本文選題：CRMPs + 生長(zhǎng)錐��； 參考：《暨南大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 探討大鼠海馬神經(jīng)元CRMPs與生長(zhǎng)錐微管和微絲的相互作用。 材料和方法： 取孕17d的SPF級(jí)SD孕鼠，采用梯度蔗糖離心的方法提取生長(zhǎng)錐，透射電鏡和掃描電鏡觀察分離物的形態(tài)，免疫熒光和免疫印跡檢測(cè)GAP-43的表達(dá)。采用多重免疫熒光技術(shù)分析CRMPs與微管和微絲在海馬組織中以及在神經(jīng)元中的共定位情況，免疫共沉淀技術(shù)確定CRMPs能否與微管和微絲發(fā)生相互作用，通過對(duì)CRMP5的干擾和過表達(dá)觀察其對(duì)微管和微絲的影響。 結(jié)果： （1）梯度濃度蔗糖離心把腦組織懸液分離為3層，上層密度小，濃度位于上清至0.75mol/L蔗糖之間，中層密度較大，濃度位于0.75～1.0mol/L蔗糖之間，下層密度最大，濃度位于1.0～2.66mol/L蔗糖之間；掃描電鏡見分離物顆粒均為白色、大小不一、形狀不規(guī)則的顆粒，上層較中、下層顆粒體積大；透射電鏡見上層分離物為大量著色淺的空泡狀結(jié)構(gòu)，顆粒大小較均勻，中、下層分離物為大量著色深的致密顆粒及不規(guī)則形態(tài)的細(xì)胞碎片，顆粒大小不均勻；免疫熒光及免疫印跡證實(shí)分離物中均有大量GAP-43表達(dá)，上層分離物幾乎無GFAP表達(dá)，中、下層有少量GFAP表達(dá)。 （2）在海馬組織中，CRMPs與微管和微絲的共定位均在CA1-CA3區(qū)中央部分最多，在CA1-CA3區(qū)邊緣部分及CA4區(qū)較多，DG區(qū)最少，兩者共定位系數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在神經(jīng)元中，CRMPs與微管的共定位主要位于神經(jīng)元胞質(zhì)、突起主干及突起分支處，放大觀察生長(zhǎng)錐，共定位主要位于C區(qū)，P區(qū)、T區(qū)微管分布較少，CRMPs與微絲的共定位主要位于神經(jīng)元胞質(zhì)、突起主干、突起分支處及生長(zhǎng)錐，放大觀察生長(zhǎng)錐，共定位位于整個(gè)生長(zhǎng)錐，C區(qū)、T區(qū)、P區(qū)微絲分布均較多，以神經(jīng)元或以生長(zhǎng)錐為對(duì)象時(shí)，CRMPs與微絲的共定位系數(shù)均高于微管，，兩者共定位系數(shù)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；免疫共沉淀試驗(yàn)證實(shí)CRMPs與微管和微絲均可發(fā)生相互結(jié)合；神經(jīng)元中CRMP5過表達(dá)時(shí)，微管和微絲表達(dá)量均增多，并且在P區(qū)增多最明顯，CRMP5被干擾時(shí)，微管和微絲表達(dá)量均減少，也在P區(qū)減少最明顯。 結(jié)論： （1）梯度蔗糖離心可以依據(jù)顆粒的大小分離腦組織的不同組分，獲取的分離物最上層內(nèi)的組分經(jīng)鑒定為生長(zhǎng)錐； （2）CRMPs在海馬組織中與微管和微絲共存相同的部位； （3）CRMPs在體內(nèi)可與微管和微絲發(fā)生相互結(jié)合，并可影響微管和微絲的表達(dá)量及分布，CRMPs可能通過介導(dǎo)細(xì)胞骨架的相互作用來調(diào)節(jié)神經(jīng)元突起的生長(zhǎng)。
[Abstract]:Objective: To investigate the interaction of CRMPs with growth cone microtubules and microfilaments in rat hippocampal neurons. Materials and methods: The growth cone was extracted by gradient sucrose centrifugation. The morphology of the isolate was observed by transmission electron microscope (TEM) and scanning electron microscope (SEM). The expression of GAP-43 was detected by immunofluorescence and immunoblotting. The co-localization of CRMPs with microtubules and microfilaments in hippocampal tissues and neurons was analyzed by using multiple immunofluorescence techniques. The immunoprecipitation technique was used to determine whether CRMPs could interact with microtubules and microfilaments. The effects of CRMP5 on microtubules and microfilaments were observed by interference and overexpression. Results: 1) the brain suspension was separated into three layers by gradient concentration sucrose centrifugation, the upper density was small, the concentration was between the supernatant and the 0.75mol/L sucrose, the middle density was higher, the concentration was between 0.75~1.0mol/L sucrose, the lower layer density was the largest, and the concentration was between 1.0~2.66mol/L sucrose. Scanning electron microscopy (SEM) showed that the particles were all white, of different sizes and irregular in shape. The upper layer was larger than the lower, and the transmission electron microscope showed that the upper layer was of a large amount of light colored vacuole structure, the particle size was uniform, and the size of the particles was medium. In the lower layer, a large number of stained dense particles and irregular cell fragments were found, and the size of the particles was not uniform. Immunofluorescence and immunoblotting confirmed that there was a large amount of GAP-43 expression in the isolates, and there was almost no GFAP expression in the upper layer of the isolates. A small amount of GFAP was expressed in the lower layer. (2) in hippocampal tissue, the co-localization of CRMPs with microtubules and microfilaments was the most in the central part of the CA1-CA3 region, and the least in the marginal part of the CA1-CA3 area and in the CA4 area. There was no significant difference in the colocalization coefficient between the two regions. The co-localization of CRMPs and microtubules in neurons was mainly located in the cytoplasm of neurons, the main process trunk and the branches of the processes, and the growth cones were observed by magnification. The co-localization of CRMPs and microfilaments was mainly located in the cytoplasm of neurons, the main process, the branches of the processes and the growth cones, and the growth cones were observed by magnification. The co-localization coefficients of CRMPs and microfilaments were higher than those of microtubules when the neurons or growth cones were used as objects. The colocalization coefficients of CRMPs and microfilaments were higher than those of microtubules. The colocalization coefficients of CRMPs and microfilaments were significantly higher than those of microtubules. Immunoprecipitation assay confirmed that CRMPs could bind to microtubules and microfilaments, and that the expression of CRMP5 in neurons increased with the increase of P region, and the expression of microtubules and microfilaments decreased when P region increased most obviously. The decrease was also most obvious in P region. Conclusion: 1) gradient sucrose centrifugation can separate different components of brain tissue according to the size of particles, and the components in the upper layer of the obtained isolate are identified as growth cones. CRMPs coexisted with microtubules and microfilaments in hippocampal tissue. CRMPs can bind to microtubules and microfilaments in vivo and affect the expression and distribution of microtubules and microfilaments. CRMPs may regulate the growth of neuronal processes by mediating the interaction of cytoskeleton.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R741

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本文編號(hào)：1855931