發(fā)布時(shí)間：2018-06-14 18:02

  本文選題：帕金森氏病 + 脂多糖�。� 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分脂多糖加重α-synucein基因突變小鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷機(jī)制的研究帕金森氏病(Parkinson's disease,PD)是由遺傳和炎癥等多種病因引起的神經(jīng)退行性疾病。有多種可模擬PD發(fā)病的動(dòng)物模型,α-synuclein(A53T)轉(zhuǎn)基因小鼠和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射小鼠分別從基因突變和炎癥角度模擬PD的病理改變,但這些模型僅模擬PD發(fā)病的單一因素,且出現(xiàn)病理改變的時(shí)間較長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)采用LPS注射α-synuclein轉(zhuǎn)基因小鼠建立炎癥和遺傳因素雙重打擊的PD模型。結(jié)果顯示LPS聯(lián)合α-synuclein轉(zhuǎn)基因刺激可導(dǎo)致小鼠轉(zhuǎn)棍和爬桿運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)功能障礙,黑質(zhì)中酪氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯降低,中腦TH的表達(dá)明顯下降,紋狀體中多巴胺含量顯著降低,出現(xiàn)多巴胺能神經(jīng)元功能低下的表現(xiàn),以上行為學(xué)和病理改變均較二者單獨(dú)刺激明顯加重,表明聯(lián)合刺激可加重模型損傷,表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)LPS聯(lián)合α-synuclein可引起明顯的神經(jīng)炎癥和神經(jīng)元凋亡,表現(xiàn)為小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)志物Ibal表達(dá)增加以及與凋亡相關(guān)的Bcl2/BaxL比值下降,細(xì)胞凋亡執(zhí)行的關(guān)鍵分子caspase-3活性升高。差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)LPS和α-synuclein雙重打擊可導(dǎo)致小鼠腦中與炎癥和凋亡相關(guān)蛋白CD99抗原樣蛋白2(CD99L2)和細(xì)胞色素c氧化酶7A相關(guān)蛋白(COX7RP)的表達(dá)明顯增加,提示這兩種蛋白可能參與PD的發(fā)病過(guò)程,它們?cè)赑D發(fā)病中的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究探討。以上研究表明在基因突變基礎(chǔ)上引入炎癥刺激可建立更理想的PD動(dòng)物模型。第二部分:FLZ通過(guò)Src/PTEN/Akt信號(hào)通路抑制神經(jīng)炎癥的機(jī)制研究帕金森氏病(Parkinson's disease,PD)的發(fā)病與神經(jīng)炎癥密切相關(guān),小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度激活后可釋放細(xì)胞因子、化學(xué)因子和興奮性氨基酸等損傷周圍神經(jīng)元,導(dǎo)致神經(jīng)元死亡和丟失。研究發(fā)現(xiàn)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化引起的神經(jīng)炎癥對(duì)PD有改善作用,因此抑制神經(jīng)炎癥可能是治療PD的新策略。FLZ是番荔枝酰胺衍生物,臨床前研究表明FLZ具有治療PD的作用,現(xiàn)已進(jìn)入I期臨床研究。FLZ治療PD的作用與其抑制神經(jīng)炎癥而保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元有關(guān),但具體抗炎機(jī)制尚不不十分明確。因此,本研究采用LPS誘發(fā)的小膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)炎癥模型探討FLZ抑制神經(jīng)炎癥的相關(guān)機(jī)制。結(jié)果顯示在LPS刺激的BV2細(xì)胞中,FLZ可明顯降低PTEN和Akt的磷酸化水平,PTEN的低磷酸化狀態(tài)促使其由胞漿向胞膜轉(zhuǎn)位,從而提高PTEN磷脂酶活性,促進(jìn)PIP3分解為PIP2,導(dǎo)致Akt活性下降。當(dāng)用VOOH(pic)抑制PTEN活性后,FLZ對(duì)TNF-α的釋放量與LPS+VOOH(pic)組相比無(wú)明顯降低,表明PTEN可能在FLZ抑制炎癥中起著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)Src酪氨酸激酶是炎癥的重要調(diào)控蛋白,可調(diào)控PTEN的活性。本研究發(fā)現(xiàn)FLZ可明顯抑制Src和PTEN的相互作用。當(dāng)抑制Src后FLZ對(duì)PTEN的磷酸化水平無(wú)明顯影響,過(guò)表達(dá)Src后FLZ可明顯降低PTEN磷酸化水平,而抑制PTEN后FLZ仍可明顯降低Src磷酸化水平,表明Src在FLZ抗炎效應(yīng)中發(fā)揮重要作用,可能是PTEN的上游調(diào)控蛋白。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)與LPS組相比,沉默Src后FLZ對(duì)Akt的磷酸化、TNF-α的釋放以及iNOS和COX-2的表達(dá)均無(wú)明顯影響,而過(guò)表達(dá)Src后與LPS組相比FLZ可顯著降低Akt的磷酸化、TNF-α的釋放以及iNOS和COX-2的表達(dá),表明Src在FLZ抑制神經(jīng)炎癥中起著重要作用。進(jìn)一步的分子對(duì)接研究表明,FLZ與Src之間存在相互作用,FLZ自身的H、O原子和苯環(huán)可與位于SrcN-端的Glu280和C-端的Ala293側(cè)鏈之間形成的活性口袋相結(jié)合。以上結(jié)果表明Src酪氨酸激酶可能是FLZ抑制神經(jīng)炎癥的重要分子靶點(diǎn),FLZ通過(guò)抑制Src/PTEN/Akt信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)其抑制神經(jīng)炎癥作用,這為FLZ臨床治療PD提供理論依據(jù)。
[Abstract]:In this experiment , we found that LPS and 偽 - synuclein could cause obvious neuroinflammation and neuronal apoptosis . The results showed that LPS combined with 偽 - synuclein could cause obvious neuroinflammation and neuronal apoptosis . Compared with LPS group , FLZ plays an important role in inhibiting the phosphorylation , TNF - 偽 release and the expression of iNOS and COX - 2 .
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R742.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 余凌虹;魏懷玲;鮑秀琦;張丹;孫華;;番荔枝酰胺衍生物FLZ對(duì)LPS聯(lián)合MPTP誘發(fā)小鼠慢性帕金森病的治療作用[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2013年10期

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本文編號(hào)：2018480