第一部分STAT3和JAK2在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義目的：檢測(cè)STAT3和JAK2在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá),分析兩者的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病理分級(jí)的相關(guān)性。方法：收集2013年5月～2014年4月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院和聊城市腦科醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本共50例為實(shí)驗(yàn)組,其中膠質(zhì)瘤Ⅰ級(jí)5例,Ⅱ級(jí)9例,Ⅲ級(jí)16例,Ⅳ級(jí)20例；按照膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別劃分為低級(jí)別膠質(zhì)瘤組和高級(jí)別膠質(zhì)瘤組,其中Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤患者為低級(jí)別膠質(zhì)瘤組,Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤患者為高級(jí)別膠質(zhì)瘤組。收集同期因外傷或腦出血開(kāi)顱手術(shù)內(nèi)減壓切除的正常腦組織標(biāo)本10例為對(duì)照組。應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)上述標(biāo)本中STAT3和JAK2 mRNA的表達(dá)情況,同時(shí)應(yīng)用western blot方法檢測(cè)STAT3和JAK2蛋白的表達(dá)情況,分析兩者表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病理分級(jí)的相關(guān)性。結(jié)果：（1）50例膠質(zhì)瘤組織中STAT3和：fAK2 mRNA的表達(dá)水平較10例正常腦組織標(biāo)本表達(dá)水平顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（2）50例膠質(zhì)瘤組織中STAT3和JAK2蛋白的表達(dá)水平較10例正常腦組織標(biāo)本表達(dá)水平顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（3）膠質(zhì)瘤組織中STAT3和JAK2蛋白表達(dá)水平與病理分級(jí)呈正相關(guān),即在高級(jí)別病例組中高表達(dá),在低級(jí)別病例組中低表達(dá)。結(jié)論：STAT3和JAK2在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)顯著增高且與病理分級(jí)呈正相關(guān),提示兩者在膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。STAT3和JAK2有可能成為預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的分子標(biāo)志和膠質(zhì)瘤治療的臨床標(biāo)靶。第二部分RAC調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡以及細(xì)胞周期的研究目的：將不同濃度RAC作用于人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞,檢測(cè)RAC對(duì)其增殖、凋亡以及細(xì)胞周期的影響,旨在探討RAC在上述過(guò)程中發(fā)揮的作用,為下一步相關(guān)作用機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。方法：（1）應(yīng)用BrdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度RAC（0、10、20、30、40、50μM）作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞48h后的各組細(xì)胞的存活率；以及50 gM RAC作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)（0、6、12、24、36、48 h）細(xì)胞的存活率;（2）應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（Annexin V-FITC法）分別檢測(cè)不同濃度RAC（0、10、30.50 μM）作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞24 h后的細(xì)胞凋亡情況；以及50 μMRAC作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)（0、6、12、18 h）細(xì)胞的凋亡情況；（3）應(yīng)用流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)不同濃度(0、10、30、50RAC作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞24 h后各組腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期的變化。結(jié)果：（1）BrdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果表明,10-5RAC濃度梯度分別作用48 h后,人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞的存活率逐漸降低,由原來(lái)的98%減少至19%,其中當(dāng)RAC濃度為50μM時(shí)存活率最低,提示U373細(xì)胞的存活率隨RAC作用濃度的增高而逐漸降低；5RAC作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞后,在6、12、24、36、48 h時(shí)U373細(xì)胞的存活率分別為96%、81%、76%、43%和19%,即人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞存活率隨RAC作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低；（2） Annexin V-FITC檢測(cè)結(jié)果表明,隨著RAC濃度的增加,U373細(xì)胞的凋亡數(shù)量亦逐漸增多,其中當(dāng)RAC濃度為50μM時(shí)細(xì)胞凋亡數(shù)量最多；用RAC濃度作用于U373細(xì)胞后,隨著RAC作用時(shí)間的延長(zhǎng),凋亡細(xì)胞的數(shù)量逐漸增多；（3）流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,RAC能夠使人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯在G1期,且隨著RAC作用濃度的增高,G1期細(xì)胞數(shù)量逐漸增多,當(dāng)RAC濃度為50 μM時(shí)U373細(xì)胞中處于G1期的細(xì)胞數(shù)量最多。結(jié)論：（1）RAC對(duì)人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞的增殖有抑制作用,抑制程度存在濃度和時(shí)間依賴性。（2）RAC對(duì)人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的作用,凋亡細(xì)胞的數(shù)量存在濃度和時(shí)間依賴性。（3）RAC能夠使人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞的生長(zhǎng)停滯在G1期,G1期細(xì)胞數(shù)量存在濃度依賴性。第三部分RAC抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用機(jī)制研究目的：通過(guò)對(duì)RAC與JAK2-STAT3信號(hào)通路之間的作用機(jī)制進(jìn)行研究,以期了解RAC抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡的可能作用機(jī)制,為RAC臨床抗腫瘤應(yīng)用提供更為重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：（1）分別用不同濃度（0、10、20、30、40、50μM） RAC作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞,于作用3 h后用western blot檢測(cè)各濃度組細(xì)胞中STAT3和p-STAT3的表達(dá)情況；分別用不同濃度（20、30、40、50、100 μM） AG490（JAK2特異性拮抗劑）作用U373細(xì)胞,于作用3 h后用western blot檢測(cè)各濃度組細(xì)胞中STAT3和p-STAT3的表達(dá)情況；用50μM RAC作用U373細(xì)胞,用western blot分別于不同時(shí)間點(diǎn)（10、30、60、90、120、150 min和180min）檢測(cè)細(xì)胞中STAT3和p-STAT3的表達(dá)情況；（2）用IL-6作用于人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞,用western blot分別于不同時(shí)間點(diǎn)（0、10、20、30、40、50、60 min）檢測(cè)細(xì)胞中p-JAK2蛋白的表達(dá)情況；預(yù)先用50 μM RAC作用U373細(xì)胞,接著再用IL-6作用細(xì)胞,用western blot分別于不同時(shí)間點(diǎn)（0、30、60、90、120、180、340 min）檢測(cè)細(xì)胞中p-JAK2蛋白的表達(dá)情況；（3）分別用不同濃度（0、30、40、50 μM） RAC作用人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞,24h后用western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中Bax、Bak、cyclin D1、Bcl-2、BclxL、 survivin、Mcl-1和VEGF蛋白的表達(dá)。結(jié)果：（1）隨著RAC濃度的增加,人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞中p-STAT3蛋白的表達(dá)量逐漸降,而STAT3蛋白的含量則無(wú)顯著變化；隨著AG490濃度的增加,U373細(xì)胞中p-STAT3蛋白的表達(dá)量逐漸降低,而STAT3蛋白的含量則無(wú)顯著變化；用50 μM RAC作用U373細(xì)胞,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞中p-STA T3的含量逐漸降低,而STAT3的表達(dá)則無(wú)明顯變化；（2）用IL-6作用于U373細(xì)胞,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞中p-JAK2蛋白的表達(dá)量逐漸增高,而JAK蛋白的表達(dá)則無(wú)顯著變化；預(yù)先用50μM RAC作用U373細(xì)胞,接著再用IL-6作用細(xì)胞,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞中p-JAK2蛋白的表達(dá)量逐漸降低,而JAK蛋白的含量則無(wú)顯著變化；（3）RAC作用U373細(xì)胞后,Bak和Bax蛋白的表達(dá)量隨RAC濃度的增高而逐漸增高；survivin、Bcl-2、Bcl-xL、cyclin D1、VEGF、Mcl-1蛋白的表達(dá)均隨RAC濃度的增高而逐漸降低結(jié)論：RAC可能是通過(guò)抑制JAK2/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路,進(jìn)而上調(diào)促凋亡基因的表達(dá)和抑制抗凋亡基因的表達(dá),達(dá)到抑制人膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞的增殖和促凋亡作用。

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015

 

文章目錄

中文摘要

英文摘要

符號(hào)說(shuō)明

第一章 研究背景

第二章 STAT3和JAK2在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義

    2.1 前言

    2.2 對(duì)象與方法

    2.3 結(jié)果

    2.4 討論

    2.5 結(jié)論

第三章 RAC調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡以及細(xì)胞周期的研究

    3.1 前言

    3.2 研究對(duì)象與方法

    3.3 結(jié)果

    3.4 討論

    3.5 結(jié)論

第四章 RAC抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用機(jī)制研究

    4.1 前言

    4.2 研究對(duì)象與方法

    4.3 結(jié)果

    4.4 討論

    4.5 結(jié)論

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