發(fā)布時間：2018-05-19 17:29

  本文選題：腦缺血 + 糖尿病�。� 參考：《寧夏醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:使用高乳酸模擬體外糖尿病伴隨腦缺血模型,研究其對星形膠質細胞的損傷作用及與線粒體通路的關系,為進一步理解糖尿病加重腦缺血損傷的機制提供新的思路。研究方法:本研究利用體外培養(yǎng)的MA-h小鼠海馬趾星形膠質細胞進行試驗。待細胞傳代至第二代時,為了探討高乳酸對星形膠質細胞的損傷作用及其機制,將MA-h細胞進行以下分組:(1)對照組:使用DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(2)使用含有2.5mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(3)使用含有5mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(4)使用含有10mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。(5)使用含有15mM乳酸的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察不同濃度乳酸對星形膠質細胞形態(tài)的影響,MTT法檢測細胞生存率;DHE熒光探針檢測ROS的含量;TMRM熒光探針檢測線粒體膜電位情況;Western Blot及免疫細胞熒光檢測MA-h細胞胞漿與胞核中凋亡相關因子caspase-3,線粒體通路相關因子caspase-9,AIF、CytC以及總PKA和磷酸化的PKA在不同處理組中的表達情況。研究結果:(1)倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),與對照組相比較,2.5mM乳酸干預后星形膠質細胞密度減少,胞體大小不一,突起變小變短,細胞間的連接減少,隨著乳酸濃度的增加,細胞密度進一步減少,部分細胞由貼壁狀態(tài)轉為懸浮狀態(tài),死亡細胞和細胞碎片增多。(2)MTT實驗結果顯示:使用2.5mM的乳酸干預后,星形膠質細胞的存活率由對照組的(0.35±0.02)降低至(0.25±0.05),隨著乳酸濃度的增加,細胞存活率持續(xù)下降,干預乳酸濃度為15m M時,存活率僅為(0.18±0.03)。(3)DHE熒光探針檢測ROS實驗發(fā)現(xiàn):各組別的熒光強度在600nm紫外光激發(fā)下達到最強,相同波長的紫外光激發(fā)下,2.5mM乳酸干預組的熒光強度明顯高于對照組(P0.05),5mM乳酸干預組的熒光強度高于2.5m M乳酸干預組(P0.05)。(4)TMRM熒光探針實驗發(fā)現(xiàn):各組別的熒光強度在580nm紫外光激發(fā)下達到最強,相同波長的紫外光激發(fā)下,2.5mM乳酸干預組的熒光強度明顯高于對照組(P0.05)。(3)Western Blot及免疫細胞熒光實驗顯示:高乳酸干預組星形膠質細胞胞漿中中凋亡相關因子caspase3、線粒體通路相關因子AIF、CytC、caspase-9的表達均明顯高于對照組(P0.05),且乳酸濃度越高,增加效果越明顯,而胞核中AIF的表達無明顯差異(P0.05);乳酸干預組T-PKA的表達高于對照組(P0.05),5mM乳酸能使胞漿中PKA的磷酸化水平顯著升高(P0.05),而胞核中PKA的磷酸化水平隨著干預乳酸濃度的增加而不斷降低。結論:(1)高乳酸能造成星形膠質細胞的損傷,存活率下降,乳酸濃度越高,損傷作用越明顯.(2)線粒體膜電位下降,ROS產(chǎn)生增加參與了高乳酸對星形膠質細胞的損傷。(3)高乳酸通過線粒體通路損傷星形膠質細胞
[Abstract]:Objective: to study the effects of high lactate on astrocyte injury and mitochondrial pathway in order to provide a new idea for further understanding the mechanism of diabetes mellitus exacerbating cerebral ischemia. Methods: MA-h mouse hippocampal astrocytes were cultured in vitro. In order to investigate the damage effect of high lactic acid on astrocytes and its mechanism, MA-h cells were divided into the following groups: control group: DMEM/F12 complete culture medium (37 鈩，

本文編號：1911006