本文選題：低氧 + 膠質瘤�。� 參考：《山西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:(1)探討21%氧氣濃度和5%氧氣濃度的培養(yǎng)環(huán)境對膠質瘤細胞的增殖、自我更新能力和侵襲遷移能力的影響;(2)初步探究常氧及低氧環(huán)境下Wnt通路與腫瘤增殖及侵襲的關系。方法:(1)于21%氧氣濃度和5%氧氣濃度培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)膠質瘤細胞,經過1d、2d、3d、4d、5 d、6d、7d后,顯微鏡下觀察并拍照,CCK-8實驗測定細胞增殖,細胞成球實驗和單克隆實驗測定成球能力,Real Time-q PCR實驗檢測Wnt通路相關m RNA水平及Western Blot實驗檢測相關蛋白表達水平;(2)于21%氧氣濃度和5%氧氣濃度培養(yǎng)箱培養(yǎng)培養(yǎng)膠質瘤細胞,培養(yǎng)24小時后,分別以劃痕實驗測定細胞遷移能力,細胞侵襲實驗測定細胞侵襲能力,Real Time-q PCR實驗檢測EMT相關m RNA水平及Western Blot實驗檢測EMT相關蛋白表達水平。結果:(1)以CCK-8實驗證明低氧環(huán)境下膠質瘤細胞增殖活力增強,細胞成球實驗及單克隆實驗證明膠質瘤細胞在5%的低氧氣濃度條件下自我更新能力和21%氧氣濃度組增強,PCR實驗及Western實驗證實Wnt/β-catenin經典通路標志蛋白β-catenin表達上調,而介導該蛋白數(shù)量平衡的GSK-3β的表達減少。作為是經典Wnt通路下游靶蛋白c-Myc明顯上調。低氧環(huán)境能夠促進腫瘤細胞增殖;(2)通過細胞劃痕實驗的觀察和對細胞遷移距離的計算,可以確定經低氧環(huán)境處理的腫瘤細胞的遷移速率明顯高于常氧組。而在細胞侵襲試驗中5%低氧氣濃度組細胞的穿膜細胞數(shù)多于21%濃度組。結合WB實驗和PCR實驗,低氧環(huán)境處理的膠質瘤細胞中EMT(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)正性上游調節(jié)因子的表達增加,E-cad表達下調而N-cad表達明顯增加。因此可以進一步認為低氧微環(huán)境通過對腫瘤細胞的EMT過程的啟動和維持參與到腫瘤的侵襲和遷移過程。結論:(1)低氧氣濃度能夠啟動Wnt通路并上調有關的下游靶蛋白使膠質瘤的增殖能力,自我更新能力增強。(2)低氧氣濃度上調膠質瘤細胞中的Vim、N-cad蛋白上調,下調E-cad等,啟動和維持EMT過程,提高膠質瘤細胞侵襲和遷移能力。本課題為國家自然科學基金項目(編號:81271316):平滑肌前體細胞移植介導內皮祖細胞基因甲基化作用早期干預動脈硬化性腦梗塞的分子機制研究。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of 21% oxygen concentration and 5% oxygen concentration on the proliferation, self-renewal and invasion of glioma cells. (2) to explore the relationship between Wnt pathway and tumor proliferation and invasion in normoxic and hypoxic environment. Methods glioma cells were cultured in 21% oxygen concentration incubator and 5% oxygen concentration incubator respectively. After 1 d ~ 2 d ~ 3 d ~ 4 ~ 5 d ~ 5 ~ 5 d ~ (-1) ~ 6 d ~ (-1) after 7 days, CCK-8 cell proliferation was observed and photographed under microscope, and CCK-8 assay was used to determine the proliferation of glioma cells. Glioma cells were cultured in 21% oxygen and 5% oxygen concentration incubators by real Time-q PCR assay and Western Blot assay. After cultured for 24 hours, the cell migration ability was measured by scratch assay, the cell invasion ability was measured by real Time-q PCR assay, and the expression of EMT related protein was detected by Western Blot assay and real Time-q PCR assay. Results CCK-8 assay showed that the proliferation activity of glioma cells was increased under hypoxia. Cell sphericity and monoclonal assay showed that glioma cells had the ability of self-renewal at low oxygen concentration of 5%, and the enhancement of the expression of 尾 -catenin in Wnt/ 尾 -catenin classic pathway was confirmed by Western assay and enhanced polymerase chain reaction with 21% oxygen concentration, and the expression of 尾 -catenin in glioma cells was up-regulated. However, the expression of GSK-3 尾 mediated the quantitative balance of the protein decreased. C-Myc, the downstream target protein of classical Wnt pathway, was upregulated significantly. Through the observation of cell scratch test and the calculation of cell migration distance, it can be concluded that the migration rate of tumor cells treated with hypoxic environment is significantly higher than that of normoxic group. In the cell invasion test, the number of transmembrane cells in the 5% low oxygen concentration group was more than that in the 21% concentration group. In combination with WB assay and PCR assay, the expression of positive upstream regulatory factor of EMT(Epithelial-mesenchymal transitionship was increased in cultured glioma cells treated with hypoxia. The expression of E-cad was down-regulated and the expression of N-cad was increased significantly. It is suggested that hypoxia microenvironment is involved in tumor invasion and migration through the initiation and maintenance of the EMT process of tumor cells. Conclusion low oxygen concentration can activate the Wnt pathway and up-regulate the downstream target proteins and enhance the ability of glioma to proliferate and self-renew. 2) low oxygen concentration can up-regulate the Vim-N-cad protein and down-regulate E-cad in glioma cells. To initiate and maintain the EMT process and improve the invasion and migration of glioma cells. This paper is a project of National Natural Science Foundation of China (No.: 81271316): the molecular mechanism of endothelial progenitor cell gene methylation mediated by smooth muscle precursor cell transplantation in early intervention of arteriosclerotic cerebral infarction.
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

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