線粒體自噬對新生大鼠缺氧缺血腦損傷的影響
本文選題:線粒體自噬 + 缺氧缺血腦損傷。 參考:《中國當(dāng)代兒科雜志》2017年02期
【摘要】:目的了解缺氧缺血腦損傷的動物模型中線粒體自噬情況,探討其在缺氧缺血腦損傷中的作用。方法將120只新生7日齡Sprague-Dawley大鼠分為假手術(shù)組、缺氧缺血腦損傷(HIBD)組、自噬抑制劑干預(yù)組(3MA組)。HIBD組行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎后置于低氧倉(8%氧氣和92%氮氣)2.5 h,3MA組腹腔注射2μL 3MA 30 min后再進(jìn)行結(jié)扎和低氧處理,假手術(shù)組不予結(jié)扎和低氧處理。在造模后提取各組單細(xì)胞懸液,用Mitotracker標(biāo)記線粒體、Lysotracker標(biāo)記自噬小體、LC3標(biāo)記自噬進(jìn)行免疫熒光共定位觀察線粒體自噬情況;熒光探針JC-1染色后,采用流式細(xì)胞儀檢測線粒體膜電位。TTC染色法檢測腦梗死灶大小。提取皮質(zhì)神經(jīng)元中的細(xì)胞漿蛋白,Western blot法檢測線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果與假手術(shù)組相比,HIBD組線粒體膜電位明顯降低(P0.05),線粒體自噬增加(P0.05),線粒體分裂相關(guān)蛋白Drp1、Fis1的表達(dá)升高,線粒體外膜蛋白受體Tom20與內(nèi)膜蛋白受體Tim23的表達(dá)降低(P0.05);3MA組膜電位比HIBD組降低更為明顯(P0.05),但線粒體自噬程度明顯減少(P0.05)。3MA組大鼠腦組織梗死程度較HIBD組明顯增加(P0.05)。結(jié)論 HIBD能夠增加線粒體自噬的發(fā)生,抑制線粒體自噬會加重新生大鼠HIBD的損傷程度。
[Abstract]:Objective to investigate the role of mitochondrial autophagy in hypoxic-ischemic brain injury model. Methods 120 7 day old Sprague-Dawley rats were divided into sham-operation group and hypoxic-ischemic brain injury (HIBD) group. The right common carotid artery was ligated and placed in hypoxia chamber (8% oxygen and 92% nitrogen) for 2.5 h in the autophagy inhibitor intervention group (3MA group) .HIBD group was treated with ligation and hypoxia after intraperitoneal injection of 2 渭 L 3MA for 30 min. After modeling, single cell suspension was extracted from each group, and mitochondrial Lysotracker labeled autophagy was used to observe the mitochondrial autophagy by immunofluorescence, and the fluorescence probe JC-1 staining was used to observe the mitochondrial autophagy. Mitochondrial membrane potential. TTC staining was used to detect the size of cerebral infarction by flow cytometry. The expression of mitochondrial autophagy associated protein was detected by Western blot method. Results compared with the sham-operated group, the mitochondrial membrane potential decreased significantly (P0.05), the mitochondrial autophagy increased (P0.05), and the expression of mitochondrial mitogen-associated protein Drp1 Fis1 increased in the HIBD group. The expression of mitochondrial outer membrane protein receptor Tom20 and intimal protein receptor Tim23 were significantly decreased (P0.05). The membrane potential of 3MA group was significantly lower than that of HIBD group (P0.05), but the degree of mitochondrial autophagy was significantly decreased (P0.05) .3MA group was significantly higher than HIBD group (P0.05). Conclusion HIBD can increase the occurrence of mitochondrial autophagy and inhibit mitochondrial autophagy can aggravate the damage of HIBD in neonatal rats.
【作者單位】: 四川大學(xué)華西第二醫(yī)院兒科/出生缺陷與相關(guān)婦兒疾病教育部重點實驗室/發(fā)育與婦兒疾病四川省重點實驗室;
【基金】:國家自然科學(xué)基金(81330016;81630038;81300526) 國家重點基礎(chǔ)發(fā)展計劃(973計劃)(2013CB967404) 四川省科技計劃項目(2014SZ0149) 臨床重點專科計劃項目(1311200003303)
【分類號】:R742
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本文編號:2063393
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