本文選題：SIRT3 + 蛛網(wǎng)膜下腔出血�。� 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究目的動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)作為臨床上較為常見的一種腦血管危重癥疾病,約占所有中風(fēng)類型的5%。據(jù)報(bào)道,每年全球約有1/10000的人群罹患動(dòng)脈瘤性SAH,其致殘率和致死率高達(dá)50%。隨著醫(yī)療器械和手術(shù)技術(shù)的不斷更新,推動(dòng)SAH的診斷和治療領(lǐng)域取得顯著進(jìn)步,但迄今為止臨床療效仍難以令人滿意,缺乏突破性進(jìn)展。傳統(tǒng)研究認(rèn)為,遲發(fā)性腦血管痙攣(Delayed cerebral vasospasm,DCVS)應(yīng)為動(dòng)脈瘤性SAH后導(dǎo)致不良預(yù)后最為重要的原因,但抗痙攣治療在臨床上對(duì)改善病人預(yù)后卻收效甚微。近年來早期腦損傷(Early brain injury,EBI)在動(dòng)脈瘤性SAH后繼發(fā)損傷中的重要作用逐漸得到研究學(xué)者的重視,一般將其定義為SAH后72小時(shí)內(nèi)由多因素造成的腦組織的整體性損傷,目前研究認(rèn)為EBI通過多途徑影響預(yù)后,涉及包括氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡在內(nèi)的一系列病理生理改變,然而確切完整的機(jī)制尚不十分明確,亟待突破性的研究進(jìn)展,以期為SAH患者提高生存率和改善預(yù)后提供最佳的治療策略。沉默信息調(diào)節(jié)因子3(SIRT3)作為Sirtuin家族成員之一,進(jìn)化過程中高度保守并依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD),具有去乙酰化酶特性,在腦組織中有豐富的表達(dá)。作為一種調(diào)節(jié)能量平衡的關(guān)鍵性保護(hù)性因子,研究表明SIRT3蛋白通過調(diào)控線粒體內(nèi)相關(guān)的乙酰化蛋白脫乙�；絽⑴c線粒體蛋白的翻譯后修飾調(diào)節(jié),影響線粒體的能量代謝、底物氧化、炎癥趨化和細(xì)胞凋亡等活動(dòng),成為機(jī)體多種疾病的病理發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用機(jī)制之一,近兩年來已成為氧化損傷、炎癥及缺血性損傷研究的熱點(diǎn)之一,在心臟、肝臟、腎臟的疾病研究中取得長足的進(jìn)步,但在出血性腦卒中研究中還鮮有報(bào)道。結(jié)合既往研究成果提示SAH后早期自由基損傷、炎癥反應(yīng)激活機(jī)制在EBI病程發(fā)生發(fā)展中極為關(guān)鍵的作用,本研究我們合理推測SIRT3可能參與SAH后EBI形成過程,通過調(diào)控線粒體功能參與抗炎及自由基氧化損傷的保護(hù)性機(jī)制,發(fā)揮其起SAH后EBI的神經(jīng)保護(hù)作用。研究方法本研究設(shè)計(jì)分三部分實(shí)施,第一部分首先采納頸內(nèi)動(dòng)脈線栓刺破法建立實(shí)驗(yàn)性SAH的大鼠動(dòng)物模型,并予以SIRT3激活劑白藜蘆醇(Resveratrol)干預(yù)治療,通過監(jiān)測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織含水量、血腦屏障通透性以及皮層神經(jīng)元凋亡情況以達(dá)到良好的模型動(dòng)物質(zhì)量控制和評(píng)估SIRT3激活后對(duì)EBI的保護(hù)效果;第二部分進(jìn)一步通過熒光定量RT-PCR、Western blot及免疫組化觀察實(shí)驗(yàn)性SAH后早期大腦皮層組織中SIRT3的轉(zhuǎn)錄翻譯的表達(dá)情況,同時(shí)采用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)分別標(biāo)記目標(biāo)蛋白SIRT3和皮層細(xì)胞種屬,進(jìn)一步明確SIRT3的細(xì)胞特異性定位以及其在SAH后早期的種屬特異性細(xì)胞中變化情況;第三部分通過篩選最佳誘導(dǎo)濃度的二氯化鈷(Co Cl2)化學(xué)性損傷PC12細(xì)胞模擬SAH后的神經(jīng)元損傷的體外環(huán)境,利用激動(dòng)劑和抑制劑改變PC12細(xì)胞中SIRT3的表達(dá)水平,通過Western blot技術(shù)檢測該損傷條件下,SIRT3表達(dá)水平對(duì)TLR4、PI3K/AKT以及Nrf2/ARE信號(hào)通路的影響,進(jìn)一步探討SIRT3對(duì)于SAH后EBI損傷保護(hù)的可能分子機(jī)制。1、在體實(shí)驗(yàn)部分:1)采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓穿刺法構(gòu)建SD大鼠的實(shí)驗(yàn)性SAH動(dòng)物模型;2)將實(shí)驗(yàn)大鼠分為對(duì)照組、假手術(shù)組、SAH組以及Resveratrol藥物干預(yù)四組;3)采用Garcina神經(jīng)功能評(píng)分、腦含水量、血腦屏障通透性、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測等方法評(píng)估模型動(dòng)物的質(zhì)量控制以及藥物干預(yù)對(duì)EBI的保護(hù)效果。4)采用熒光定量RT-PCR、Western blot及免疫組化觀察實(shí)驗(yàn)性SAH早期大腦皮層中SIRT3的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的表達(dá)情況,采用免疫雙標(biāo)技術(shù)分別標(biāo)記目標(biāo)蛋白SIRT3和皮層細(xì)胞特異性種屬,明確SIRT3的細(xì)胞特異性分布情況。2、離體實(shí)驗(yàn)部分:1)MTT法篩選二氯化鈷(Co Cl2)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞化學(xué)損傷的最佳濃度模擬SAH后的神經(jīng)元損傷的體外環(huán)境;2)在最佳Co Cl2誘導(dǎo)損傷條件下,予以激動(dòng)劑和抑制劑改變SIRT3表達(dá)水平,通過Western blot技術(shù)檢測該損傷條件下,SIRT3表達(dá)變化對(duì)TLR4、PI3K/AKT以及Nrf2/ARE信號(hào)通路的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓刺破法成功建立實(shí)驗(yàn)性SAH的大鼠動(dòng)物模型,質(zhì)量控制滿意;2、予以SIRT3激活劑Resveratrol干預(yù)后,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SAH建模后早期損傷有明確的保護(hù)作用;3、免疫組化顯示SAH建模后早期大鼠大腦皮層組織SIRT3表達(dá)下降,進(jìn)一步采用RT-PCR及Western blot證實(shí)SIRT3從轉(zhuǎn)錄到翻譯水平的表達(dá)均明顯下降;4、經(jīng)免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)鑒定SIRT3蛋白主要為神經(jīng)元胞漿表達(dá),在SAH建模后早期神經(jīng)元胞漿中SIRT3蛋白表達(dá)下降,在膠質(zhì)細(xì)胞中無明顯變化;5、成功篩選Co Cl2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞化學(xué)損傷的最佳濃度模擬建立SAH后的神經(jīng)元損傷的體外環(huán)境;6、上調(diào)的SIRT3可能通過上調(diào)Nrf2/ARE通路中的Nrf2表達(dá)水平發(fā)揮其神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)功能,其作用機(jī)制與TLR4以及PI3K/AKT信號(hào)通路關(guān)系并不密切。研究結(jié)論1、SIRT3激活對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性SAH后早期腦損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用,能有效減輕腦水腫及血腦屏障破壞程度,改善神經(jīng)功能評(píng)分。2、在實(shí)驗(yàn)性SAH早期大鼠的皮層腦組織中,SIRT3從轉(zhuǎn)錄到翻譯的表達(dá)水平均呈下降趨勢;3、SIRT3蛋白主要位于神經(jīng)元的胞漿表達(dá),在SAH后早期,神經(jīng)元中的SIRT3蛋白胞漿表達(dá)下降,而膠質(zhì)細(xì)胞中則無明顯改變。4、SIRT3可能通過上調(diào)Nrf2/ARE通路中的Nrf2表達(dá)水平發(fā)揮其神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)功能,其作用機(jī)制與TLR4以及PI3K/AKT信號(hào)通路關(guān)系并不密切。
[Abstract]:Objective To study the effect of SIRT3 in the diagnosis and treatment of SAH . The effects of SIRT3 on the expression of SIRT3 in the early cerebral cortex of SAH were investigated by means of Western blot and immunohistochemistry . 1 . The expression of SIRT3 protein in cerebral cortex of experimental SAH was decreased , and the expression level of SIRT3 was decreased in early stage of SAH .
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.35

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐惠麗,趙成三,李會(huì)廷;乙狀竇血栓性靜脈炎并蛛網(wǎng)膜下腔出血1例[J];湖北省衛(wèi)生職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

2 薛佩云;短途轉(zhuǎn)送蛛網(wǎng)膜下腔出血病人的護(hù)理[J];邯鄲醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校學(xué)報(bào);2000年01期

3 鄭桂芝,徐峰,夏淑艷;蛛網(wǎng)膜下腔出血210例診治分析[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2000年08期

4 李衛(wèi)軍,賈志斌,李樹林;蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診原因分析[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2000年02期

5 呂愛紅,范惠先,劉君華;脊蛛網(wǎng)膜下腔出血一例報(bào)告[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2000年03期

6 文靜,王國慶,尹曉剛;蛛網(wǎng)膜下腔出血12例誤診分析[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2000年05期

7 許建華;18例蛛網(wǎng)膜下腔出血的誤診分析[J];寧波醫(yī)學(xué);2000年06期

8 胡成蓮;老年人非典型蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診分析[J];青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年02期

9 劉建輝,冀鳳云,王婷,房樹志,解旭東,姚斌;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血42例分析[J];人民軍醫(yī);2000年09期

10 蔣軍,王榮秀;50例蛛網(wǎng)膜下腔出血的治療探討[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;2000年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉國榮;張京芬;;中國蛛網(wǎng)膜下腔出血流行病學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 林傳成;;警暢老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血附140例老年人蛛血特點(diǎn)分析[A];老年學(xué)論文集——福建省首次老齡問題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文選[C];1995年

3 王廣;;蛛網(wǎng)膜下腔出血并發(fā)急性梗阻性腦積水的診斷與治療(附二例報(bào)告)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)第六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1996年

4 余新民;;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診分析[A];第三屆全國中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

5 李志東;張樹雄;邸曉鹿;;不典型蛛網(wǎng)膜下腔出血31例報(bào)道[A];第三屆全國少數(shù)民族地區(qū)神經(jīng)病學(xué)會(huì)論文匯編[C];2005年

6 麥衛(wèi)國;謝穎;黃天云;;對(duì)特殊類型蛛網(wǎng)膜下腔出血影像的再認(rèn)識(shí)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

7 裘國松;周增杰;;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血的臨床特點(diǎn)[A];中國民政康復(fù)醫(yī)學(xué)第四屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];1993年

8 王茂旭;曲中;王洪琛;;飲酒、損傷與蛛網(wǎng)膜下腔出血的關(guān)系[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集（上卷）[C];1991年

9 袁志新;;談蛛網(wǎng)膜下腔出血[A];中國法醫(yī)學(xué)最新科研與實(shí)踐（一）——全國第六次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文精選[C];2000年

10 丁美萍;程慧;樓敏;;自發(fā)性局限性蛛網(wǎng)膜下腔出血的臨床病例分析[A];2011年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 黃遠(yuǎn)桃;老人蛛網(wǎng)膜下腔出血易誤診[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

2 霍濱;蛛網(wǎng)膜下腔出血可呈現(xiàn)癲癇發(fā)作[N];健康報(bào);2006年

3 白軼南;蛛網(wǎng)膜下腔出血后易復(fù)發(fā)[N];健康時(shí)報(bào);2007年

4 禾豐;頭痛與蛛網(wǎng)膜下腔出血[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

5 指導(dǎo)專家 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院腦血管病醫(yī)院第三科主任 蔣曉江 記者 李艷 通訊員 朱廣平;蛛網(wǎng)膜下腔出血 保守治療風(fēng)險(xiǎn)高[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年

6 王惠英 臧海玉;精神異常者要警惕蛛網(wǎng)膜下腔出血[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

7 衣曉峰　王慧穎 記者 韓雪;蛛網(wǎng)膜下腔出血研究獲突破[N];黑龍江日?qǐng)?bào);2011年

8 霍濱;蛛網(wǎng)膜下腔出血也可表現(xiàn)為癲癇發(fā)作[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

9 趙強(qiáng) 楊聲瑞;蛛網(wǎng)膜下腔出血治療技術(shù)創(chuàng)新[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

10 ;蛛網(wǎng)膜下腔出血急救方法[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王濤;1.半胱胺對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的保護(hù)作用 2.鴉膽子苦素A與酮康唑?qū)?xì)胞色素P450(CYP)3A4的潛在抑制作用對(duì)比研究[D];山東大學(xué);2015年

2 趙冬;縫隙連接蛋白、微動(dòng)脈膜電位和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路與蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)性腦缺血關(guān)系的研究[D];華中科技大學(xué);2015年

3 孫青;高遷移率族蛋白1在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用研究[D];南京大學(xué);2014年

4 莊宗;氫氣在兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2014年

5 崔永華;硫化氫對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的影響及其機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

6 黨寶齊;Cyclophilin A/CD147信號(hào)通路在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及其分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

7 劉昊;高壓氧對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠早期腦損傷的作用機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 莫杭波;頭孢曲松在蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷中的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

9 錢聰;SIRT1在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷模型的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

10 黃巍;SIRT3在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及分子機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳揚(yáng);實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后海馬微血管密度及側(cè)腦室脈絡(luò)叢的變化[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 李桃;Nrf2基因敲除在小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后繼發(fā)性腦損傷中的作用研究[D];南京大學(xué);2014年

3 官秀英;載脂蛋白(a)基因多態(tài)性對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和血漿Lp(a)水平的影響[D];昆明理工大學(xué);2016年

4 梁欣;蛛網(wǎng)膜下腔出血的中醫(yī)病名診斷研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

5 亓鵬浩;中西醫(yī)結(jié)合治療Hunt-HessⅠ-Ⅳ級(jí)蛛網(wǎng)膜下腔出血血管痙攣臨床研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 聶穎;腦干手術(shù)麻醉中的不良事件相關(guān)因素分析及星狀神經(jīng)節(jié)阻滯對(duì)老年患者及蛛網(wǎng)膜下腔出血患者的腦血管舒張作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 李曉天;Neuritin對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用的研究[D];石河子大學(xué);2016年

8 車旭東;蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦萎縮與認(rèn)知功能障礙相關(guān)性研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

9 錢聰;地塞米松對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后蛛網(wǎng)膜纖維化的作用[D];浙江大學(xué);2007年

10 孫啟虹;鎂劑對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

，

本文編號(hào)：2109421