本文選題：視神經(jīng)脊髓炎 + 多發(fā)性硬化��； 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2014年博士論文

【摘要】：目的： 1.檢測(cè)視神經(jīng)脊髓炎（NMO）患者血清及腦脊液中B淋巴細(xì)胞活化因子（BAFF）的水平，探討B(tài)AFF能否作為一種生物標(biāo)記物，以及在鑒別診斷及推測(cè)疾病活動(dòng)性中所起的作用； 2.檢測(cè)NMO患者外周血中CD1d(hi) CD5+CD19+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例，探討調(diào)節(jié)性B細(xì)胞能否作為NMO和多發(fā)性硬化(MS)鑒別診斷的生物標(biāo)記物，并為發(fā)現(xiàn)二者存在不同的免疫機(jī)制提供更多理論依據(jù)； 3.建立NMO模型，驗(yàn)證水通道蛋白4抗體(AQP4-Ab)的致病性，并為進(jìn)一步研究提供平臺(tái)； 4.觀察脂多糖(LPS)預(yù)處理對(duì)AQP4-Ab致病性的影響，探討小膠質(zhì)細(xì)胞激活在NMO發(fā)病中的作用及可能的機(jī)制。 方法： 1.收集2012年4月至2013年10月間就診于解放軍總醫(yī)院門診及住院部的NMO和MS患者的臨床資料，所有患者均為急性復(fù)發(fā)期。其中NMO44例，MS38例。對(duì)照組血清標(biāo)本來(lái)自體檢中心健康正常人，共30例，腦脊液標(biāo)本來(lái)自同期住院的非炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者，共15例，采用ELISA法檢測(cè)腦脊液及血清中BAFF的水平，流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)外周血中CD1d(hi)CD5+CD19+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例。 2.利用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)新生大鼠皮層細(xì)胞，AQP4-Ab陽(yáng)性的NMO患者血清進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)免疫熒光技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中MAP2、GFAP、CD11b的表達(dá)情況，以觀察神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的改變，建立NMO模型。 3.在模型的基礎(chǔ)上，，給予LPS預(yù)處理，通過(guò)免疫熒光技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞MAP2、GFAP、CD11b的表達(dá)變化情況，通過(guò)ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中TNF-α、IFN-γ水平的變化情況。 結(jié)果： 1. NMO組、MS組和對(duì)照組血清中BAFF水平分別為250.2±126.9pg/ml、249.6±130.7pg/ml和222.9±126.1pg/ml,三組間兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 NMO組、 MS組和對(duì)照組腦脊液中BAFF水平分別為525.8±230.0pg/ml、298.4±141.9pg/ml和141.4±76.2pg/ml，三組兩兩比較，NMO組和MS組腦脊液中BAFF水平較對(duì)照組明顯增高，NMO組腦脊液中BAFF水平較MS組明顯增高（P 0.05）。且NMO組、MS組的腦脊液中BAFF水平與EDSS評(píng)分存在相關(guān)性，EDSS評(píng)分越高，其腦脊液中BAFF水平越高（r值分別為0.887和0.885）。但是,NMO組腦脊液中BAFF水平與AQP4抗體滴度之間不具有相關(guān)性。 2. NMO組、MS組及對(duì)照組外周血CD1d(hi) CD5+CD19+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞細(xì)胞占CD19+B細(xì)胞的比例分別為（7.94±4.16）%、（20.61±11.13）%和（19.35±8.04）%，占淋巴細(xì)胞的比例分別為（1.61±0.89）%、（2.70±1.21）%和（2.52±1.27）%，三組比較，NMO組外周血CD1d(hi) CD5+CD19+細(xì)胞比例最低（P 0.05），MS組與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化(P＞0.05)。AQP4-Ab+NMO組和AQP4-Ab-NMO組CD1d(hi) CD5+CD19+細(xì)胞占CD19+B細(xì)胞的比例分別為（6.8%，1.33-14.2%）和（8.8%，3.5-20.0%），占淋巴細(xì)胞的比例分別為（1.43%，0.2-1.9%）和（2.60%，1.07-4.32%），兩組比較，AQP4-Ab+NMO組CD1d(hi) CD5+CD19+細(xì)胞比例明顯偏低（P 0.05）。 3.原代培養(yǎng)新生大鼠皮層細(xì)胞，經(jīng)AQP4抗體陽(yáng)性患者血清進(jìn)行誘導(dǎo)，星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹,神經(jīng)元固縮。小膠質(zhì)細(xì)胞胞體明顯增大，有偽足樣突起。與空白對(duì)照組和正常血清組比較，AQP4抗體陽(yáng)性血清組GFAP陽(yáng)性細(xì)胞、CD11b陽(yáng)性細(xì)胞中心聚焦區(qū)域面積明顯增大，MAP2陽(yáng)性細(xì)胞中心聚集區(qū)域面積明顯減小，GFAP、CD11b陽(yáng)性細(xì)胞周圍投射長(zhǎng)度明顯增長(zhǎng)，MAP2陽(yáng)性細(xì)胞周圍投射長(zhǎng)度明顯縮短（P 0.05）。 4. LPS預(yù)處理后, AQP4抗體陽(yáng)性血清對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的損傷進(jìn)一步加重，星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元發(fā)生凋亡。與單純AQP4-Ab陽(yáng)性血清組比較，LPS預(yù)處理+AQP4-Ab陽(yáng)性血清組MAP2、GFAP免疫熒光陽(yáng)性中心聚集區(qū)域面積明顯縮小，MAP2免疫熒光陽(yáng)性周圍投射區(qū)域長(zhǎng)度明顯縮短，GFAP免疫熒光陽(yáng)性周圍投射區(qū)域無(wú)法測(cè)量， CD11b周圍投射區(qū)域長(zhǎng)度明顯增加（P 0.05）。CD11b免疫熒光陽(yáng)性中心聚集區(qū)域面積無(wú)明顯變化(P＞0.05)。脂多糖預(yù)處理6h后，培養(yǎng)上清液中TNF-α水平明顯升高，而IFN-γ的水平未發(fā)生明顯變化。 結(jié)論： 1.腦脊液中BAFF水平可作為NMO和MS鑒別診斷的生物標(biāo)記物，并在判定疾病活動(dòng)性中具有一定價(jià)值。 2.外周血中CD1d(hi) CD5+CD19+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可作為NMO和MS鑒別診斷的生物標(biāo)記物，并提示NMO與MS，AQP4-Ab+NMO與AQP4-Ab-NMO的免疫機(jī)制不同。 3.利用AQP4抗體陽(yáng)性血清與原代培養(yǎng)的新生大鼠腦皮層細(xì)胞，可建立NMO模型。 4.LPS預(yù)處理后，可激活小膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)一步增強(qiáng)了AQP4抗體的致病性。其中可能涉及了復(fù)雜的免疫機(jī)制，促炎癥細(xì)胞因子TNF-α扮演了重要角色。
[Abstract]:Objective:
1. to detect the level of B lymphocyte activating factor (BAFF) in the serum and cerebrospinal fluid (CSF) of patients with optic neuromyelitis (NMO), and to explore whether BAFF can be used as a biomarker and to differentiate and speculate on the activity of the disease.
2. to detect the proportion of CD1d (HI) CD5+CD19+ regulatory B cells in peripheral blood of NMO patients and to explore whether regulatory B cells can be used as biomarkers for differential diagnosis of NMO and multiple sclerosis (MS), and to provide more theoretical basis for the discovery of the existence of different immune mechanisms in the two.
3. establish NMO model to verify the pathogenicity of aquaporin 4 antibody (AQP4-Ab) and provide a platform for further research.
4. to observe the effect of lipopolysaccharide (LPS) pretreatment on the pathogenicity of AQP4-Ab, and explore the role and possible mechanism of microglial activation in the pathogenesis of NMO.
Method錛

本文編號(hào)：2010240