本文選題：GRP78 + 自噬　； 參考：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：我們的前期研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)自噬介導(dǎo)了缺血預(yù)適應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用，本研究旨在探索在神經(jīng)細(xì)胞缺血預(yù)適應(yīng)模型中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP78與自噬激活之間的內(nèi)在聯(lián)系。 方法：培養(yǎng)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤(pheochromocytoma cells, PC12cells)細(xì)胞系和原代鼠皮層神經(jīng)元，建立缺血預(yù)適應(yīng)(ischemic preconditioning, IPC)和缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation model, OGD)模型，預(yù)缺血前采用BAPTA(dibromo-1,2-bis(aminophenoxy)ethane N,N,N9,N9-tetraacetic acid，0.125－2μM)給藥抑制GRP78表達(dá)，用siRNA干擾PC12細(xì)胞GRP78的表達(dá)，并用慢病毒過表達(dá)GRP78蛋白建立GRP78穩(wěn)轉(zhuǎn)株。采用CCK8(Cell Counting Kit-8)法檢測細(xì)胞增殖力，免疫印跡和免疫熒光法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子伴侶GRP78和自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR以及p-p70S6K的變化，采用透射電鏡觀察自噬體的生成情況。 結(jié)果： IPC對PC12細(xì)胞和原代神經(jīng)元OGD具有保護(hù)作用，神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)IPC處理12h后，GRP78、LC3和Beclin1上調(diào)，多層膜包裹的自噬體形成增加。用BAPTA抑制GRP78表達(dá)，能夠取消IPC對OGD的保護(hù)作用，并降低IPC引起的GRP78、LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR的升高。GRP78siRNA亦能取消IPC對OGD的保護(hù)作用，并降低IPC引起的LC3、Beclin1升高。相反，過表達(dá)GRP78能夠提高PC12細(xì)胞對OGD的耐受性，并增加LC3、Beclin1和p-AMPK的表達(dá)，但降低p-mTOR、p-p70S6K1的表達(dá)，然而，應(yīng)用GRP78siRNA處理過表達(dá)GRP78的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，則完全取消了LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR和p-p70S6K1的變化。 結(jié)論：缺血預(yù)適應(yīng)（IPC）上調(diào)GRP78，并激活自噬。抑制或干擾GRP78的表達(dá)可以取消預(yù)適應(yīng)的保護(hù)作用并抑制自噬，而過表達(dá)GRP78則經(jīng)由AMPK-mTOR途徑激活自噬，，可能由此產(chǎn)生對神經(jīng)細(xì)胞缺血損傷的保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective : To explore the role of endoplasmic reticulum stress - induced autophagy in the protection of ischemic preconditioning . The aim of this study was to explore the relationship between GRP78 and autophagy activation in neural cell ischemic preconditioning .

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本文編號：1816500