本文選題：壞死性凋亡 + 化學(xué)性缺氧　； 參考：《中國藥理學(xué)通報(bào)》2017年04期

【摘要】：目的探討壞死性凋亡(necroptosis)是否參與化學(xué)性缺氧誘導(dǎo)的小鼠HT22海馬細(xì)胞損傷和炎癥。方法采用化學(xué)性缺氧模擬劑氯化鈷(CoCl_2)作用HT22細(xì)胞建立化學(xué)性缺氧損傷的細(xì)胞模型。蛋白質(zhì)免疫印跡法測定受體相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)的水平;應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)測定海馬細(xì)胞的存活率;乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中的LDH活性;羅丹明123染色熒光顯微鏡照相法檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential,MMP);雙氯熒光素染色熒光顯微鏡照相法測定胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平;ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中白介素-1β(IL~(-1)β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的水平。結(jié)果 600μmol·L~(-1)CoCl_2作用HT22細(xì)胞36 h可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性作用,使細(xì)胞存活率降至(52.0±2.65)%,成功建立化學(xué)性缺氧損傷的海馬細(xì)胞模型;此外,CoCl_2可引起HT22細(xì)胞的多種損傷和炎癥,表現(xiàn)為培養(yǎng)液中LDH活性升高,ROS過度生成,MMP丟失以及炎癥因子(IL~(-1)β和TNF-α)分泌均增多。40~100μmol·L~(-1)壞死性凋亡抑制劑necrostatin-1(Nec-1)共處理可抑制CoCl_2引起的HT22細(xì)胞存活率降低,其中80μmol·L~(-1)時(shí)對細(xì)胞毒性的抑制作用最明顯。同時(shí),80μmol·L~(-1)Nec-1可對抗CoCl_2可引起HT22細(xì)胞的上述多種損傷和炎癥。此外,CoCl_2處理HT22細(xì)胞6~48 h可促進(jìn)RIP3的表達(dá)水平,Nec-1可明顯抑制CoCl_2對RIP3表達(dá)的上調(diào)作用。結(jié)論壞死性凋亡介導(dǎo)化學(xué)性缺氧誘導(dǎo)的HT22海馬神經(jīng)元損傷和炎癥。
[Abstract]:Aim to investigate whether necrotic apoptosis is involved in the injury and inflammation of HT22 hippocampal cells induced by chemical hypoxia. Methods HT22 cells were treated with chemical anoxic analogue cobalt chloride CoCl2) to establish the cell model of chemical hypoxia injury. Western blotting was used to detect the level of receptor interaction protein 3(receptor interacting protein 3, cell counting kit-8 CCK-8 was used to determine the survival rate of hippocampal cells, and lactate dehydrogenase LDH kit was used to detect the activity of LDH in cell culture medium. Detection of mitochondrial membrane potential by Rhodamine 123 staining fluorescence microscopy and dichlorofluorescein staining fluorescence microscopy for intracellular reactive oxygen species oxygen speciesrosimetry The level of tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽). Results after treated with 600 渭 mol L~(-1)CoCl_2 for 36 h, HT22 cells had obvious cytotoxic effects, and the cell survival rate was reduced to 52.0 鹵2.65g / L, and the model of hippocampal cells injured by chemical hypoxia was successfully established, in addition, CoCl2 could induce many kinds of damage and inflammation of HT22 cells. The results showed that the increase of LDH activity and the loss of Ros excessive production of MMP and the increase of 尾 and TNF- 偽 secretion of CoCl_2 induced HT22 cell survival were inhibited by co-treatment with necrostatin-1Nec-1), a necrostatin-1Nec-1) inhibitor of necrostatin-1Nec-1). The inhibitory effect of 80 渭 mol L ~ (-1) on cytotoxicity was the most obvious. At the same time, 80 渭 mol L~(-1)Nec-1 could antagonize the damage and inflammation of HT22 cells induced by CoCl_2. In addition, HT22 cells treated with CoCl2 for 6h for 48 h could promote the expression of RIP3. Nec-1 could significantly inhibit the up-regulation of RIP3 expression by CoCl_2. Conclusion Necrosis apoptosis mediates the injury and inflammation of HT22 hippocampal neurons induced by chemical hypoxia.
【作者單位】： 南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院麻醉科;南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院疼痛科;南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 8140050613) 湖南省教育廳資助課題(No 15C1208)
【分類號】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1874531