本文選題：肌萎縮側(cè)索硬化癥 + SOD1　； 參考：《華中師范大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：肌萎縮側(cè)索硬化癥(Amyotrophic Lateral Sclerosis, ALS)是神經(jīng)退行性疾病之一,研究發(fā)現(xiàn)它與錯誤折疊的SOD1聚集有關(guān),其聚集形成的寡聚體和可溶低聚物被推測為細(xì)胞毒性物種。SOD1自身的或由外界環(huán)境引起的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的改變可能是導(dǎo)致SOD1聚集的主要原因,結(jié)合本課題組研究基礎(chǔ),本論文研究了不同序列的DNA與wtSOD1相互作用和聚集過程,促進(jìn)SOD1形成不同形貌的聚集體,并探討了SOD1形成的聚集體類型與細(xì)胞毒性之間的關(guān)系。本文主要通過等溫量熱滴定法、圓二色譜法、ANS熒光光譜、紫外吸收光譜、直角光散射法、倒置熒光顯微鏡、透射電鏡及MTT法細(xì)胞毒性等實(shí)驗(yàn),研究DNA與SOD1相互作用,取得結(jié)果如下： (1)等溫量熱滴定實(shí)驗(yàn)顯示,各種序列的DNA與SOD1相互作用都是焓驅(qū)動的放熱過程,主要通過靜電相互作用結(jié)合,并且熵變不同。 (2)通過圓二色光譜實(shí)驗(yàn)可見,不同的DNA與SOD1相互作用,DNA二級結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變。ANS熒光實(shí)驗(yàn)表明,加入DNA使SOD1疏水殘基進(jìn)一步暴露,并隨DNA濃度增加呈正相關(guān),不同DNA使SOD1疏水殘基暴露程度分為兩組,Poly(dC)12、Poly(dG)12明顯大于Poly(dA)12、Poly(dT)12,四鏈體[P1]、[P2]、[d(TG4T)]4明顯大于相對應(yīng)的ss DNA,特征峰出現(xiàn)了藍(lán)移,說明加入DNA使SOD1構(gòu)象進(jìn)一步變化。 (3)直角光散射實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),不同DNA促進(jìn)SOD1聚集反應(yīng)快速達(dá)到平衡,形成的聚集體粒徑大小也不同,分列兩組,SOD1與Poly(dC)12、Poly(dG)12聚集體粒徑明顯大于Poly(dA)12、Poly(dT)12,當(dāng)濃度增加,聚集體粒徑隨之增大。 (4)倒置熒光顯微鏡實(shí)驗(yàn)可見,Poly(dA)12、Poly(dT)12促使SOD1形成的聚集體熒光強(qiáng)度要弱于Poly(dG)12形成的聚集體。透射電鏡法可看到納米級的聚集體形貌,前者主要形成了無定形聚集體,后者主要形成了纖維狀的聚集體。而CR紫外吸收實(shí)驗(yàn)也表明,四鏈體[P1]、[P2]、[d(TG4T)]4促使SOD1形成的聚集體淀粉樣纖維結(jié)構(gòu)要多于對應(yīng)的ss DNA。 (5)MTT法細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),加入Poly(dA)12、Poly(dT)12、ss[P1]、ss[P2]、 ss[d(TG4T)]4形成的無定形聚集體培養(yǎng)的細(xì)胞成活率明顯低于加入Poly(dC)12、 Poly(dG)12、四鏈體[P1]、[P2]、[d(TG4T)]4形成的纖維狀聚集體,從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)探討聚集體類型與細(xì)胞毒性之間的關(guān)系。
[Abstract]:Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is one of the neurodegenerative diseases. The oligomers and soluble oligomers formed by SOD1 are presumed to be cytotoxic species. The changes in structure and properties caused by the external environment may be the main causes of SOD1 aggregation. In this paper, we studied the interaction and aggregation process between DNA and wtSOD1 of different sequences, promoted the formation of SOD1 aggregates with different morphologies, and discussed the relationship between the types of aggregates formed by SOD1 and cytotoxicity. The interaction between DNA and SOD1 was studied by means of isothermal calorimetric titration, circular dichroism ans fluorescence spectrum, UV absorption spectrum, right angle light scattering method, inverted fluorescence microscope, transmission electron microscope and MTT assay. The results are as follows: (1) the results of isothermal calorimetric titration show that the interaction between DNA and SOD1 is an enthalpy driven exothermic process, which is mainly combined by electrostatic interaction. And the entropy change is different. (2) through circular dichroism spectrum experiment, it can be seen that the secondary structure of DNA in different DNA interacting with SOD1 does not change. Ans fluorescence experiment shows that the addition of DNA further exposes the hydrophobic residue of SOD1. With the increase of DNA concentration, there was a positive correlation between the exposure degree of SOD1 hydrophobic residues in two groups: Poly (DC) 12N Poly (dG) 12 was significantly larger than Poly (dA) 12 Poly (DT) 12, the quadruplex [P1], [P2], [d (TG4T)] 4 were obviously larger than the corresponding ss DNAs, and the characteristic peaks showed blue shift. The results showed that the conformation of SOD1 was further changed by adding DNA. (3) the right-angle light scattering experiments showed that different DNA promoted SOD1 aggregation reaction to a rapid equilibrium, and the particle size of the aggregates formed was also different. The particle size of SOD1 and Poly (dG) 12 aggregates was obviously larger than that of Poly (dA) 12 Poly (DT) 12 groups, and the particle size increased with increasing concentration. (4) the fluorescence intensity of Poly (dA) 12 / Poly (DT) 12 was lower than that of Poly (dG) 12 aggregates induced by Pol (dG) 12. (4) the fluorescence intensity of poly (dA) 12 / Poly (DT) 12 was lower than that of Poly (dG) 12. The fluorescence intensity of the aggregates induced by poly (dG) 12 was lower than that of Poly (dG) 12. The morphology of nano-scale aggregates can be seen by transmission electron microscopy. The former mainly forms amorphous aggregates and the latter mainly forms fibrous aggregates. Cr UV absorption assay also showed that tetrastrons [P1], [P2], [d (TG4T)] 4 promoted SOD1 to form more amyloid fibers than ss DNA. (5) MTT assay showed that, The cell survival rate of amorphous aggregates formed by adding Poly (dA) 12 (DT) Poly (DT) 12n ss [P1] Pnss [P2], ss [d (TG4T)] 4 was significantly lower than that of fibrous aggregates formed by adding Poly (DC) 12, Poly (dG) 12, Four-chain bodies [P1], [P2], [d (TG4T)] 4. The relationship between the type of aggregates and cytotoxicity was discussed from the experimental data.
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R744.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學(xué)學(xué)報(bào);2000年04期

2 葛學(xué)銘,陸應(yīng)麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期

3 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期

4 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

5 黃力拉,朱剛勁;被拐賣及失蹤兒童采血驗(yàn)DNA前的心理問題及對策[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年03期

6 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

7 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 ;Real time observation of the photocleavage of single DNA molecules[J];Chinese Science Bulletin;2003年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計(jì)劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點(diǎn)致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機(jī)制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報(bào);2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報(bào);2004年

5 本報(bào)記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報(bào);2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報(bào);2011年

7 本報(bào)記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報(bào);2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報(bào);2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報(bào);2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報(bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運(yùn)動學(xué)建模及誤差實(shí)時(shí)校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價(jià)值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點(diǎn)@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價(jià)金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：2114780