本文選題：甲基苯丙胺 + 行為敏化��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：毒品濫用是目前困擾世界各國(guó)的嚴(yán)重醫(yī)學(xué)和社會(huì)問(wèn)題,由毒品濫用引發(fā)的疾病和犯罪行為嚴(yán)重影響著人類健康和社會(huì)安定,在我國(guó),冰毒、搖頭丸等新興化學(xué)合成毒品日益流行。甲基苯丙胺(methamphetamine,METH),俗稱“冰毒”,屬于苯丙胺類精神興奮劑。METH為陽(yáng)離子脂溶性分子,極易透過(guò)血腦屏障,選擇性作用在腦干以上的中樞神經(jīng)系統(tǒng),長(zhǎng)期濫用可引起包括嚙齒類或靈長(zhǎng)類動(dòng)物在內(nèi)的神經(jīng)毒性作用,降低猴子和大、小鼠的紋狀體中的神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(Dopamine,DA)及其代謝產(chǎn)物DOPAC(Dihydroxy-phenyl acetic acid,DOPAC)的含量;減少DA與轉(zhuǎn)運(yùn)體的結(jié)合位點(diǎn),抑制色氨酸羥化酶和酪氨酸羥化酶的活性,引起多巴胺及5-羥色胺能廣泛的神經(jīng)末梢損傷,以紋狀體最明顯。METH長(zhǎng)期濫用導(dǎo)致明顯的行為、精神和認(rèn)知功能的異常,如記憶力喪失、攻擊行為、精神異常等癥狀,嚴(yán)重者甚至造成心臟和腦的損傷。但是METH神經(jīng)損傷的相關(guān)作用機(jī)制尚未完全明了。近年來(lái),免疫系統(tǒng)在METH神經(jīng)毒性中的作用研究越來(lái)越廣泛。大量細(xì)胞及動(dòng)物水平的研究結(jié)果提示免疫系統(tǒng)細(xì)胞和分子在暴露于METH后激活,從受體水平、細(xì)胞內(nèi)組件、炎癥因子釋放到能量代謝均發(fā)生變化。例如:單次大劑量給予METH可以引起小鼠紋狀體及海馬的IL-6和TNF-a、大鼠下丘腦IL-1b的蛋白表達(dá)量的升高。但是,METH誘導(dǎo)促炎因子分泌增多的確切機(jī)制研究得并不十分清楚。小膠質(zhì)細(xì)胞是定居在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要免疫細(xì)胞,參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫,并作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的第一道防線對(duì)抗外來(lái)因素的損傷。小膠質(zhì)細(xì)胞參與調(diào)解多種促炎及抗炎因子的釋放,小膠質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)記物的表達(dá)升高與多種中樞系統(tǒng)疾病相關(guān),如阿爾茲海默氏病和帕金森氏病等。小膠質(zhì)細(xì)胞活化同時(shí)調(diào)節(jié)成癮性藥物的獎(jiǎng)賞行為。越來(lái)越多的證據(jù)表明,應(yīng)激或其他因素引起的小膠質(zhì)細(xì)胞活化與促炎因子釋放的增多與轉(zhuǎn)錄因子NF-kB、AP-1、CREB以及STAT的轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)密切相關(guān)。NF-kB是炎癥調(diào)節(jié)中十分重要的轉(zhuǎn)錄因子,抑制NF-kB轉(zhuǎn)錄活性或敲減NF-kB基因,可以明顯抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥因子分泌增多,NF-kB的活化是i NOS及TNF-a等炎癥因子分泌增多的前提條件。膽囊收縮素(cholecystokinin,CCK)是由33個(gè)氨基酸組成的多肽,廣泛存在于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)。CCK通過(guò)激活兩種不同的受體亞型(CCK1R和CCK2R)參與鎮(zhèn)痛、認(rèn)知、獎(jiǎng)賞、學(xué)習(xí)記憶、內(nèi)分泌、免疫等多系統(tǒng)機(jī)能活動(dòng)等過(guò)程,是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。它參與調(diào)解神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,諸如,DA和GABA,CCK有可能作為一種神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)因子。在由VTA投射到NAC的多巴胺神經(jīng)元,CCK與DA存在共釋放。CCK受體敲除的小鼠,DA系統(tǒng)活性受到影響。抑制CCK2受體后,突觸前膜及后膜的多巴胺D2受體敏感性增強(qiáng)。Loonam TM et al等發(fā)現(xiàn)CCK調(diào)節(jié)METH在紋狀體的神經(jīng)化學(xué)反應(yīng)。并且CCK-8在神經(jīng)損傷模型中具有神經(jīng)保護(hù)作用,CCK-8通過(guò)抗炎機(jī)制在糖尿病腎病中發(fā)揮保護(hù)作用。但CCK-8是否對(duì)中樞神經(jīng)炎癥具有抗炎作用,CCK-8是否通過(guò)干預(yù)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥改善METH引起的神經(jīng)毒性作用,目前并無(wú)相關(guān)報(bào)道�；谝陨涎芯勘尘�,本研究通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)及組織學(xué)觀察,明確CCK-8對(duì)METH神經(jīng)損傷過(guò)程的作用及其量效關(guān)系;觀察小膠質(zhì)細(xì)胞表面CCK1/2受體的表達(dá),闡明CCK-8對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞具有何種調(diào)節(jié)作用,以及CCK-8對(duì)炎癥細(xì)胞因子釋放的影響;闡明CCK-8調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化以及炎癥細(xì)胞因子釋放的受體及受體后信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制,以及CCK1/2受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑與調(diào)節(jié)炎癥的信號(hào)途徑之間的相互作用關(guān)系,為CCK-8在甲基苯丙胺濫用防治方面的實(shí)際應(yīng)用提供新的思路和可靠的理論依據(jù)。第一部分CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的行為變化及多巴胺神經(jīng)損傷的作用目的:動(dòng)物水平評(píng)價(jià)外源性CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)小鼠行為變化的作用。包括低劑量METH(1 mg/kg)誘導(dǎo)的小鼠行為敏化的形成、表達(dá);高劑量METH(10 mg/kg)誘導(dǎo)的小鼠刻板行為;并評(píng)價(jià)外源性CCK-8對(duì)METH急性作用引起的高熱及黑質(zhì)紋狀體內(nèi)多巴胺神經(jīng)毒性的作用。方法:1提前15min側(cè)腦室注射CCK-8(0.01、0.1μg)預(yù)處理C57BL/6小鼠,之后腹腔注射METH(1 mg/kg),放入自發(fā)活動(dòng)箱,測(cè)試小鼠30 min內(nèi)活動(dòng)總路程,評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)METH單次注射誘發(fā)的小鼠活動(dòng)性增高的作用;2評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)低劑量METH誘導(dǎo)的小鼠行為敏化的影響。小鼠適應(yīng)性測(cè)試活動(dòng)性3天,腹腔注射METH(1、2 mg/kg)7天,并自然消退7天,然后皮下注射METH 1、2 mg/kg METH激發(fā),測(cè)試小鼠30 min內(nèi)運(yùn)動(dòng)總路程,建立小鼠行為敏化模型,確定METH模型的劑量,之后在形成期及表達(dá)期注射METH前15 min各組小鼠分別給予側(cè)腦室注射不同劑量CCK-8(0.001、0.01、0.1μg)觀察其對(duì)行為敏化形成及表達(dá)的干預(yù)作用。最后,按METH訓(xùn)練時(shí)間,側(cè)腦室注射不同劑量CCK-8(0.01、0.1μg)后,測(cè)試大鼠30 min內(nèi)運(yùn)動(dòng)總路程,觀察CCK-8是否誘導(dǎo)小鼠形成行為敏化;3評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)高劑量METH誘導(dǎo)的小鼠刻板行為的影響,刻板行為評(píng)分參考Sams-Dodd’s刻板行為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。首先觀察METH誘導(dǎo)小鼠刻板行為的劑量效應(yīng)關(guān)系,建立小鼠刻板行為模型,腹腔注射METH(3、10、20、40 mg/kg)一天4次,間隔3 h,最后一次注射METH后評(píng)分1 h,每10 min評(píng)分一次,計(jì)算總分值進(jìn)行比較。之后觀察每次注射METH(3、10 mg/kg)前15 min各組小鼠側(cè)腦室注射CCK-8(1μg)對(duì)小鼠刻板行為評(píng)分的作用。最后,側(cè)腦室單獨(dú)注射CCK-8(1μg),一天4次,時(shí)間間隔3 h,觀察CCK-8本身是否誘導(dǎo)小鼠刻板行為;4評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)高劑量METH誘導(dǎo)的高熱的作用。腹腔注射METH(10 mg/kg)一天4次,間隔3 h,每次METH注射前15 min側(cè)腦室注射CCK-8(1μg),肛溫測(cè)量時(shí)間為第一次注射前30 min、每次藥物注射后1 h及第一次藥物注射后24 h;5評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的紋狀體及黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)損傷的影響。腹腔注射METH(10 mg/kg)一天4次,間隔3 h,每次METH注射前15min側(cè)腦室注射CCK-8(1μg),第一次給藥后24 h處死動(dòng)物。免疫組織化學(xué)及Western blot法檢測(cè)紋狀體內(nèi)多巴胺神經(jīng)元末梢TH及DAT變化,以及中腦黑質(zhì)內(nèi)多巴胺神經(jīng)元的變化。結(jié)果：1 CCK-8(0.01、0.1μg)預(yù)處理明顯抑制METH(1 mg/kg)單次給藥誘發(fā)的小鼠活動(dòng)性增高;2 METH(1、2 mg/kg)誘導(dǎo)小鼠形成明顯的行為敏化。CCK-8(0.01、0.1μg)單藥本身不能誘導(dǎo)小鼠形成行為敏化,但能劑量依賴性的抑制METH(1 mg/kg)誘導(dǎo)的行為敏化的形成期和表達(dá)期小鼠活動(dòng)性增高的程度;3 METH(3、10、20、40 mg/kg)劑量依賴性的升高小鼠刻板行為總評(píng)分,CCK-8(1μg)預(yù)處理對(duì)小鼠刻板行為總評(píng)分無(wú)作用,CCK-8(1μg)預(yù)處理降低METH(3 mg/kg)引起的刻板行為總評(píng)分的升高,但對(duì)METH(10 mg/kg)無(wú)作用;4 CCK-8(1μg)預(yù)處理明顯抑制METH(10 mg/kg)誘導(dǎo)的小鼠高熱,CCK-8對(duì)小鼠體溫?zé)o明顯作用;5 CCK-8(1μg)預(yù)處理改善METH(10 mg/kg)重復(fù)給藥引起的小鼠紋狀體內(nèi)TH及DAT表達(dá)的降低,同時(shí)改善中腦黑質(zhì)內(nèi)TH表達(dá)量的降低。小結(jié):CCK-8預(yù)處理,能夠抑制METH單次或重復(fù)給藥引起的C57BL/6小鼠行為異常,如活動(dòng)性增高,行為敏化的形成和表達(dá)、刻板行為;并減輕METH誘導(dǎo)的紋狀體內(nèi)多巴胺神經(jīng)末梢的損傷、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的降低以及黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞的損傷。這些發(fā)現(xiàn)提示,CCK-8可能對(duì)METH濫用引起的多種癥狀具有治療意義。第二部分CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的作用目的:在體及離體水平評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎癥因子分泌的變化的干預(yù)作用,明確CCK-8對(duì)METH致中樞損傷的炎癥機(jī)制的調(diào)節(jié)作用。方法：1 C57BL/6小鼠,METH 10 mg/kg一天重復(fù)給藥4次,間隔3 h,第一次給藥后24 h取腦組織。應(yīng)用微量樣本多重蛋白定量技術(shù)檢測(cè)METH誘導(dǎo)的小鼠紋狀體炎癥因子變化及CCK-8的干預(yù)作用;免疫組織化學(xué)法觀察METH誘導(dǎo)的小鼠紋狀體、前額葉皮層和海馬的內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化及CCK-8干預(yù)作用;2流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞免疫熒光法鑒定離體小鼠源小膠質(zhì)細(xì)胞系N9細(xì)胞Iba1表達(dá);3 RT-RCR及細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)N9細(xì)胞CCK1R和CCK2R受體m RNA及蛋白水平表達(dá);4 MTT法檢測(cè)METH對(duì)N9細(xì)胞生存率的影響及CCK-8的干預(yù)作用;5流式細(xì)胞術(shù)觀察METH誘導(dǎo)的N9細(xì)胞活化及CCK-8的干預(yù)作用;6 RT-RCR法檢測(cè)METH誘導(dǎo)的N9細(xì)胞炎癥因子m RNA水平變化的時(shí)效及量效關(guān)系,以及CCK-8與METH共處理細(xì)胞對(duì)METH作用的影響;7微量樣本多重蛋白定量技術(shù)檢測(cè)METH誘導(dǎo)的N9細(xì)胞培養(yǎng)上清內(nèi)炎癥因子分泌量的影響,以及CCK-8與METH共處理細(xì)胞對(duì)METH中作用的影響。結(jié)果：1 METH 10 mg/kg一天重復(fù)給藥4次,第一次給藥后24 h紋狀體、前額葉皮層和海馬廣泛的小膠質(zhì)細(xì)胞活化,表現(xiàn)為小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目明顯增多,呈阿米巴樣激活狀態(tài),CCK-8 1mg側(cè)腦室給藥對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)目及形態(tài)無(wú)明顯作用,但在METH給藥前15 min預(yù)處理小鼠,能明顯減弱METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活狀態(tài);METH 10 mg/kg一天重復(fù)給藥4次,第一次給藥后24 h小鼠紋狀體內(nèi)促炎因子MCP-1、IL-6和TNF-a水平明顯升高,抗炎因子IL-10明顯降低,在每次METH給藥前15 min側(cè)腦室給予CCK-8(1mg),明顯減弱METH升高促炎因子與降低抗炎因子分泌的作用,IL-12p70和IFN-g紋狀體內(nèi)含量低,METH及CCK-8作用并不明顯;2活化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)多種的分子標(biāo)記物,Iba1是其中明顯升高的標(biāo)志物之一,Iba1表達(dá)增強(qiáng)表示小膠質(zhì)細(xì)胞活化。我們首先鑒定N9細(xì)胞Iba1的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示N9細(xì)胞Iba1陽(yáng)性表達(dá),細(xì)胞免疫熒光法標(biāo)記N9細(xì)胞Iba1,激光共聚焦顯微鏡觀察可見(jiàn)N9細(xì)胞胞漿及胞膜呈紅色,DAPI標(biāo)記胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞Iba1呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),鑒定結(jié)果顯示N9細(xì)胞具有小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)特性,可應(yīng)用為體外研究小膠質(zhì)細(xì)胞功能的工具細(xì)胞;3 N9細(xì)胞在m RNA及蛋白水平均檢測(cè)到CCK1R與CCK2R在的表達(dá),N9細(xì)胞可用于細(xì)胞模型的建立;4 METH(0、0.5、1、2、4 m M)劑量依賴性降低N9細(xì)胞生存率,CCK-8(0、0.1、0.5、1mM)對(duì)N9細(xì)胞的生存率無(wú)影響,但是CCK-8(0、0.1、0.5、1mM)與METH(0、0.5、1、2、4 m M)共處理N9細(xì)胞24 h,明顯減弱METH對(duì)N9細(xì)胞的損傷作用,對(duì)METH 1 m M的干預(yù)作用最明顯;5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組N9細(xì)胞標(biāo)記的FITC-Iba1的平均熒光強(qiáng)度,LPS 1mg/m L及METH 1m M處理細(xì)胞6 h平均熒光強(qiáng)度值較對(duì)照組明顯升高,METH 1m M成功誘導(dǎo)N9細(xì)胞活化。CCK-8 1mM對(duì)細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度值無(wú)影響;CCK-8 1mM與METH 1m M共同處理細(xì)胞6 h,明顯抑制METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化;6我們檢測(cè)了METH誘導(dǎo)的7種炎癥因子在N9細(xì)胞的表達(dá)變化,包括:IL-1b、IL-6、TNF-a、MCP-1、IL-10、IL-12p70、IFN-g。首先觀察METH的時(shí)效關(guān)系,METH 1 m M處理N9細(xì)胞不同時(shí)間(0、1、3、6、12 h),3 h時(shí)為炎癥因子表達(dá)增強(qiáng)的高峰,促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP1較0 h m RNA表達(dá)明顯增強(qiáng);根據(jù)時(shí)效關(guān)系結(jié)果,我們檢測(cè)METH處理細(xì)胞3h的量效關(guān)系,METH(0、0.5、1、2 m M)處理N9細(xì)胞3 h對(duì)炎癥因子的表達(dá)變化沒(méi)有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系,1 m M METH處理N9細(xì)胞3h引起促炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1表達(dá)明顯升高,抗炎因子IL-10明顯降低;然后METH 1 m M METH處理細(xì)胞3h為細(xì)胞模型,評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的炎癥因子m RNA表達(dá)變化的結(jié)果。CCK-8 1mM對(duì)TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1 m RNA表達(dá)無(wú)影響;CCK-8(0.1、0.5、1mM)劑量依賴性減弱METH引起的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP1m RNA表達(dá)水平升高;7 METH 1mM處理N9細(xì)胞24 h引起促炎因子IL-6、TNF-a分泌量明顯升高,但沒(méi)有引起MCP-1蛋白水平的變化,N9細(xì)胞上清中IL-1b蛋白量明顯低于標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低量,低于標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,對(duì)IL-1b的結(jié)果不做統(tǒng)計(jì),并在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中以IL-6、TNF-a分泌量為指標(biāo)評(píng)價(jià)CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的炎癥因子分泌量增高的作用。METH 1 mM處理N9細(xì)胞24h,促炎因子TNF-α、IL-6分泌明顯增多,CCK-8 1mM對(duì)N9細(xì)胞分泌TNF-α、IL-6無(wú)影響,但CCK-8 1mM與METH 1mM共同處理細(xì)胞明顯抑制METH引起TNF-α、IL-6分泌量的升高。小結(jié):小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CCK1R與CCK2R;在體及離體水平外源性給予CCK-8能夠抑制METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化與促炎因子IL-6和TNF-a分泌增多;CCK-8 能夠減弱METH誘導(dǎo)的N9細(xì)胞生存率的降低。第三部分CCK-8抑制METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞NF-kB活化的受體機(jī)制及信號(hào)通路研究目的:觀察METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化與促炎因子分泌增多與IkB-NF-kB炎癥通路活化的關(guān)系及外源性給予CCK-8的干預(yù)作用;并探討CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB通路活化的受體機(jī)制及CCK受體后PKA/PKC通路與NF-KB信號(hào)通路的交互作用方法：1 METH 1m M作用N9細(xì)胞0、5、15、30、60、90 min,Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞胞核及胞漿phospho-NF-kB p65(Ser536)與NF-kB p65蛋白表達(dá)變化以及胞漿phospho-IkB-a(Ser32)和IkB-a蛋白表達(dá)變化;2 CCK-8不同劑量0、0.1、0.5、1mM與METH 1 m M共同作用N9細(xì)胞30 min,以及METH 1 m M組與METH1m M+CCK-8 1mM分別處理細(xì)胞0、5、15、30 min,Western Blot法檢測(cè)胞核phospho-NF-kB p65(Ser536)與NF-kB p65蛋白以及胞漿phospho-IkB-a(Ser32)和IkB-a蛋白表達(dá)變化;3應(yīng)用CCKR特異性拮抗劑與CCK-8共同干預(yù)METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB通路活化及IL-6和TNF-a的分泌增高,明確CCK-8發(fā)揮中樞抗炎作用的受體機(jī)制;4應(yīng)用c AMP與PLC抑制劑與CCK-8共同干預(yù)METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB通路活化及IL-6和TNF-a的分泌增高,明確CCK受體后PKA/PKC通路與炎癥IkB-NF-kB的相互作用。結(jié)果：1 METH 1m M處理N9細(xì)胞5、15、30 min,引起小膠質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)和胞核內(nèi)pp65、胞漿內(nèi)IkB-a蛋白磷酸化水平顯著上調(diào),在30 min時(shí),胞核內(nèi)NF-kB p65蛋白升高倍數(shù)顯著高于胞漿內(nèi)NF-kB p65的量,說(shuō)明METH處理小膠質(zhì)細(xì)胞,誘導(dǎo)了小膠質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)NF-kB p65入核,激活NF-kB通路,升高NF-kB的轉(zhuǎn)錄活性;2 CCK-8不同劑量0、0.1、0.5、1mM處理N9細(xì)胞30 min,胞核內(nèi)pp65、p65、胞漿內(nèi)p IkB-a和IkB-a均無(wú)明顯作用。CCK-8(0、0.1、0.5、1mM)劑量依賴性的抑制METH 1 m M誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB通路的活化,CCK-8 1mM與METH 1m M共同處理細(xì)胞不同時(shí)間,CCK-8降低METH同一時(shí)間IkB-NF-kB信號(hào)通路的蛋白磷酸化水平的升高程度;3阻斷CCK2R能夠逆轉(zhuǎn)CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)IkB-NF-kB通路活化及促炎因子IL-6和TNF-a分泌增多的抑制作用,而CCK1R拮抗劑則無(wú)此作用,但CCK1R拮抗劑能夠直接抑制METH誘導(dǎo)的IL-6和TNF-a分泌增多; 4 c AMP與PLC抑制劑均不能反轉(zhuǎn)CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)IkB-NF-kB通路活化及促炎因子IL-6和TNF-a分泌增多的抑制作用,但c AMP與PLC抑制劑能夠直接抑制METH誘導(dǎo)的TNF-a分泌增多,PLC抑制劑的作用更明顯。 小結(jié):METH能夠誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IkB-NF-kB通路活化,外源性給予CCK-8能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB信號(hào)通路活化;阻斷CCK2R后CCK-8的抗炎作用被逆轉(zhuǎn),CCK受體后PKA/PKC通路共同與IkB-NF-kB信號(hào)通路相互作用調(diào)節(jié)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥。結(jié)論:本文在體水平評(píng)價(jià)了外源性側(cè)腦室給予神經(jīng)肽CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的C57BL/6活動(dòng)性增高、行為敏化、刻板行為、高熱、以及紋狀體及黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)損傷的影響;并在體及離體水平系統(tǒng)評(píng)價(jià)了CCK-8對(duì)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的作用;系統(tǒng)了研究了METH對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB信號(hào)通路的影響,及CCKR受體及受體后PKA/PKC通路在CCK-8抑制METH誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥中的調(diào)節(jié)作用。得出以下結(jié)論:1外源性給予CCK-8能夠改善METH引起的C57BL/6小鼠活動(dòng)性增高、行為敏化、刻板行為、高熱,減輕METH引起的黑質(zhì)和紋狀體多巴胺神經(jīng)損傷的程度;2小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CCK1R與CCK2R,在體及離體水平外源性給予CCK-8能夠抑制METH誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化與促炎因子IL-6和TNF-a分泌增多。CCK-8 能夠減弱METH誘導(dǎo)的N9細(xì)胞生存率的降低。 3 METH能夠誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IkB-NF-kB通路活化,外源性給予CCK-8能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞IkB-NF-kB信號(hào)通路活化;阻斷CCK2R后CCK-8的抗炎作用被逆轉(zhuǎn),CCK受體后PKA/PKC通路共同與IkB-NF-kB信號(hào)通路相互作用調(diào)節(jié)METH誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741

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本文編號(hào)：1986391