【摘要】：目的：本研究通過建立DEACMP大鼠模型，應(yīng)用Morris水迷宮實驗、組織病理學(xué)、免疫組織化學(xué)染色法、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測法等技術(shù)檢測大鼠行為學(xué)和病理形態(tài)學(xué)變化，探討HIF-1α及VEGF在相應(yīng)動物模型中的表達(dá)變化，確定其在DEACMP發(fā)病機(jī)制中的作用，為進(jìn)一步研究DEACMP提供新的思路和方法，為臨床治療提供實驗依據(jù)。方法：將78只健康雄性成年SD大鼠（SPF級）隨機(jī)分為三組：空白對照組（BC組）18只、空氣對照組（AC組）30只、急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病組（CO組）30只。其中CO組采用腹腔注射法建立急性一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病大鼠模型，AC組采用腹腔注射法注射等量空氣，BC組不進(jìn)行任何手術(shù)（腹腔注射）操作。按中毒后1d、3d、7d、14d、21d、28d六個時間點將三個組各分為6個亞組，其中CO組和AC組每個亞組5只大鼠，BC組每個亞組3只大鼠。各組大鼠在造模前通過Morris水迷宮實驗測試記憶力、定向力等認(rèn)知功能，7d、14d、21d、28d時間點亞組的大鼠在處死取腦前也進(jìn)行Morris水迷宮實驗以測試認(rèn)知功能改變。各組大鼠的腦組織切片均應(yīng)用HE染色法觀察大鼠海馬區(qū)病理變化，應(yīng)用免疫組化染色法檢測其海馬區(qū)HIF-1α、VEGF蛋白的表達(dá)，用TUNEL細(xì)胞凋亡檢測法檢測其海馬區(qū)錐體細(xì)胞凋亡情況。運(yùn)用SPSS17.0軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：1.DEACMP大鼠模型的建立：（1）CO組大鼠腹腔注射CO氣體后出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)。表現(xiàn)為染毒后5~15min陸續(xù)出現(xiàn)煩躁、多動，行為表現(xiàn)輕度活躍；染毒20min后大鼠開始出現(xiàn)拒食少動，抖動，呼吸急促，呼吸幅度增大，口唇鼻黏膜和下腹部、肢端皮膚呈現(xiàn)明顯的櫻桃紅色，及行動遲緩，步態(tài)異常等。部分大鼠出現(xiàn)躁狂、撞籠、抽搐、角弓反張，繼而四肢癱軟、昏迷。給予通風(fēng)、保暖，約36.7％大鼠在染毒24h內(nèi)死亡，存活大鼠約8小時后完全蘇醒，觀察至染毒后第28天，部分大鼠出現(xiàn)反應(yīng)偏遲鈍，進(jìn)食量減少，活動減少等表現(xiàn)，其余大鼠日常行為活動未見明顯異常。（2）AC組大鼠腹腔注射等量空氣后未見明顯行為學(xué)異常，AC組大鼠無死亡。2.Morris水迷宮實驗結(jié)果：（1）定位航行實驗：三個組平均逃避潛伏期在染毒前和染毒后第7d無顯著差別，無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；染毒后第14d、21d、28d時，CO組平均逃避潛伏期均長于BC、AC組，有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05)，BC組與AC組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。（2）空間探索實驗：1）第IV象限（平臺所在象限）游泳時間/總時間：染毒前、染毒后第14d三個組第IV象限游泳時間/總時間無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）；染毒后第7d、21d、28d時CO組比AC、BC組小，有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05)；BC組、AC組在各時間點上無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）；CO組隨時間變化呈降低趨勢。2）穿越平臺次數(shù)：各時間點，三個組經(jīng)過平臺次數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）；各組內(nèi)，，不同時間點經(jīng)過平臺次數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）；28d時CO組有低于其余組的趨勢；CO組隨時間變化，經(jīng)過平臺次數(shù)有降低趨勢。3.腦組織病理形態(tài)學(xué)改變：HE染色標(biāo)本上，（1）各時間點的CO組大鼠腦內(nèi)有廣泛的病理改變，海馬CA1區(qū)出現(xiàn)大量不同程度地神經(jīng)元變性壞死。主要表現(xiàn)為神經(jīng)元胞體腫脹、皺縮，細(xì)胞數(shù)目略減少，細(xì)胞變形呈梭型或三角形，細(xì)胞層變薄、細(xì)胞間隙擴(kuò)大，細(xì)胞核固縮、核仁模糊、核周出現(xiàn)空暈，胞質(zhì)與胞核界限不清，細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，在變性壞死的神經(jīng)元周圍可見不同程度地膠質(zhì)細(xì)胞增生浸潤。(染毒后第21d亞組大鼠腦切片中還可以見到壞死神經(jīng)元被吸收后所留下的龕影,周圍亦可見到膠質(zhì)細(xì)胞的蹤跡。)（2）BC與各時間點的AC組大鼠海馬區(qū)的神經(jīng)元大小基本正常，核膜完整，核仁清晰，胞核呈淡藍(lán)色，著色均勻，細(xì)胞器完整。其中，海馬區(qū)CA1區(qū)有兩到三層錐體細(xì)胞，排列整齊致密，胞核飽滿、邊界清晰、尼氏小體豐富，核仁深染、清晰。4.HIF-1α及VEGF蛋白的免疫組化染色表達(dá)：（1）HIF-1α表達(dá)：HIF-1α在BC組及AC組中表達(dá)少，CO組在染毒后第1d表達(dá)明顯升高，第3d達(dá)到高峰，然后逐漸降低，至28d時仍有較高表達(dá)，CO組HIF-1α表達(dá)量在各時間點均高于BC組及AC組，有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.01）。（2）VEGF表達(dá)：VEGF在BC組及AC組中表達(dá)少；CO組除第14d外，其余各時間點上VEGF的表達(dá)量均高于BC和AC組，有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；CO組VEGF表達(dá)量從染毒后第1d開始迅速升高，在第3d達(dá)最高峰后逐漸降低，至第21d時再次顯著升高形成次高峰，繼而又持續(xù)降低，至第28d時VEGF表達(dá)量接近第1天水平，表現(xiàn)為增高→降低→增高→降低的動態(tài)變化趨勢。5.TUNEL細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果：CO組于染毒后第1d時檢測出大腦海馬CA1區(qū)有少量神經(jīng)細(xì)胞凋亡，第3d時開始增多，第7~14天達(dá)到高峰（第7天為最高峰），第28d時仍有少量凋亡，凋亡指數(shù)較BC組及AC組明顯增高，有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.01)。結(jié)論：1.采用改良式多次間隔腹腔注射CO法制作大鼠DEACMP模型，設(shè)備要求低，操作簡便易掌握，干擾因素少，CO用量少、精確，并且與人體DEACMP的病理生理變化過程相近，是研究DEACMP較為理想的一種動物模型。2.Morris水迷宮實驗通過定位航行訓(xùn)練和空間探索測試以明確大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和空間位置記憶能力變化，能客觀評價大鼠認(rèn)知行為功能，是初步判定DEACMP大鼠模型是否成功建立的一種較為可靠的依據(jù)。3.急性一氧化碳中毒后HIF-1α表達(dá)的增高可促進(jìn)VEGF的表達(dá)，啟動細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)通路，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，參與了DEACMP的發(fā)病。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of HIF - 1偽 and VEGF in the hippocampus of rats with acute carbon monoxide poisoning by intraperitoneal injection .
After 20 minutes of exposure , the rats began to show signs of antifeedant , shaking , shortness of breath , increased respiratory amplitude , lip nasal mucosa and lower abdomen , with obvious signs of cherry red and slow gait and abnormal gait .
The average escape latency of CO group was longer than that of BC and AC groups at 14d , 21d , and 28d after exposure . There was no statistical difference between BC group and AC group ( P0.05 ) .
At the 7th , 21st , and 28th day after exposure , the CO group was smaller than AC and BC group ( P0.05 ) .
There was no statistical difference between the BC group and the AC group at all time points ( P0.05 ) .
( 2 ) There was no statistical difference between the three groups ( P0.05 ) .
There was no statistical difference in the number of stages in different time points ( P0.05 ) .
At 28 d , the CO group tended to be lower than that of the rest groups .
Immunohistochemical staining of HIF - 1偽 and VEGF protein was observed in the CA1 region of hippocampus . ( 2 ) VEGF expression : VEGF was less expressed in BC group and AC group ;
The expression of VEGF was higher in CO group than in BC and AC group except for the 14th day ( P0.05 ) .
Conclusion : 1 . The expression level of VEGF in the CA1 region of the brain increased at the first day after exposure to the first day . The results showed that the expression of VEGF in the CA1 region of the brain increased at the first day after exposure to the first day . The results showed that the expression of HIF - 1偽 in the hippocampus of rats was higher than that of the group BC and AC .
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R742

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2132578