發(fā)布時(shí)間：2018-06-08 10:30

  本文選題：microRNAs + 人腦膠質(zhì)瘤　； 參考：《山東大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景人腦膠質(zhì)瘤(Glioma)是最常見(jiàn)的原發(fā)顱內(nèi)惡性腫瘤,發(fā)病率高達(dá)十萬(wàn)分之五左右,約占所有顱內(nèi)原發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的50%左右,而超過(guò)一半患者為高度惡性且預(yù)后較差的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma Multiforme,GBM)。目前治療方法仍以顯微手術(shù)切除和術(shù)后早期的輔助放、化療為主,即使經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的綜合治療之后,腦膠質(zhì)瘤(尤其是高級(jí)別膠質(zhì)瘤)復(fù)發(fā)率仍較高,預(yù)后較傳統(tǒng)治療沒(méi)有實(shí)質(zhì)性改善,普遍較差。近年來(lái),隨著腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)及臨床研究的深入,基于抗腫瘤侵襲、抗腫瘤血管生成、抗腫瘤癌基因和腫瘤抑制性免疫微環(huán)境的多種治療策略在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中都取得了一定的成果。然而由于人腦膠質(zhì)瘤所具備的極強(qiáng)的惡性增殖能力、耐藥性、侵襲性及免疫抑制微環(huán)境等特點(diǎn),至今相關(guān)的臨床實(shí)驗(yàn)仍未顯著延長(zhǎng)患者生存期并明顯改善患者的預(yù)后。腦膠質(zhì)瘤的增殖須有足夠的血液供應(yīng)來(lái)維持,所以針對(duì)腦膠質(zhì)瘤血管生成的機(jī)制及研究一直是目前膠質(zhì)瘤治療研究討論的熱點(diǎn)之一。然而,在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)有明顯治療作用的研究成果,如抗VEGF藥物等抗腫瘤血管生成治療在實(shí)際的臨床試驗(yàn)中并未達(dá)到預(yù)期的治療效果。近年來(lái),許多團(tuán)隊(duì)通過(guò)大量研究發(fā)現(xiàn),以腦膠質(zhì)瘤為代表的惡性實(shí)體腫瘤中存在著一種新的血管生成機(jī)制,即血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry,VM)。隨著對(duì)腦膠質(zhì)瘤血管生成機(jī)制的研究進(jìn)展,越來(lái)越多的證據(jù)表明,這種非典型的血管生成機(jī)制可能是以抗VEGF為代表的多種抗腫瘤血管生成療法失敗的原因之一。因此,進(jìn)一步深入研究血管生成擬態(tài),闡明其主要的調(diào)控通路,找到并阻斷促進(jìn)擬態(tài)血管形成的關(guān)鍵靶點(diǎn),可能會(huì)為抗膠質(zhì)瘤血管生成療法提供新的策略。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)人腦膠質(zhì)瘤,尤其是高級(jí)別膠質(zhì)瘤具有非�；钴S的血管生成能力,但是這種豐富的血供對(duì)增殖代謝旺盛的膠質(zhì)瘤細(xì)胞而言仍相對(duì)不足,因此,在腫瘤實(shí)體內(nèi)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞普遍處于低氧狀態(tài)。低氧狀態(tài)是實(shí)體惡性腫瘤的重要特征之一,在人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中,低氧區(qū)域廣泛存在,并且與膠質(zhì)瘤的生物學(xué)特性密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)外大量研究表明,低氧對(duì)膠質(zhì)瘤的影響表現(xiàn)在不但能夠顯著上調(diào)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖以及增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力等方面,而且它作為促進(jìn)血管生成的使動(dòng)因素,可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞上調(diào)VEGF等多種促血管生成因子,以形成新的腫瘤血管,為腫瘤的生長(zhǎng)提供物質(zhì)基礎(chǔ)來(lái)源。然而血管生成擬態(tài)作為一種完全不同的新型血管生成模式,其重要性受到越來(lái)越多的關(guān)注。血管生成擬態(tài)是高侵襲性實(shí)體腫瘤特有的血管生成方式之一,形成過(guò)程中無(wú)血管內(nèi)皮細(xì)胞的參與,僅依靠部分高侵襲腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞自身的遷移和形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)化等方式,形成一種類似血管樣的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)通道,進(jìn)而為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)提供血液供應(yīng)。由于不依靠?jī)?nèi)皮細(xì)胞的參與,這種由腫瘤細(xì)胞自身組成的擬態(tài)血管不但形成迅速,而且具有較強(qiáng)的血液供應(yīng)能力,能夠滿足腫瘤細(xì)胞對(duì)物質(zhì)和能量代謝的直接需求。腫瘤細(xì)胞形成的血管生成擬態(tài)這種非典型血管特性可能是導(dǎo)致抗腫瘤血管生成治療效果不佳的重要原因之一。盡管已有研究報(bào)道了調(diào)控血管生成擬態(tài)的多個(gè)分子通路,但具體分子通路仍未明確,需進(jìn)一步深入的研究。本研究在對(duì)腦膠質(zhì)瘤低氧環(huán)境的研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn),低氧是促進(jìn)膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)形成的重要使動(dòng)因素之一,而低氧誘導(dǎo)的多種微小RNA(microRNA)也參與了這一調(diào)控過(guò)程。microRNAs一直是近年來(lái)人腦膠質(zhì)瘤的研究熱點(diǎn),它在細(xì)胞代謝、增殖、凋亡、死亡等各種生物學(xué)過(guò)程中均發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。microRNAs為一類短小的單鏈內(nèi)源性非編碼RNA,是一種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因,它的調(diào)控過(guò)程主要是通過(guò)與靶基因的3’端非翻譯區(qū)中的特異性種子序列相結(jié)合,誘導(dǎo)該基因的信使RNA(mRNA)的降解或翻譯抑制,從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性。所以,目前普遍應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中的微小RNA就是依據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康睦眠@一原理而設(shè)計(jì)的。由于腦膠質(zhì)瘤的增殖特性,研究表明膠質(zhì)瘤組織微環(huán)境中的嚴(yán)重低氧狀態(tài)能夠顯著影響腫瘤細(xì)胞中microRNA的表達(dá)。血管生成擬態(tài)形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)就是腫瘤細(xì)胞的遷移和腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)化,因此,參與膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、遷移的microRNA以及相關(guān)靶基因,在低氧對(duì)腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤血管生成擬態(tài)的調(diào)控中起到重要作用。其中,我們首次發(fā)現(xiàn)microRNA-584-3p和microRNA-let-7f能夠顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞低氧誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)的形成,并同時(shí)參與了膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移的調(diào)控過(guò)程。除了極強(qiáng)的血管生成能力,人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤具有較高的侵襲特性,它也是導(dǎo)致膠質(zhì)瘤惡性程度進(jìn)展的重要原因之一。膠質(zhì)瘤細(xì)胞的形態(tài)轉(zhuǎn)化及生物學(xué)特性與本身的侵襲特性與遷移密切相關(guān),而較強(qiáng)的侵襲性是膠質(zhì)瘤的重要惡性表型之一。近年研究表明具有上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymaltransition, EMT)的腫瘤細(xì)胞惡性程度更高,另外,腫瘤細(xì)胞模擬血管內(nèi)皮細(xì)胞參與形成擬態(tài)血管表型的整個(gè)過(guò)程,本質(zhì)就是上皮與間充質(zhì)間的相互轉(zhuǎn)化。因此,在擬態(tài)血管形成過(guò)程中,調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、遷移和EMT的分子及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能起到比較重要的作用。所以,與膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、遷移相關(guān)的microRNAs在膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成過(guò)程中也應(yīng)該具有重要的調(diào)控作用。本研究課題揭示并探討了低氧誘導(dǎo)的人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)增強(qiáng)的現(xiàn)象,并進(jìn)一步研究了與之相關(guān)的關(guān)鍵調(diào)控microRNAs及其具體分子作用機(jī)制。本研究主要分以下幾部分：首先,我們研究了低氧對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成的促進(jìn)作用,以及血管生成擬態(tài)與膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲遷移能力之間的密切關(guān)系；然后,利用我們前期研究中發(fā)現(xiàn)并證實(shí)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中具有侵襲遷移調(diào)控作用的microRNAs (microRNA-584-3p和microRNA-Let-7f)進(jìn)行了血管生成擬態(tài)的相關(guān)檢測(cè),證實(shí)了二者在抑制低氧對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成擬態(tài)上調(diào)中的作用；最后,對(duì)microRNA-584-3p和microRNA-Let-7f調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞低氧誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)的具體分子機(jī)制進(jìn)行了進(jìn)一步的研究和探討。本課題旨在為人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的抗血管生成治療提供新的靶點(diǎn)方面理論依據(jù)。第一部分microRNA-584-3p通過(guò)調(diào)控ROCK1抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞低氧誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)(VM)的機(jī)制研究1.通過(guò)統(tǒng)計(jì)不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤(WHO分級(jí))患者組織標(biāo)本中VM陽(yáng)性表達(dá),分析其與膠質(zhì)瘤級(jí)別的相關(guān)性。首先,收集膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本以及正常腦組織標(biāo)本(WHO分級(jí)I級(jí)8例、II級(jí)28例、III級(jí)15例、IV級(jí)30例,以及正常腦組織對(duì)照3例),分別進(jìn)行石蠟切片免疫組織化學(xué)染色(CD34+PAS雙染法),檢測(cè)各組織標(biāo)本中VM的陽(yáng)性率。結(jié)果顯示：VM的陽(yáng)性率與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)具有相關(guān)性,高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤VM的陽(yáng)性率明顯高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.通過(guò)定量檢測(cè)VM陰性及陽(yáng)性膠質(zhì)瘤患者組織標(biāo)本中microRNA-584-3p的表達(dá),分析其表達(dá)差異性。依據(jù)VM的表達(dá)將患者腫瘤組織分為陰性表達(dá)組和陽(yáng)性表達(dá)組,提取其總RNA,然后通過(guò)定量Real-Time PCR檢測(cè)這些標(biāo)本中microRNA-584-3p的表達(dá)水平。結(jié)果提示：VM陽(yáng)性患者的microRNA-584-3p表達(dá)水平顯著低于VM陰性患者的microRNA-584-3p表達(dá)水平,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.結(jié)合患者的生存資料研究VM表達(dá)與膠質(zhì)瘤術(shù)后生存期之間的關(guān)系通過(guò)對(duì)膠質(zhì)瘤患者的隨訪,統(tǒng)計(jì)病人生存期,依據(jù)VM的免疫組化染色結(jié)果將患者分為VM陰性組和VM陽(yáng)性組,然后將兩組患者進(jìn)一步行Kaplan-Meier生存分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)VM陽(yáng)性表達(dá)患者的預(yù)后較差,顯著低于VM陰性表達(dá)患者的生存期(p0.01),中位生存期僅為328天(其中僅高級(jí)別III級(jí)和IV級(jí)患者的VM陽(yáng)性組中位生存期為281天)。4.通過(guò)對(duì)microRNA-584-3p的過(guò)表達(dá)及敲除,研究其對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲遷移能力、細(xì)胞骨架和血管生成擬態(tài)的作用和影響。通過(guò)應(yīng)用人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系A(chǔ)172和U87轉(zhuǎn)染microRNA-584-3p過(guò)表達(dá)(Mimics)和敲除(Inhibitor)后,使用CCK8法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其過(guò)表達(dá)和敲除對(duì)細(xì)胞活性的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后兩者對(duì)兩種細(xì)胞系細(xì)胞活性沒(méi)有明顯影響。將人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞進(jìn)行microRNA-584-3p過(guò)表達(dá)和敲除的轉(zhuǎn)染,然后使用羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽對(duì)細(xì)胞骨架進(jìn)行免疫熒光染色,結(jié)果表明microRNA-584-3p能顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的極性,使細(xì)胞內(nèi)張力纖維消失并變?yōu)橐环N圓形的形態(tài)；另外我們將轉(zhuǎn)染后的A172細(xì)胞接種于Matrigel基質(zhì)膠包被的96孔板中,觀察接種后6小時(shí)的血管生成擬態(tài)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)microRNA-584-3p能顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的血管生成擬態(tài)形成,而敲除microRNA-584-3p則能顯著促進(jìn)血管生成擬態(tài)的發(fā)生。5.研究低氧對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成擬態(tài)的影響同樣將膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞和U87細(xì)胞接種于Matrigel基質(zhì)膠包被的96孔板中,接種后在低氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6小時(shí),觀察血管生成擬態(tài)形成情況,培養(yǎng)結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧能夠顯著促進(jìn)血管生成擬態(tài)形成。6.研究microRNA-584-3p過(guò)表達(dá)及敲除對(duì)低氧下膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成擬態(tài)的影響將膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞和U87細(xì)胞進(jìn)行microRNA-584-3p的過(guò)表達(dá)和敲除轉(zhuǎn)染,然后分別接種于Matrigel基質(zhì)膠包被的96孔板中,置于低氧培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)。動(dòng)態(tài)觀察兩種細(xì)胞系血管生成擬態(tài)隨時(shí)間的變化(A172細(xì)胞觀察時(shí)間點(diǎn)為4h、6h、10h、12h; U87細(xì)胞觀察時(shí)間點(diǎn)為6h、8h、10h、12h)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),microRNA-584-3p過(guò)表達(dá)能完全抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的血管生成擬態(tài)形成,而敲除microRNA-584-3p能顯著促進(jìn)血管生成擬態(tài)的形成,并將血管生成擬態(tài)形成時(shí)間顯著提前。7.研究microRNA-584-3p對(duì)低氧環(huán)境下膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管生成擬態(tài)形成的調(diào)控機(jī)制我們前期研究發(fā)現(xiàn)：ROCK1是microRNA-584-3p的直接作用靶點(diǎn),而藥物Y27632可特異性抑制該靶分子；本研究應(yīng)用藥物Y27632抑制ROCK1后,結(jié)果表明應(yīng)用藥物后能夠抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成,且抑制效果比microRNA-584-3p過(guò)表達(dá)后更為顯著。而microRNA-584-3p的敲除對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成的促進(jìn)作用也可被Y27632抑制ROCK1后阻斷。低氧組的抑制效果同樣顯著。綜上所述,本研究結(jié)果表明：人腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中VM陽(yáng)性表達(dá)率隨著膠質(zhì)瘤級(jí)別升高而升高,并且VM陽(yáng)性表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者術(shù)后1年生存率較VM陰性表達(dá)患者顯著降低,由此可見(jiàn)VM可能是評(píng)估膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的潛在指標(biāo)；VM陽(yáng)性表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者的microRNA-584-3p的表達(dá)水平顯著低于VM陰性表達(dá)者,過(guò)表達(dá)microRNA-584-3p能夠顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞VM的形成,而敲除microRNA-584-3p則能顯著促進(jìn)VM的形成,并將VM形成的時(shí)間顯著提前；抑制ROCK1能阻斷VM的形成及microRNA-584-3p敲除對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤VM形成的促進(jìn)作用,因此ROCK1可能是microRNA-584-3p調(diào)控VM形成的下游靶分子。所以本研究提示,microRNA-584-3p通過(guò)抑制ROCK1來(lái)阻斷膠質(zhì)母細(xì)胞瘤低氧誘導(dǎo)VM的形成,是一個(gè)抑癌基因。第二部分microRNA-Let-7f通過(guò)調(diào)控POSTN抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞低氧誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)(VM)的機(jī)制研究1.統(tǒng)計(jì)不同WHO級(jí)別的膠質(zhì)瘤患者組織標(biāo)本中VM陽(yáng)性表達(dá)率并分析其與膠質(zhì)瘤級(jí)別的相關(guān)性同第一部分實(shí)驗(yàn)方法,使用石蠟切片免疫組織化學(xué)染色(CD34+PAS雙染法)檢測(cè)45例患者的膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本(WHO分級(jí)I級(jí)4例、II級(jí)8例、III級(jí)13例、IV級(jí)20例、以及正常腦組織對(duì)照2例),結(jié)果同樣顯示：VM的陽(yáng)性率與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)具有相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)VM的陽(yáng)性率隨著膠質(zhì)瘤級(jí)別升高而升高,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.檢測(cè)VM陽(yáng)性和陰性表達(dá)膠質(zhì)瘤患者組織中microRNA-let-7f的表達(dá)差異同理提取45例患者腫瘤組織標(biāo)本總RNA,然后通過(guò)定量real-time PCR檢測(cè)這些標(biāo)本中microRNA-let-7f的表達(dá)水平,結(jié)果表明：VM陽(yáng)性患者的microRNA-let-7f表達(dá)水平顯著低于VM陰性患者microRNA-let-7f表達(dá)水平(p0.05)。3.結(jié)合患者的生存資料研究VM與膠質(zhì)瘤術(shù)后生存期之間的關(guān)系同理通過(guò)隨訪45例膠質(zhì)瘤患者的生存期,根據(jù)VM的免疫組化染色結(jié)果,將膠質(zhì)瘤患者分為VM陽(yáng)性組和VM陰性組兩組,然后進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析,結(jié)果同樣顯示VM陽(yáng)性組的膠質(zhì)瘤患者術(shù)后1年生存率較VM陰性患者顯著降低(p0.05)4.研究microRNA-let-7f敲除及過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞活性、侵襲遷移及血管生成擬態(tài)的影響①利用CCK8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)和敲除對(duì)轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞活力沒(méi)有影響。②利用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)常氧下microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)和敲除對(duì)轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞的遷移能力的影響,結(jié)果顯示microRNA-let-7f能顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力。③同樣將microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)和敲除轉(zhuǎn)染的A172細(xì)胞接種于被Matrigel基質(zhì)膠包被的96孔板中,培養(yǎng)觀察6小時(shí)后發(fā)現(xiàn)：過(guò)表達(dá)microRNA-let-7f能顯著抑制A172細(xì)胞的血管生成擬態(tài)形成,而敲除microRNA-let-7f則能明顯促進(jìn)血管生成擬態(tài)的發(fā)生。因而,結(jié)果表明microRNA-let-7f能夠顯著抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞VM的形成。5.研究microRNA-let-7f調(diào)控低氧下人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)的分子機(jī)制將人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞經(jīng)過(guò)microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)和敲除轉(zhuǎn)染后,分別接種于Matrigel基質(zhì)膠包被的96孔板中,置于常氧或低氧條件下培養(yǎng)。觀察兩種細(xì)胞系血管生成擬態(tài)隨時(shí)間變化的特點(diǎn)(A172觀察時(shí)間點(diǎn)為4h、6h、10h、12h)。結(jié)果顯示：microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)能明顯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的血管生成擬態(tài)形成,而敲除microRNA-let-7f能顯著促進(jìn)血管生成擬態(tài)的發(fā)生,并將血管生成擬態(tài)形成時(shí)間顯著提前。根據(jù)我們前期研究發(fā)現(xiàn),microRNA-let-7f直接作用靶點(diǎn)是POSTN。我們通過(guò)使用該靶點(diǎn)分子的小干擾RNA(siRNA)抑制POSTN,結(jié)果顯示這能夠產(chǎn)生與microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)類似的抑制作用,且更為顯著；而且siRNA抑制POSTN后,使用microRNA-let-7f敲除對(duì)血管生成擬態(tài)的促進(jìn)作用將被阻斷。低氧組的抑制效果同樣顯著。綜上所述,本部分研究結(jié)果顯示：人腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中VM陽(yáng)性表達(dá)的患者microRNA-let-7f的表達(dá)水平顯著低于VM陰性表達(dá)者；通過(guò)敲除及過(guò)表達(dá)microRNA-let-7f轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明microRNA-let-7f能夠抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞VM的形成。microRNA-let-7f直接靶點(diǎn)是POSTN,通過(guò)使用該靶點(diǎn)分子的小干擾RNA抑制POSTN,結(jié)果顯示這能夠產(chǎn)生與microRNA-let-7f過(guò)表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)類似的抑制作用,且更為顯著；而且siRNA抑制POSTN后,使用microRNA-let-7f敲除對(duì)血管生成擬態(tài)的促進(jìn)作用將被阻斷,低氧組的抑制效果同樣顯著。所以本研究顯示,microRNA-let-7f通過(guò)調(diào)控POSTN抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞低氧誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)(VM)的形成,也是一個(gè)抑癌基因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1995491