本文選題：少突膠質(zhì)細胞 + 少突膠質(zhì)前體細胞　； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：神經(jīng)退行性疾病是一類慢性、進行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病的總稱。其發(fā)病率高、病期長、并且缺乏特異性治療方法與措施。該類疾病給個人、家庭、社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔與社會負擔的雖然這類疾病的病變部位及原因各不相同,但髓鞘產(chǎn)生不同程度破壞或發(fā)生脫髓鞘病變是它們的共同點。主要表現(xiàn)為伴隨著少突膠質(zhì)細胞(oligodendrocyte,OL)的減少以及脫髓鞘。雖然對于這類疾病有很多的研究,少突膠質(zhì)細胞的損傷和再生修復的的具體機制依然不清楚。少突膠質(zhì)細胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)唯一的髓鞘形成細胞。其前體細胞-少突膠質(zhì)前體細胞(oligodendrocyte progenitor cell,OPC)具有良好的增殖能力,能在體內(nèi)增殖、遷移,最后形成成熟的少突膠質(zhì)細胞,為髓鞘形成發(fā)揮極其重要的作用。無論內(nèi)源性誘導還是外源性移植,如何獲取大量的OPC,或者促進OPC再生成為治療脫髓鞘疾病的關鍵。我們前期發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細胞(astrocytes,AST)與OPC在接觸共培養(yǎng)的條件下促進其增殖,但具體調(diào)控增殖的機制尚不清楚。本實驗探討了ASTs影響OPCs增殖的具體機制。為治療脫髓鞘疾病提供了新的實驗依據(jù)與理論基礎。本研究分為以下三個部分:第一部分:星形膠質(zhì)細胞通過cx47促進opcs增殖本部分通過使用星形膠質(zhì)細胞與opc不同的培養(yǎng)方式,利用細胞流式、edu檢測細胞周期及增殖。采用二代測序分析了不同培養(yǎng)條件下所有的差異基因,篩選有效的差異基因cx47。構建有效的cx47sirna,wb、pcr檢測cx47蛋白基因變化,細胞流式檢測細胞周期、edu檢測細胞增殖情況。主要結果如下:1.opcs與asts直接接觸共培養(yǎng)后,光鏡、流式、edu檢測顯示asts促進opcs增殖較單獨培養(yǎng)組與上清培養(yǎng)組更明顯,處于細胞周期s期細胞比例明顯增加(p0.05),新生細胞數(shù)目占總細胞數(shù)比例顯著增加(p0.001)。2.opcs與asts直接接觸共培養(yǎng)中,cx47促進了opcs增殖。3.干擾cx47后,cx47蛋白與基因表達明顯下降(p0.001),細胞周期阻滯(p0.01),增殖能力降低(p0.001)。上述結果說明asts促進opcs的增殖可能通過直接接觸的cx47。第二部分:星形膠質(zhì)細胞通過cx47促進少突膠質(zhì)前體細胞s1pr3表達誘導其增殖在證實接觸共培養(yǎng)更能促進opcs增殖的前提下,我們進一步比較了共培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)條件下下游膜信號的變化,利用接觸式共培養(yǎng)組差異表達基因go細胞組分分析,顯示主要位于細胞外基質(zhì)、胞外區(qū)、細胞膜。以g-proteincoupledreceptoractivity聚類分析顯示,在s1prs家族中表達三個亞型,s1pr1、s1pr3、s1pr5,尤以s1pr3在接觸共培養(yǎng)組較單獨opcs培養(yǎng)組差異性最為顯著。本部分在asts與opcs接觸共培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)的條件下,進一步檢測了cx47影響少突膠質(zhì)前體細胞增殖的機制,流式、共聚焦檢測cx47干擾后ca2+的表達,wb、pcr檢測下游的s1pr3表達,流式檢測細胞周期。edu檢測細胞增殖情況。利用s1pr3的拮抗劑后,wb檢測了s1pr3,edu檢測細胞增殖情況。主要結果如下:1.cx47干擾后,流式檢測ca2+濃度下降(p0.05),與共聚焦結果一致(p0.001)。2.下游受體信號的變化以s1prs家族在共培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)差異最為顯著,尤以s1pr3最為明顯。3.干擾cx47后s1pr3的蛋白表達下降(p0.001)、基因表達下降(p0.01)。4.拮抗s1pr3后,相比單獨培養(yǎng)組,在共培養(yǎng)組opcs細胞周期g1期阻滯(p0.05),edu檢測新生細胞數(shù)占總細胞數(shù)比例下降(p0.001)。以上結果表明opcs與asts接觸共培養(yǎng)中,cx47觸發(fā)ca2+內(nèi)流,上調(diào)s1pr3的表達調(diào)控opcs的增殖。第三部分:asts通過上調(diào)少突膠質(zhì)前體細胞s1pr3激活erk/p21通路誘導其增殖本部分在asts與opcs接觸共培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)的條件下,主要探討了Cx47調(diào)控S1PR3表達促進少突膠質(zhì)前體細胞增殖的下游通路。S1PR3拮抗后,WB檢測了ERK1/2、p-ERK1/2、p21的蛋白變化。PCR檢測了Id4的變化。EdU檢測細胞增殖。主要結果如下:1.S1PR3拮抗后,p-ERK1/2降低(p0.001),p21表達增高(p0.05),細胞增殖能力下降(p0.001)。2.ERK1/2阻斷后,Id4表達減少(p0.05),細胞周期阻滯(p0.05),細胞增殖能力下降(p0.001)。3.S1PR3可以增加ERK1/2磷酸化,減少OPCs的G1期所占比例,促進OPCs進入S期,從而調(diào)控其增殖。以上結果表明星形膠質(zhì)細胞通過上調(diào)少突膠質(zhì)前體細胞S1PR3表達激活ERK1/2通路誘導其增殖。
[Abstract]:In this study , we found that astrocytes ( AST ) and OPC ( OPC ) could be used as the sole myelinated cells in the central nervous system . The expression of s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 , s1pr3 and s1pr3 were detected .

【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R741

【參考文獻】

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本文編號：1846333