO組比AC、BC組小，有統(tǒng)計學差異（P0.05)；BC組、AC組在各時間點上無統(tǒng)計學差異（P0.05）；CO組隨時間變化呈降低趨勢。2）穿越平臺次數(shù)：各時間點，三個組經(jīng)過平臺次數(shù)無統(tǒng)計學差異（P0.05）；各組內，，不同時間點經(jīng)過平臺次數(shù)無統(tǒng)計學差異（P0.05）；28d時CO組有低于其余組的趨勢；CO組隨時間變化，經(jīng)過平臺次數(shù)有降低趨勢。3.腦組織病理形態(tài)學改變：HE染色標本上，（1）各時間點的CO組大鼠腦內有廣泛的病理改變，海馬CA1區(qū)出現(xiàn)大量不同程度地神經(jīng)元變性壞死。主要表現(xiàn)為神經(jīng)元胞體腫脹、皺縮，細胞數(shù)目略減少，細胞變形呈梭型或三角形，細胞層變薄、細胞間隙擴大，細胞核固縮、核仁模糊、核周出現(xiàn)空暈，胞質與胞核界限不清，細胞結構紊亂，在變性壞死的神經(jīng)元周圍可見不同程度地膠質細胞增生浸潤。(染毒后第21d亞組大鼠腦切片中還可以見到壞死神經(jīng)元被吸收后所留下的龕影,周圍亦可見到膠質細胞的蹤跡。)（2）BC與各時間點的AC組大鼠海馬區(qū)的神經(jīng)元大小基本正常，核膜完整，核仁清晰，胞核呈淡藍色，著色均勻，細胞器完整。其中，海馬區(qū)CA1區(qū)有兩到三層錐體細胞，排列整齊致密，胞核飽滿、邊界清晰、尼氏小體豐富，核仁深染、清晰。4.HIF-1α及VEGF蛋白的免疫組化染色表達：（1）HIF-1α表達：HIF-1α在BC組及AC組中表達少，CO組在染毒后第1d表達明顯升高，第3d達到高峰，然后逐漸降低，至28d時仍有較高表達，CO組HIF-1α表達量在各時間點均高于BC組及AC組，有統(tǒng)計學差異（P0.01）。（2）VEGF表達：VEGF在BC組及AC組中表達少；CO組除第14d外，其余各時間點上VEGF的表達量均高于BC和AC組，有統(tǒng)計學差異(P0.05)；CO組VEGF表達量從染毒后第1d開始迅速升高，在第3d達最高峰后逐漸降低，至第21d時再次顯著升高形成次高峰，繼而又持續(xù)降低，至第28d時VEGF表達量接近第1天水平，表現(xiàn)為增高→降低→增高→降低的動態(tài)變化趨勢。5.TUNEL細胞凋亡檢測結果：CO組于染毒后第1d時檢測出大腦海馬CA1區(qū)有少量神經(jīng)細胞凋亡，第3d時開始增多，第7~14天達到高峰（第7天為最高峰），第28d時仍有少量凋亡，凋亡指數(shù)較BC組及AC組明顯增高，有統(tǒng)計學差異（P0.01)。結論：1.采用改良式多次間隔腹腔注射CO法制作大鼠DEACMP模型，設備要求低，操作簡便易掌握，干擾因素少，CO用量少、精確，并且與人體DEACMP的病理生理變化過程相近，是研究DEACMP較為理想的一種動物模型。2.Morris水迷宮實驗通過定位航行訓練和空間探索測試以明確大鼠學習記憶能力和空間位置記憶能力變化，能客觀評價大鼠認知行為功能，是初步判定DEACMP大鼠模型是否成功建立的一種較為可靠的依據(jù)。3.急性一氧化碳中毒后HIF-1α表達的增高可促進VEGF的表達，啟動細胞凋亡信號傳導通路，從而促進細胞凋亡，參與了DEACMP的發(fā)病。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of HIF - 1偽 and VEGF in the hippocampus of rats with acute carbon monoxide poisoning by intraperitoneal injection .
After 20 minutes of exposure , the rats began to show signs of antifeedant , shaking , shortness of breath , increased respiratory amplitude , lip nasal mucosa and lower abdomen , with obvious signs of cherry red and slow gait and abnormal gait .
The average escape latency of CO group was longer than that of BC and AC groups at 14d , 21d , and 28d after exposure . There was no statistical difference between BC group and AC group ( P0.05 ) .
At the 7th , 21st , and 28th day after exposure , the CO group was smaller than AC and BC group ( P0.05 ) .
There was no statistical difference between the BC group and the AC group at all time points ( P0.05 ) .
( 2 ) There was no statistical difference between the three groups ( P0.05 ) .
There was no statistical difference in the number of stages in different time points ( P0.05 ) .
At 28 d , the CO group tended to be lower than that of the rest groups .
Immunohistochemical staining of HIF - 1偽 and VEGF protein was observed in the CA1 region of hippocampus . ( 2 ) VEGF expression : VEGF was less expressed in BC group and AC group ;
The expression of VEGF was higher in CO group than in BC and AC group except for the 14th day ( P0.05 ) .
Conclusion : 1 . The expression level of VEGF in the CA1 region of the brain increased at the first day after exposure to the first day . The results showed that the expression of VEGF in the CA1 region of the brain increased at the first day after exposure to the first day . The results showed that the expression of HIF - 1偽 in the hippocampus of rats was higher than that of the group BC and AC .
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R742

【參考文獻】

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1 蘇燕玲;卜志平;段凱;;監(jiān)測腦脊液中堿性髓鞘蛋白和特異性烯醇化酶預測急性一氧化碳中毒遲發(fā)腦病的意義[J];當代醫(yī)學;2011年19期

2 彭道勇;王蘇平;張志清;李迪;朱曉鈺;;一氧化碳中毒遲發(fā)記憶障礙小鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡的初步研究[J];大連醫(yī)科大學學報;2006年01期

3 劉穎菊,楊俊卿,周歧新,薛春生;急性一氧化碳中毒致腦細胞凋亡及相關基因表達[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2000年05期

4 廖秋菊;王晶;秦儉;王長遠;田欣;;腹腔注射法制備一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病大鼠模型[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2011年06期

本文編號：2132578