本文選題：動物模型 + 空腸彎曲菌��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 1構(gòu)建空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni，Cj）經(jīng)自然途徑感染Hartley豚鼠致周圍神經(jīng)病的動物模型。 2鼠齡對空腸彎曲菌感染Hartley豚鼠致周圍神經(jīng)的影響，選出病變率較高周齡的Hartley豚鼠。為后續(xù)研究以空腸彎曲菌為感染源，經(jīng)自然途徑感染Hartley豚鼠致吉蘭-巴雷綜合征（Guillain-Barré syndrome，GBS）奠定模型基礎(chǔ)。 方法： 1菌株的選擇：選取自軸索型GBS患者路雷的糞便標(biāo)本中分離、培養(yǎng)出的空腸彎曲菌lulei株。 2菌懸液的制備：將凍存的空腸彎曲菌lulei株復(fù)蘇、傳代，并進(jìn)行空腸彎曲菌的形態(tài)及生化學(xué)鑒定，菌株純化后制成3×108cfu/ml的空腸彎曲菌菌懸液。 3實(shí)驗(yàn)動物分組：將SPF級健康的3~5周齡Hartley豚鼠24只，分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組根據(jù)Hartley豚鼠周齡不同分為3周齡組（A組|）、4周齡組（B組）和5周齡組（C組），各6只。對照組分為布氏肉湯組（D組）和空白對照組（E組），各3只。 4攻毒方案：Hartley豚鼠在每次灌喂前禁食12小時(shí)、禁水4小時(shí)。A、B、C組每只Hartley豚鼠每次灌喂3×108cfu/ml的空腸彎曲菌菌懸液2ml，D組給予滅菌的布氏肉湯2ml。灌喂后立即給予Hartley豚鼠食物及水。連續(xù)攻毒4周，每周連續(xù)攻毒3天。 5實(shí)驗(yàn)動物觀察：自首次灌喂當(dāng)日起每天觀察Hartley豚鼠的臨床癥狀（參考Hartley豚鼠EAN模型的評分標(biāo)準(zhǔn)）、日常的精神狀態(tài)、皮毛色澤及是否腹瀉等表現(xiàn)。 6取材：于末次攻毒1周后對Hartley豚鼠進(jìn)行解剖，取其兩側(cè)坐骨神經(jīng)。 7坐骨神經(jīng)病理觀察：左側(cè)坐骨神經(jīng)二次取材后做透射電子顯微鏡觀察神經(jīng)病理變化；右側(cè)坐骨神經(jīng)二次取材后做鋨酸染色，每只Hartley豚鼠隨機(jī)分離100根神經(jīng)單絲，單盲法在光鏡下閱片觀察坐骨神經(jīng)病理變化并對不同周齡Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)的病變率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果： 1實(shí)驗(yàn)動物觀察 空腸彎曲菌經(jīng)口服灌喂Hartley豚鼠后，參考Hartley豚鼠EAN模型的評分標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行評分，A組、B組、C組、D組及E組臨床癥狀均為0級，臨床癥狀無明顯異常。但發(fā)現(xiàn)首次灌喂20天后，4周齡1號、2號、5號及3周齡1號Hartley豚鼠肚皮較臟，其他Hartley豚鼠肚皮干凈，未出現(xiàn)精神萎靡、腹瀉等表現(xiàn)。 2周圍神經(jīng)病理表現(xiàn) 鋨酸染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)可見神經(jīng)單絲粗細(xì)不均，軸索腫脹，髓鞘節(jié)段性回縮，呈“長城”樣改變。對照組Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)可見神經(jīng)單絲邊緣光滑，粗細(xì)均勻。 透射電子顯微鏡結(jié)果：電鏡觀察支持光鏡結(jié)果，，顯示實(shí)驗(yàn)組豚鼠坐骨神經(jīng)病理變化主要為軸索不同程度的變性，輕者表現(xiàn)為軸索內(nèi)微絲、微管稀疏及結(jié)構(gòu)紊亂消失，線粒體嵴和膜融合，線粒體空樣化、減少，髓鞘尚完整；脫髓鞘及髓鞘分層；嚴(yán)重者可見軸索及髓鞘結(jié)構(gòu)消失，裂解解體形成不規(guī)則的團(tuán)塊等。 3對鋨酸染色結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 鋨酸染色可見，不同周齡Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)的病變率不同。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對鋨酸染色所見的不同周齡Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)的病變數(shù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。得出P＜0.05（χ2=249.41），拒絕H0，接受H1，認(rèn)為五組豚鼠坐骨神經(jīng)病變率不相等、存在差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為進(jìn)一步進(jìn)行比較兩組間的差別，采用χ2分割法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05，校正后檢驗(yàn)水準(zhǔn)α′=0.005。兩兩比較可見：4周齡Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)病變率高于3周齡、5周齡、布氏肉湯及空白對照組，3周齡、4周齡及5周齡Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)病變率均高于布氏肉湯及空白對照組，且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3周齡與5周齡組、布氏肉湯組與空白對照組的Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)病變率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1空腸彎曲菌經(jīng)自然途徑感染Hartley豚鼠可致100%坐骨神經(jīng)病理損傷。 2實(shí)驗(yàn)組結(jié)果可見坐骨神經(jīng)單絲的平均病變率為14.00%~38.00%，其中以4周齡豚鼠病變率最高，但臨床癥狀不明顯。 3空腸彎曲菌經(jīng)自然途徑感染Hartley豚鼠導(dǎo)致的亞臨床表現(xiàn)的周圍神經(jīng)病變通過鋨酸染色及透射電子顯微鏡證實(shí)可能是吉蘭-巴雷綜合征的輕型病理變化。在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中我們有必要測定抗GM1及GD1b抗體、延長灌喂后觀察時(shí)間及尋找一種觀察Hartley豚鼠肢體輕微無力的方法等，以進(jìn)一步構(gòu)建GBS源Cj致豚鼠周圍神經(jīng)損傷的GBS動物模型。
[Abstract]:Purpose :

1 . The animal model of guinea pig - induced peripheral neuropathy induced by natural route was constructed .

In order to study the effect of 2 - mouse - age on the peripheral nerves of guinea pigs infected with camphora , the guinea pigs with higher lesion rate were selected .

Method :

1 . Selection of strains : The isolated and cultured lulei strain was isolated and cultured in stool specimens from the patients with self - axial line .

2 . Preparation of suspension of bacteria : resuscitating the lulei strain , passaging , and carrying out the morphological and biochemical identification of the camptosine strain , and then the strain was purified to prepare the air - intestinal curved bacterial suspension of 3 & # xd7 ; 108 cfu / ml .

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本文編號：1882621