本文選題：神經(jīng)元培養(yǎng) + 雌激素�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 明確雌激素對L型鈣通道電流的調(diào)控作用以及對L型鈣通道蛋白水平的影響。 方法： 1.將新生Sprague-Dawley（SD）大鼠皮層神經(jīng)元培養(yǎng)，定期倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)及走形，第7天行免疫熒光神經(jīng)元鑒定。 2.以新生大鼠原代皮層神經(jīng)元為研究對象，培養(yǎng)至7天左右時給予干預(yù)，實驗設(shè)溶劑對照組及雌激素E2（1umol/L）組，干預(yù)72小時后采用全細胞膜片鉗技術(shù)測定L型鈣通道電流。 3.培養(yǎng)至第7天左右神經(jīng)元給予干預(yù)，，實驗設(shè)溶劑對照組、雌激素受體拮抗劑ICI182780（簡稱ICI，100nmol/L）組、雌激素E2（1umol/L）組及雌激素E2（1umol/L）加雌激素拮抗劑ICI182780（100nmol/L）組，干預(yù)72小時后提取細胞蛋白用蛋白免疫印記Western blot方法檢測神經(jīng)元總Cav1.2量的變化。 結(jié)果： 1、培養(yǎng)第7天的細胞胞體飽滿，折光性強，走形良好，軸突密集形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，免疫熒光結(jié)果顯示大部分細胞MAP-2染色陽性（紅染），為神經(jīng)元細胞，形態(tài)良好。 2.全細胞膜片鉗結(jié)果顯示雌激素處理組L型鈣通道電流較對照組神經(jīng)元電流明顯減少（P＜0.05）， 3.蛋白免疫印跡Westernblot結(jié)果提示雌激素處理后Cav1.2的量明顯減少（P＜0.01），正常組與雌激素受體拮抗劑ICI、雌激素加ICI組無明顯差異（P＞0.05）。 結(jié)論： 1.原代皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)成功。 2.雌激素處理可以減少神經(jīng)元L型鈣通道電流。 3.雌激素處理減少了原代皮層神經(jīng)元LTCC蛋白Cav1.2
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of estrogen on L type calcium channel current and on L type calcium channel protein level. Methods: 1. The cortical neurons of newborn Sprague-Dawley (SD) rats were cultured, and the morphology and aberration of the neurons were observed by inverted microscope. The neurons were identified by immunofluorescence on the 7th day. 2. Primary cortical neurons of newborn rats were taken as the study object. After 7 days of culture, the primary cortical neurons were treated with solvent control group and estradiol / L group. After 72 hours of intervention, L-type calcium channel currents were measured by whole-cell patch clamp technique. 3. The neurons were cultured for 7 days. The rats were divided into solvent control group, estrogen receptor antagonist ICI182780 (ICI182780) group, estrogen E2O1umol/ L group and estrogen E2O1umolr-L + ICI182780nmol / L group. After 72 hours of intervention, the changes of the total Cav1.2 of neurons were detected by protein immunoimprinted Western blot. Results: 1. On the 7th day of culture, the cells had full body, strong refraction, good shape, dense axons formed reticular structure, and the immunofluorescence results showed that most of the cells were positive for MAP-2 staining (red staining, neuronal cells, good morphology). 2. The results of whole-cell patch clamp showed that the L-type calcium channel current in estrogen treated group was significantly lower than that in control group (P < 0.05). 3. Western blot Westernblot results showed that the amount of Cav1.2 decreased significantly after estrogen treatment (P < 0.01). There was no significant difference between normal group and estrogen receptor antagonist ICI, estrogen plus ICI group (P > 0.05). Conclusion: 1. Primary cortical neurons were successfully cultured. 2. Estrogen treatment reduced L-type calcium channel currents in neurons. 3. Estrogen treatment reduced LTCC Cav1.2 in primary cortical neurons
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R741

【共引文獻】

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本文編號：1933773