本文選題：膠質(zhì)瘤 + 水通道蛋白4　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)、致死率最高的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是臨床治療初發(fā)和復(fù)發(fā)惡性膠質(zhì)瘤的一線用藥,但是其具體的抗腫瘤作用具體分子機(jī)制卻不十分清楚。本文擬探討替莫唑胺是否通過(guò)調(diào)節(jié)水通道蛋白4的表達(dá)(Aquaporin 4,AQP4)以及激活MAPK(mitogen-activated protein kinase)信號(hào)通路,進(jìn)而影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。方法人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和U251分別隨機(jī)分為對(duì)照組和TMZ給藥組。MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖存活能力,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的分布情況,劃痕實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力,免疫印跡測(cè)定JNK、ERK,AQP4和p38的表達(dá)變化。結(jié)果MTT實(shí)驗(yàn)提示TMZ可抑制U87和U251細(xì)胞的增殖和存活能力,流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果提示TMZ導(dǎo)致細(xì)胞G2/M期阻滯;免疫印跡結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,TMZ組AQP4的表達(dá)下調(diào)(P0.05),p-p38/p38的表達(dá)上調(diào)(P0.05),而p-JNK/JNK和p-ERK/ERK表達(dá)無(wú)明顯變化;劃痕實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)提示TMZ能夠抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87和U251的遷移和侵襲能力,給予p38激動(dòng)劑(anisomycin)其作用與TMZ相似,而加入p38的抑制劑(SB203580)可以阻斷TMZ的作用。結(jié)論TMZ通過(guò)激活p38 MAPK信號(hào)通路,從而降低AQP4的表達(dá),進(jìn)而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、遷移和侵襲能力。本研究從細(xì)胞分子角度闡釋了TMZ的抗腫瘤作用,同時(shí)為尋求膠質(zhì)瘤的治療新靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。目的觀察氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)后,神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)和單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(monocarboxylate transporter,MCT)1、4的表達(dá)變化,以探討膠質(zhì)瘤增殖生長(zhǎng)的分子機(jī)制。方法將膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組(OGD組),模型組的干預(yù)時(shí)間點(diǎn)分別為1、3、6 h。MTT試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖生長(zhǎng)情況,HE染色觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,乳酸試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸含量,免疫熒光和免疫印跡觀察MCT1和MCT4的蛋白表達(dá)變化情況。結(jié)果與對(duì)照組相比,隨著氧糖剝奪時(shí)間延長(zhǎng),模型組細(xì)胞增殖能力下降(P0.05);細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸濃度增高(P0.05);MCT1、4的表達(dá)上調(diào),并隨氧糖剝奪時(shí)間延長(zhǎng)其表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P0.05);細(xì)胞培養(yǎng)液中加入MCTs的抑制劑4-CIN后,其乳酸濃度降低(P0.05)。結(jié)論U251細(xì)胞氧糖剝奪后,隨著細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸濃度增加,MCT1、4亦表達(dá)上調(diào),而細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)能力下降;抑制MCT的表達(dá),細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸濃度降低,提示MCT1、4可能通過(guò)參與神經(jīng)膠質(zhì)瘤缺血缺氧微環(huán)境中乳酸的轉(zhuǎn)運(yùn),進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)過(guò)程。
[Abstract]:Objective Glioma is the most common primary central nervous system tumor with the highest mortality. Temozolomide (TMZ) is a first-line drug for the treatment of primary and recurrent malignant gliomas, but the specific molecular mechanism of its antitumor effect is not well understood. The aim of this study is to investigate whether temozolidomide affects the malignant biological behavior of glioma cells by regulating the expression of aquaporin 4 (Aquaporin 4 / AQP4) and activating MAPK (mitogen-activated protein kinase) signaling pathway). Methods Human glioma cell lines U87 and U251 were randomly divided into two groups: control group and TMZ administration group. MTT assay was used to detect cell proliferation and viability. Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. The cell migration and invasion ability were detected by scratch assay and invasion assay, and the expression of JNKN ERKN AQP4 and p38 were detected by Western blotting. Results MTT assay showed that TMZ could inhibit the proliferation and survival of U87 and U251 cells, and flow cytometry showed that TMZ caused G2 / M phase arrest of U87 and U251 cells. The results of Western blotting showed that the expression of AQP4 in TMZ group was down-regulated (P0.05) and the expression of p-p38 / p38 was up-regulated (P0.05), while the expression of p-JNK-JNK and p-ERK / ERK was not significantly changed in TMZ group, the scratch test and invasion experiment showed that TMZ could inhibit the migration and invasion of U87 and U251 glioma cells. The effect of p38 agonist (anisomycin) was similar to that of TMZ, but the effect was blocked by adding p38 inhibitor (SB203580). Conclusion TMZ can inhibit the proliferation, growth, migration and invasion of glioma cells by activating the p38 MAPK signaling pathway, thereby reducing the expression of AQP4. The aim of this study is to elucidate the antitumor effect of TMZ from the cellular molecular perspective and to provide a theoretical basis for seeking new targets for the treatment of glioma. Objective to explore the molecular mechanism of glioma proliferation and growth by observing the changes of lactic acid transport and the expression of monocarboxylate transporter 1 / 4 in glioma cell line U251 after oxygen-glucose deprivation. Methods Glioma cell line U251 was randomly divided into control group and model group (OGD group). The intervention time of the model group was 1 3 ~ 6 h. MTT assay kit was used to detect the proliferation and growth of the cells. The morphological changes of the cells were observed by HE staining. The content of lactic acid in cell culture medium, the protein expression of MCT1 and MCT4 were detected by immunofluorescence and Western blotting. Results compared with the control group, with the prolongation of oxygen glucose deprivation time, the proliferation ability of the model group decreased (P0.05), the concentration of lactic acid in the cell culture medium increased (P0.05) and the expression of MCT1O4 was up-regulated. The expression of MCTs increased gradually with the prolongation of oxygen glucose deprivation time (P0.05), and the concentration of lactate decreased after the addition of 4-CIN, a inhibitor of MCTs in cell culture medium (P0.05). Conclusion with the increase of lactic acid concentration in cell culture medium, the expression of MCT1O4 is also up-regulated, while the proliferation and growth ability of U251 cells is decreased after oxygen glucose deprivation, and the concentration of lactic acid in cell culture medium decreases with the inhibition of MCT expression. These results suggest that MCT1O4 may regulate the proliferation and growth of glioma cells by taking part in the transport of lactic acid in hypoxia-ischemia microenvironment.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2067333