本文選題：蛛網(wǎng)膜下腔出血 + 氫氣��； 參考：《南京大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：研究背景：腦蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是神經(jīng)外科臨床常見疾病,主要由顱內(nèi)動脈瘤破裂引起。SAH常伴隨高死亡率和高致殘率,病理生理機(jī)制復(fù)雜,并發(fā)癥較多,一直為神經(jīng)外科研究熱點。既往相關(guān)研究主要圍繞SAH后腦血管痙攣(cerebral vasospasm, CVS)等機(jī)制展開,尤其多針對SAH后CVS引起的缺血性損傷及神經(jīng)功能障礙。但幾十年的相關(guān)基礎(chǔ)和臨床研究并無明確進(jìn)展。而越來越多的研究表明SAH后早期(24-72小時)的腦損傷(early brain injury, EBI)在SAH的嚴(yán)重不良預(yù)后中起重要作用。并且,諸多證據(jù)顯示SAH后的EBI與SAH后發(fā)生的腦氧化應(yīng)激損傷和腦水腫密切相關(guān)。近年,大量研究證實氫氣(H2)是一種能夠選擇性清除毒性自由基而不影響正常生理氧化反應(yīng)的較溫和的抗氧化劑,且H2在中樞神經(jīng)內(nèi)的保護(hù)作用已有較多報道。故本實驗主要研究H2是否能對SAH后的早期腦損傷起保護(hù)作用,并研究相關(guān)機(jī)制。目的：1)建立穩(wěn)定的兔枕大池二次自體動脈血注射的SAH模型；2)驗證H2生理鹽水溶液對兔SAH后EBI的保護(hù)效果及行為學(xué)效果；3)研究H2生理鹽水溶液對SAH后EBI的可能保護(hù)機(jī)制。方法：使用兔枕大池二次注血法建立穩(wěn)定的SAH模型。新西蘭兔隨機(jī)分為四組：對照組,SAH組,SAH+溶劑(生理鹽水)對照組,SAH+ H2生理鹽水溶液組。兔枕大池注血制作SAH模型后,使用H2生理鹽水溶液或生理鹽水于兔SAH后腹腔注射治療；動物處死前進(jìn)行行為學(xué)評分；于斷頭取腦后分光光度法檢測雙顳葉腦組織丙二醛含量；Western blot法檢測對應(yīng)腦組織內(nèi)凋亡、抗凋亡相關(guān)蛋白；干濕重比法檢測各組動物腦組織水含量；TUNEL染色法展示和定位神經(jīng)元凋亡,并用尼氏染色法顯示腦損傷程度；電泳遷移率改變實驗(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)和免疫熒光雙染法分別定量和定位NF-κB在神經(jīng)元內(nèi)表達(dá)與激活情況；Real-time PCR法檢測NF-κB下游相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平；同時ELISA法檢測各組動物SAH后腦組織炎癥因子(TNF-α、IL-β)的水平變化。結(jié)果：各實驗組模型在SAH后72小時取腦時均被確定有效。檢測結(jié)果表明較對照組,兔SAH后72小時腦組織丙二醛含量明顯升高(P0.05),腦水腫明顯(P0.05)；ELISA檢測結(jié)果顯示炎癥因子(TNF-α、IL-β)水平明顯增高；Western blot檢測顯示SAH后72小時凋亡相關(guān)蛋白caspase-12/3含量明顯增多(P0.05)；同時,TUNEL染色、尼氏染色顯示明顯的神經(jīng)元凋亡和腦損傷(P0.05)。溶劑對照組檢測呈類似結(jié)果。然而,SAH后予以H2治療可明顯降低腦組織丙二醛含量,減少凋亡相關(guān)蛋白,減輕腦水腫,明顯緩解早期腦損傷(P0.05)。另外,H2治療SAH后,EMSA和免疫熒光顯示NF-κB被明顯激活,同時下游相關(guān)抗凋亡蛋白Bcl-xL基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.05)；但ELISA檢測結(jié)果顯示H2治療并未明確降低炎癥因子水平。此外,兔行為學(xué)評分結(jié)果顯示各組動物神經(jīng)功能評分未見明顯差異。結(jié)論：我們發(fā)現(xiàn)兔SAH后EBI明確發(fā)生,且SAH后早期的氧化應(yīng)激反應(yīng)及腦水腫在SAH后EBI中起重要作用。H2治療能夠抑制SAH后氧化應(yīng)激并減輕腦水腫。此外,我們在中樞神經(jīng)系統(tǒng)首次發(fā)現(xiàn)SAH后H2可以激活NF-κB/Bcl-xL抗凋亡通路,但H2未能明顯改變SAH后的NF-κB相關(guān)炎癥反應(yīng)。因此,H2可以通過抑制SAH后的氧化應(yīng)激、減輕腦水腫、激活NF-κB/Bcl-xL通路而減輕SAH后的EBI。以上結(jié)果提示H2在SAH后的EBI治療中有潛在治療價值,有可能成為針對SAH的有效治療劑。
[Abstract]:Background: subarachnoid hemorrhage (SAH) is a common clinical disease in the Department of neurosurgery. The rupture of intracranial aneurysms is mainly caused by the high mortality and high disability rate of.SAH, and the pathophysiological mechanism is complex and the complications are many. The previous related studies mainly focus on the blood of SAH after cerebral blood. Guan Jingluan (cerebral vasospasm, CVS) and other mechanisms, especially for ischemic injury and neurological dysfunction caused by CVS after SAH, have not been made clear for decades of related basic and clinical studies. More and more studies have shown that the early (24-72 hour) brain damage (early brain injury, EBI) after SAH is in SAH serious bad precondition. In addition, many evidence shows that EBI after SAH is closely related to brain oxidative stress and brain edema after SAH. In recent years, a large number of studies have confirmed that hydrogen (H2) is a mild antioxidant that can selectively remove toxic free radicals without affecting normal physiological oxidation, and the protection of H2 in the central nervous system More reports have been reported. Therefore, this experiment mainly studies whether H2 can protect the early brain injury after SAH and study the related mechanisms. Objective: 1) to establish a stable SAH model of two autologous arterial blood injection in the rabbit pillow big pool; 2) to verify the protective effect of H2 saline solution on rabbit SAH after SAH and the behavioral effect of EBI; and 3) to study H2 students. The possible protective mechanism of SAH EBI after SAH. Methods: a stable SAH model was established by using the rabbit pillow large pool blood injection method. New Zealand rabbits were randomly divided into four groups: control group, SAH group, SAH+ solvent (physiological saline) control group, SAH+ H2 physiological saline solution group. After the rabbit pillow big pool was injected with blood to make SAH model, a solution of H2 physiological saline solution or birth was used. The saline was treated with intraperitoneal injection after SAH in rabbits; the behavior score was evaluated before the death of the animals; the content of malondialdehyde in the brain tissue of the double temporal lobe was detected by the spectrophotometric method after taking the head off the brain; the Western blot method was used to detect the apoptosis and anti apoptosis related protein in the brain tissue, and the water content of the brain tissue in each group was detected by the dry wet weight ratio method; the TUNEL staining method was used. The neuron apoptosis was shown and located, and the degree of brain injury was detected by Nissl staining. The expression and activation of NF- kappa B in the neurons were quantified and identified by electrophoretic mobility shift assay (EMSA) and immunofluorescence double staining, and Real-time PCR method was used to detect the transcriptional level of the downstream related genes of NF- kappa B; At the same time, ELISA method was used to detect the level changes of inflammatory factors (TNF- alpha, IL- beta) in the brain tissue of each group of animals. Results: all experimental groups were determined to be effective when taking brain 72 hours after SAH. The results showed that the content of malondialdehyde in brain tissue increased significantly (P0.05) and brain edema (P0.05) at 72 hours after SAH in the control group (P0.05), and the results of ELISA detection were obvious. The levels of inflammatory factors (TNF- alpha, IL- beta) were significantly higher; Western blot detection showed that the apoptosis related protein caspase-12/3 content increased significantly (P0.05) 72 hours after SAH; meanwhile, TUNEL staining, Nissl staining showed obvious neuronal apoptosis and brain damage (P0.05). Decrease the content of malondialdehyde in brain tissue, reduce apoptosis related protein, reduce brain edema and alleviate early brain injury (P0.05). In addition, after the treatment of SAH, EMSA and immunofluorescence showed that NF- kappa B was obviously activated, while the downstream related anti apoptotic protein Bcl-xL gene transcriptional and protein expression level increased significantly (P0.05), but ELISA detection results showed that the results showed that the level of NF- kappa B was significantly increased (P0.05). H2 treatment did not clearly reduce the level of inflammatory factors. Furthermore, the results of rabbit behavior score showed no significant difference in the neurological function score of each group. Conclusion: we found that the EBI after SAH was clearly found in rabbits, and the early oxidative stress reaction after SAH and the important role of brain edema after SAH EBI could inhibit the oxidative stress after SAH and In addition, H2 can activate the anti apoptotic pathway of NF- kappa B/Bcl-xL after the first discovery of SAH in the central nervous system, but H2 does not significantly alter the NF- kappa B related inflammatory response after SAH. Therefore, H2 can be reduced by inhibiting oxidative stress after SAH and reducing brain edema. 2 there is potential therapeutic value in EBI therapy after SAH, and it may become an effective therapeutic agent for SAH.

【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743.35

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本文編號：1812484