本文選題：吲哚胺2 + 3-雙加氧酶��； 參考：《電子科技大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景:吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)是肝臟外唯一負責(zé)色氨酸代謝的限速酶,它可以降解必需氨基酸色氨酸并且生成一系列代謝產(chǎn)物。IDO活性的異常引起神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)異常,參與神經(jīng)精神類疾病的發(fā)生。色氨酸代謝除了對免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用,還能影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。IDO能夠改變血清素的前體色氨酸進入犬尿氨酸代謝,導(dǎo)致一系列有毒代謝產(chǎn)物的生成。促炎性細胞因子可以激活I(lǐng)DO,進而激活色氨酸—犬尿氨酸途徑,在CNS中,95%的色氨酸都是通過犬尿氨酸途徑進行代謝。腫瘤壞死因子-α(TNF-α),干擾素-gamma(IFN-γ)和白介素-1β(IL-1β)等促炎性細胞因子以協(xié)同作用方式增強IDO活性和色氨酸代謝。而抗炎細胞因子白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10)抑制T細胞、樹突細胞和巨噬細胞中IDO介導(dǎo)的色氨酸分解代謝。但在CNS中,抗炎細胞因子對IDO的影響是不一致的。在神經(jīng)內(nèi)分泌細胞中,IL-10通過調(diào)節(jié)IDO表達可能提供保護作用,而抗炎細胞因子IL-4和白介素-13(IL-13)極大地增強了小膠質(zhì)細胞中IDO的表達。目的:IL-10作為典型的抗炎細胞因子,不僅抑制炎癥反應(yīng),也有神經(jīng)保護功能,但是深層的機制并不清楚,是否IL-10通過調(diào)節(jié)色氨酸—犬尿氨酸途徑而發(fā)揮功能以及星形膠質(zhì)細胞中IL-10對IDO的作用仍待進一步研究。為了解決這個問題,本研究旨在探究在CNS中,是否IL-10在IDO-色氨酸代謝途徑中作為一個潛在的調(diào)節(jié)介質(zhì)發(fā)揮作用。方法:(1)取出生3天內(nèi)的C57乳鼠大腦皮層,通過組織消化法所得星形膠質(zhì)細胞,進行形態(tài)學(xué)觀察、純度鑒定。(2)采用星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)方法,根據(jù)不同的處理,將原代培養(yǎng)的細胞分為四組:即a)空白對照組,b)IFN-γ處理組,c)IFN-γ+IL-10處理組,d)IL-10處理組。用免疫熒光染色(IF)、實時定量PCR(RT-PCR)、免疫蛋白印記(Western blot)方法來定量檢測IDO的表達量變化。(3)利用免疫蛋白印記的方法檢測信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子-3(STAT-3)磷酸化及下游細胞因子信號抑制因子(SOCS3)表達與IDO表達的相互作用,及其信號通路機制。并應(yīng)用STAT-3抑制劑WP1066,探究IL-10發(fā)揮作用的分子機制,以便研究課題進一步深入。結(jié)果:實驗結(jié)果表明,(1)通過機械振搖法得到的原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞純度、存活率均達到95%以上,明顯看出細胞分支明顯,胞體伸展。(2)免疫熒光染、RT-PCR、western blot方法均顯示,IFN-γ+IL-10處理組中IDO表達量顯著低于IFN-γ處理組(P0.05)。(3)免疫熒光及Western blot結(jié)果顯示,IL-10顯著增強STAT-3磷酸化與SOCS3的表達(P0.05),明顯抑制酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)表達(P0.05)。應(yīng)用STAT-3抑制劑WP1066后,顯著降低IL-10對IDO表達的抑制作用,揭示了IL-10抑制IDO表達的分子機制。結(jié)論:(1)在原代星形膠質(zhì)細胞中,IL-10明顯減少IFN-γ誘導(dǎo)的IDO增多。(2)IL-10通過抑制JAK/STAT-1活性發(fā)揮這種作用。(3)STAT-3,SOCS3,JAK的活性表達是IL-10抑制IDO表達的內(nèi)部信號通路。(4)在CNS疾病中,IDO表達并具有重要作用,探究IL-10對促炎性細胞因子IFN-γ引發(fā)的IDO表達的影響,可為在CNS中IL-10的神經(jīng)保護作用提供理論依據(jù)與支撐,并為臨床CNS疾病創(chuàng)立新的治療靶點。
[Abstract]:Background: indolamine 2,3- dioxygenase (IDO) is the only speed limiting enzyme that is responsible for tryptophan metabolism outside the liver. It can degrade essential amino acid tryptophan and produce a series of abnormal.IDO activities of metabolites to induce abnormal neuromodulation and participate in the development of neuropsychiatric disorders. Tryptophan metabolism is not only effective in the immune system, but also in the immune system. It can also affect the central nervous system (CNS).IDO that can alter serotonin's protryptine into canine urinary ammonia metabolism, leading to the formation of a series of toxic metabolites. Pro-inflammatory cytokines can activate IDO and activate tryptophan - canine urinary ammonia pathway. In CNS, 95% of tryptophan is metabolized through the canine urinary ammonia pathway. Tumor necrosis factor - alpha (TNF- alpha), interferon -gamma (IFN- gamma) and interleukin -1 beta (IL-1 beta) and other inflammatory cytokines enhance IDO activity and tryptophan metabolism in synergistic manner, while the anti inflammatory cytokines interleukin -4 (IL-4) and interleukin -10 (IL-10) inhibit T cells, tree processes and macrophages, and tryptophan catabolism. In S, the effect of anti-inflammatory cytokines on IDO is inconsistent. In neuroendocrine cells, IL-10 may provide protection by regulating IDO expression, and anti-inflammatory cytokine IL-4 and interleukin -13 (IL-13) greatly enhance the expression of IDO in microglia. Objective: IL-10 is a typical anti-inflammatory cytokine, not only inhibiting the inflammatory response. It also has neuroprotective functions, but the underlying mechanism is not clear. Whether IL-10 plays the function by regulating tryptophan - canine urinary ammonia pathway and the role of IL-10 in astrocytes in IDO remains to be further studied. In order to solve this problem, the purpose of this study was to explore whether IL-10 was used in the IDO- tryptophan metabolic pathway in CNS. To play a role as a potential mediator. Methods: (1) taking the cerebral cortex of C57 rats of 3 days of birth, astrocytes obtained by tissue digestion, morphological observation and purity identification. (2) using astrocyte culture method, according to different treatment, the primary cultured cells were divided into four groups: a) blank control group, b) IF N- gamma treatment group, c) IFN- gamma +IL-10 treatment group, D IL-10 treatment group. Quantitative detection of IDO expression changes by immunofluorescence staining (IF), real-time quantitative PCR (RT-PCR), immunoglobulin imprint (Western blot) method. (3) detection of signal transduction and transcription activating factor phosphorylation and downstream cytokine signaling using immunoglobulin imprint The interaction between the expression of SOCS3 and the expression of IDO and its signaling pathway and the application of the STAT-3 inhibitor WP1066 to explore the molecular mechanism of the role of IL-10 in order to further study the subject. Results: the results showed that (1) the survival rate of the original cultured astrocytes obtained by the mechanical shaking method was reached. To more than 95%, it was obvious that the cell branches were obvious and the body extension. (2) immunofluorescence staining, RT-PCR, Western blot methods all showed that the IDO expression in IFN- gamma +IL-10 treatment group was significantly lower than that of IFN- gamma treatment group (P0.05). (3) the results of immunofluorescence and Western blot showed that IL-10 significantly enhanced STAT-3 phosphorylation and expression, obviously inhibiting cheese The expression of ammonia protein kinase 1 (JAK1) (P0.05). After the application of STAT-3 inhibitor WP1066, the inhibitory effect of IL-10 on the expression of IDO was significantly reduced and the molecular mechanism of IL-10 inhibition of IDO expression was revealed. Conclusion: (1) IL-10 significantly reduced IDO increase induced by IFN- gamma in the primary astrocytes. (2) IL-10 by inhibiting the activity to play this role. 3) the active expression of STAT-3, SOCS3 and JAK is the internal signal pathway of IL-10 inhibition of IDO expression. (4) in CNS disease, IDO expression is important to explore the effect of IL-10 on the expression of IDO of proinflammatory cytokine IFN- gamma, which can provide theoretical basis and support for the neuroprotective effect of IL-10 in CNS, and to create a new disease for clinical disease. Treat the target.
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R741

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本文編號：2008409