第一部分STAT3和JAK2在人腦膠質瘤中的表達及意義目的：檢測STAT3和JAK2在人腦膠質瘤組織中的表達,分析兩者的表達水平與膠質瘤病理分級的相關性。方法：收集2013年5月～2014年4月在山東大學齊魯醫(yī)院和聊城市腦科醫(yī)院神經外科手術切除的膠質瘤組織標本共50例為實驗組,其中膠質瘤Ⅰ級5例,Ⅱ級9例,Ⅲ級16例,Ⅳ級20例；按照膠質瘤的病理級別劃分為低級別膠質瘤組和高級別膠質瘤組,其中Ⅰ級和Ⅱ級膠質瘤患者為低級別膠質瘤組,Ⅲ級和Ⅳ級膠質瘤患者為高級別膠質瘤組。收集同期因外傷或腦出血開顱手術內減壓切除的正常腦組織標本10例為對照組。應用熒光定量PCR方法檢測上述標本中STAT3和JAK2 mRNA的表達情況,同時應用western blot方法檢測STAT3和JAK2蛋白的表達情況,分析兩者表達水平與膠質瘤病理分級的相關性。結果：（1）50例膠質瘤組織中STAT3和：fAK2 mRNA的表達水平較10例正常腦組織標本表達水平顯著增高,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；（2）50例膠質瘤組織中STAT3和JAK2蛋白的表達水平較10例正常腦組織標本表達水平顯著增高,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；（3）膠質瘤組織中STAT3和JAK2蛋白表達水平與病理分級呈正相關,即在高級別病例組中高表達,在低級別病例組中低表達。結論：STAT3和JAK2在膠質瘤組織中表達顯著增高且與病理分級呈正相關,提示兩者在膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用。STAT3和JAK2有可能成為預測膠質瘤患者預后的分子標志和膠質瘤治療的臨床標靶。第二部分RAC調控膠質瘤細胞增殖、凋亡以及細胞周期的研究目的：將不同濃度RAC作用于人膠質瘤U373細胞,檢測RAC對其增殖、凋亡以及細胞周期的影響,旨在探討RAC在上述過程中發(fā)揮的作用,為下一步相關作用機制的研究奠定基礎。方法：（1）應用BrdU細胞增殖實驗檢測不同濃度RAC（0、10、20、30、40、50μM）作用人膠質瘤U373細胞48h后的各組細胞的存活率；以及50 gM RAC作用人膠質瘤U373細胞后不同時間點（0、6、12、24、36、48 h）細胞的存活率;（2）應用流式細胞術（Annexin V-FITC法）分別檢測不同濃度RAC（0、10、30.50 μM）作用人膠質瘤U373細胞24 h后的細胞凋亡情況；以及50 μMRAC作用人膠質瘤U373細胞不同時間點（0、6、12、18 h）細胞的凋亡情況；（3）應用流式細胞儀分別檢測不同濃度(0、10、30、50RAC作用人膠質瘤U373細胞24 h后各組腫瘤細胞的細胞周期的變化。結果：（1）BrdU細胞增殖檢測試劑盒檢測結果表明,10-5RAC濃度梯度分別作用48 h后,人膠質瘤U373細胞的存活率逐漸降低,由原來的98%減少至19%,其中當RAC濃度為50μM時存活率最低,提示U373細胞的存活率隨RAC作用濃度的增高而逐漸降低；5RAC作用人膠質瘤U373細胞后,在6、12、24、36、48 h時U373細胞的存活率分別為96%、81%、76%、43%和19%,即人膠質瘤U373細胞存活率隨RAC作用時間的延長而逐漸降低；（2） Annexin V-FITC檢測結果表明,隨著RAC濃度的增加,U373細胞的凋亡數(shù)量亦逐漸增多,其中當RAC濃度為50μM時細胞凋亡數(shù)量最多；用RAC濃度作用于U373細胞后,隨著RAC作用時間的延長,凋亡細胞的數(shù)量逐漸增多；（3）流式細胞術結果表明,RAC能夠使人膠質瘤U373細胞的細胞周期停滯在G1期,且隨著RAC作用濃度的增高,G1期細胞數(shù)量逐漸增多,當RAC濃度為50 μM時U373細胞中處于G1期的細胞數(shù)量最多。結論：（1）RAC對人膠質瘤U373細胞的增殖有抑制作用,抑制程度存在濃度和時間依賴性。（2）RAC對人膠質瘤U373細胞有誘導凋亡的作用,凋亡細胞的數(shù)量存在濃度和時間依賴性。（3）RAC能夠使人膠質瘤U373細胞的生長停滯在G1期,G1期細胞數(shù)量存在濃度依賴性。第三部分RAC抑制膠質瘤細胞增殖的作用機制研究目的：通過對RAC與JAK2-STAT3信號通路之間的作用機制進行研究,以期了解RAC抑制膠質瘤細胞增殖、誘導凋亡的可能作用機制,為RAC臨床抗腫瘤應用提供更為重要的實驗依據(jù)。方法：（1）分別用不同濃度（0、10、20、30、40、50μM） RAC作用人膠質瘤U373細胞,于作用3 h后用western blot檢測各濃度組細胞中STAT3和p-STAT3的表達情況；分別用不同濃度（20、30、40、50、100 μM） AG490（JAK2特異性拮抗劑）作用U373細胞,于作用3 h后用western blot檢測各濃度組細胞中STAT3和p-STAT3的表達情況；用50μM RAC作用U373細胞,用western blot分別于不同時間點（10、30、60、90、120、150 min和180min）檢測細胞中STAT3和p-STAT3的表達情況；（2）用IL-6作用于人膠質瘤U373細胞,用western blot分別于不同時間點（0、10、20、30、40、50、60 min）檢測細胞中p-JAK2蛋白的表達情況；預先用50 μM RAC作用U373細胞,接著再用IL-6作用細胞,用western blot分別于不同時間點（0、30、60、90、120、180、340 min）檢測細胞中p-JAK2蛋白的表達情況；（3）分別用不同濃度（0、30、40、50 μM） RAC作用人膠質瘤U373細胞,24h后用western blot檢測各組細胞中Bax、Bak、cyclin D1、Bcl-2、BclxL、 survivin、Mcl-1和VEGF蛋白的表達。結果：（1）隨著RAC濃度的增加,人膠質瘤U373細胞中p-STAT3蛋白的表達量逐漸降,而STAT3蛋白的含量則無顯著變化；隨著AG490濃度的增加,U373細胞中p-STAT3蛋白的表達量逐漸降低,而STAT3蛋白的含量則無顯著變化；用50 μM RAC作用U373細胞,隨著時間的延長,細胞中p-STA T3的含量逐漸降低,而STAT3的表達則無明顯變化；（2）用IL-6作用于U373細胞,隨著時間的延長,細胞中p-JAK2蛋白的表達量逐漸增高,而JAK蛋白的表達則無顯著變化；預先用50μM RAC作用U373細胞,接著再用IL-6作用細胞,隨著作用時間的延長,細胞中p-JAK2蛋白的表達量逐漸降低,而JAK蛋白的含量則無顯著變化；（3）RAC作用U373細胞后,Bak和Bax蛋白的表達量隨RAC濃度的增高而逐漸增高；survivin、Bcl-2、Bcl-xL、cyclin D1、VEGF、Mcl-1蛋白的表達均隨RAC濃度的增高而逐漸降低結論：RAC可能是通過抑制JAK2/STAT3信號傳導通路,進而上調促凋亡基因的表達和抑制抗凋亡基因的表達,達到抑制人膠質瘤U373細胞的增殖和促凋亡作用。

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015

 

文章目錄

中文摘要

英文摘要

符號說明

第一章 研究背景

第二章 STAT3和JAK2在人腦膠質瘤中的表達及意義

    2.1 前言

    2.2 對象與方法

    2.3 結果

    2.4 討論

    2.5 結論

第三章 RAC調控膠質瘤細胞增殖、凋亡以及細胞周期的研究

    3.1 前言

    3.2 研究對象與方法

    3.3 結果

    3.4 討論

    3.5 結論

第四章 RAC抑制膠質瘤細胞增殖的作用機制研究

    4.1 前言

    4.2 研究對象與方法

    4.3 結果

    4.4 討論

    4.5 結論

參考文獻

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