本文選題：膠質(zhì)瘤細(xì)胞 + 異甘草素��； 參考：《鄭州大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：背景和目的： 神經(jīng)膠質(zhì)瘤簡(jiǎn)稱(chēng)膠質(zhì)瘤，占顱內(nèi)腫瘤的40%~50%，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)且最難治愈的惡性腫瘤之一，具有高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高死亡率的臨床特點(diǎn)，預(yù)后極差。低度惡性膠質(zhì)瘤（WHO I-II級(jí)）的平均存活時(shí)間是3~5年，高度惡性膠質(zhì)瘤（WHO III-IV級(jí)）的平均存活時(shí)間是1~2年，而總體手術(shù)后5年生存率不到10%。目前膠質(zhì)瘤的主要治療方案為手術(shù)以及放、化療治療，化療常用藥物主有亞硝脲類(lèi)烷化劑、長(zhǎng)春新堿、替莫唑胺等�；熕幬镫m有一定療效，但調(diào)查顯示副作用較大，而且易產(chǎn)生耐藥，在膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)后的再次治療中往往失去療效，因此尋找更加高效、低毒的藥物是目前臨床膠質(zhì)瘤治療探索的一個(gè)方向。中藥是我國(guó)醫(yī)學(xué)璀璨的明珠，在千百年來(lái)國(guó)人的健康守護(hù)中發(fā)揮了重要的作用。中藥甘草的根和莖可以入藥，具有補(bǔ)脾益氣、緩急止痛、祛痰止咳、清熱解毒、調(diào)和諸藥等功效，其成分之一異甘草素是一類(lèi)異黃酮類(lèi)化合物，為黃色針狀結(jié)晶。研究表明異甘草素對(duì)一些腫瘤，如前列腺癌、宮頸癌具有一定的抗腫瘤療效，同時(shí)具有一定的預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、降低化療藥物肝腎毒性的藥理作用。本研究探討采用中藥單體異甘草素抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖以及侵襲轉(zhuǎn)移，探討其聯(lián)合化療藥物順鉑抗膠質(zhì)瘤的效果，為異甘草素在膠質(zhì)瘤治療方面的應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。 方法： 1．異甘草素體外對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲的實(shí)驗(yàn)研究：采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)法、Transwell法檢測(cè)不同濃度的異甘草素作用于膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87和C6的效果；同時(shí)采用Western blot方法檢測(cè)異甘草素作用后caspase-3、MMP-2、MMP-9、p21、p27、Akt、p-AKT等信號(hào)分子蛋白表達(dá)水平的變化； 2．異甘草素聯(lián)合順鉑抑制膠質(zhì)瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究：采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)異甘草素聯(lián)合順鉑對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87的增殖、周期以及凋亡的影響；采用western blot方法檢測(cè)caspase-3、bcl-2、bax等關(guān)鍵凋亡分子的變化；采用膠質(zhì)瘤C6的異位移植瘤和原位移植模型來(lái)評(píng)價(jià)兩者聯(lián)合抗腫瘤的作用，并采用免疫組織化學(xué)分析方法檢測(cè)瘤組織中的caspase-3和ki-67的表達(dá)。 結(jié)果： 1．MTT檢測(cè)結(jié)果表明，不同濃度(0、5、10、20、40、80μmol/L)的異甘草素對(duì)U87和C6細(xì)胞的抑制率隨藥物濃度的增加而增加，，異甘草素在24h、48h和72h對(duì)U87細(xì)胞的半數(shù)抑制率IC50分別為115.0、38.8和22.1μmol/L；異甘草素在24h、48h和72h對(duì)C6細(xì)胞的半數(shù)抑制率IC50分別為108.5、37.4和24.3μmol/L。流式細(xì)胞術(shù)分析表明，異甘草素在濃度大于60μmol/L可以導(dǎo)致細(xì)胞明顯的S期和G2/M期阻滯，Annexin V/PI雙染凋亡分析表明異甘草素可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞早、晚期細(xì)胞凋亡和壞死，而且在加入caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK后不影響異甘草素誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死。Transwell結(jié)果分析表明：不同濃度的異甘草素（0μmol/L，20μmol/L，40μmol/L和60μmol/L）作用于膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞后對(duì)U87細(xì)胞侵襲力的抑制比率分別為0，17.2%，33.8%和57.3%。Western blot分析結(jié)果表明：異甘草素以不同濃度（0μmol/L，20μmol/L，40μmol/L和60μmol/L）作用膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞后可下調(diào)MMP-2/9、p-Akt的表達(dá)水平，同時(shí)上調(diào)p21、p27以及caspase-3等蛋白的表達(dá)水平。 2．MTT檢測(cè)結(jié)果表明，異甘草素可以增強(qiáng)順鉑的抗膠質(zhì)瘤效果，在順鉑濃度為6.25μmol/L和12.5μmol/L、異甘草素濃度為20μmol/L時(shí)二者有較好的聯(lián)合指數(shù)。流式細(xì)胞術(shù)表明順鉑（6.25μmol/L）和異甘草素（20μmol/L）聯(lián)合后可以明顯增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞S期的周期阻滯，并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的明顯增加，細(xì)胞早期凋亡比率從單獨(dú)時(shí)的4.32±1.07%和2.25±0.44%增高到聯(lián)合時(shí)的13.2±1.52%。Western blot分析表明，異甘草素和順鉑聯(lián)合可以上調(diào)caspase-3和bax的表達(dá)水平，同時(shí)下調(diào)bcl-2表達(dá)水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明：異甘草素可以增強(qiáng)順鉑的抗腫瘤療效，異甘草素在500μg/kg條件下對(duì)膠質(zhì)瘤的抑制率為31.0%，順鉑在1mg/kg條件下的抑制率為48.6%，兩者聯(lián)合后，對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制率增加到66.9%。在膠質(zhì)瘤原位移植模型中，異甘草素聯(lián)合順鉑能夠明顯延長(zhǎng)大鼠的生存期（與對(duì)照組相比，P0.05）。免疫組織化學(xué)分析表明，異甘草素聯(lián)合順鉑可以促進(jìn)Caspase-3的表達(dá)（與對(duì)照組相比，P0.01），同時(shí)下調(diào)ki-67抗原的表達(dá)（與對(duì)照組相比，P0.01）。 結(jié)論： 1．異甘草素在10~80μmol/L濃度時(shí)對(duì)膠質(zhì)瘤U87和C6細(xì)胞具有濃度相關(guān)性的生長(zhǎng)抑制作用；能夠誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞G2/M期以及S期的阻滯和細(xì)胞凋亡、通過(guò)下調(diào)MMP-2/9、Akt磷酸化水平等因素來(lái)發(fā)揮增殖抑制作用； 2．在不增加系統(tǒng)毒性的情況下，異甘草素可以增強(qiáng)順鉑的抗腫瘤作用，這可能與影響caspase-3、bcl-2、bax以及Ki-67等蛋白表達(dá)的水平有關(guān)。
[Abstract]:Background and Purpose :

The results show that isoliquiritin is one of the most common and most difficult malignant tumors in the central nervous system . The average survival time of malignant glioma ( WHO grade I - II ) is 1 - 2 years , and the 5 - year survival rate is less than 10 % .

Method :

1 . The effects of isoliquiritin on proliferation , apoptosis and invasion of glioma cells were studied by MTT , flow cytometry and Transwell method .
Western blot was used to detect the changes of the expression of caspase - 3 , MMP - 2 , MMP - 9 , p21 , p27 , and the level of protein expression .


2 . The effects of isoliquiritin and cisplatin on glioma cell proliferation , cycle and apoptosis were studied by MTT and flow cytometry .
Western blot was used to detect the changes of caspase - 3 , bcl - 2 , bax and other key apoptotic molecules .
The combined anti - tumor effects of both of them were evaluated by ectopic transplantation tumor and in situ transplantation model of C6 glioma , and the expression of caspase - 3 and ki - 67 in tumor tissues was detected by immunohistochemical method .

Results :

1 . MTT assay showed that the inhibitory rate of isoliquiritin on U87 and C6 cells increased with the increase of drug concentration . The IC50 of isoliquiritin on U87 and C6 cells was 115.0 , 38.8 and 22.1 渭mol / L for U87 cells at 24 h , 48 h and 72 h , respectively .
The inhibitory rates of isoliquiritin at 24 h , 48 h and 72 h on C6 cells were 108.5 , 37.4 and 24.3渭mol / L , respectively .

2 . MTT assay showed that isoliquiritin can enhance the anti - glioma effect of cisplatin . The inhibition rate of cisplatin ( 6.25 渭mol / L ) and isoliquiritin ( 20 渭mol / L ) can be increased to 13.2 鹵 1.52 % when cisplatin concentration is 6.25 渭mol / L and 12.25 鹵 0 . 44 % . Immunohistochemical analysis showed that isoliquiritin combined with cisplatin could promote the expression of Caspase - 3 ( P0.01 ) , while downregulating the expression of Ki - 67 antigen ( P0.01 ) .

Conclusion :

1 . The inhibitory effect of isoliquiritin on the concentration of U87 and C6 glioma cells was observed at the concentration of 10 ~ 80 渭mol / L .
can induce G2 / M phase of glioma cells and block and cell apoptosis in S phase , and can inhibit the proliferation inhibiting effect by down - regulating factors such as MMP - 2 / 9 and phosphorylation level ;


2 . In the absence of systemic toxicity , isoliquiritin can enhance the anti - tumor effect of cisplatin , which may be related to the level of expression of caspase - 3 , bcl - 2 , bax and Ki - 67 .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1812362