發(fā)布時間：2018-04-23 03:26

  本文選題：透明質(zhì)酸酶 + 生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血�。� 參考：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(Germinal matrix intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是新生兒期最常見的顱內(nèi)出血類型,同時也是造成早產(chǎn)兒腦白質(zhì)受損的重要原因。隨著醫(yī)學進步,超早產(chǎn)兒的成活率逐步增長,GM-IVH患兒數(shù)量也趨之升高。嚴重的GM-IVH患兒會遺留如腦癱、學習困難,認知功能障礙等神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,即便是輕度顱內(nèi)出血,也可對患兒預后造成一定影響,且目前仍無有效治療手段。近年來隨著對GM-IVH繼發(fā)性損傷研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)GM-IVH后的繼發(fā)炎癥反應可對腦組織造成不可逆性損傷。透明質(zhì)酸是細胞外基質(zhì)的主要成分,同時也是一種炎性介質(zhì),與受體CD44結(jié)合后會介導炎癥反應的進行,在許多炎癥性疾病中可見透明質(zhì)酸的積累。透明質(zhì)酸酶是透明質(zhì)酸的特異性水解酶,有研究證明使用透明質(zhì)酸酶能夠治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病。那么,通過應用透明質(zhì)酸酶是否能夠減輕GM-IVH后的繼發(fā)炎性損傷,關(guān)于這方面的研究國內(nèi)外少有報道。本實驗通過應用早產(chǎn)兔GM-IVH動物模型,旨在研究:1.GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織中透明質(zhì)酸受體CD44及腫瘤壞死因子(TNF-a)的表達情況;2.透明質(zhì)酸酶干預后GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織中透明質(zhì)酸受體CD44及TNF-a的表達情況;方法:1選取42只孕29天新西蘭大白兔所生早產(chǎn)乳兔(正常孕足月乳兔為32天),生后迅速保暖,并進行奶粉飼養(yǎng)。隨機分為正常組、模型組(單純GM-IVH模型)和治療組(GM-IVH模型+透明質(zhì)酸酶),每組各14只。參照腹腔注射丙三醇誘發(fā)GM-IVH的步驟,制備早產(chǎn)兔GM-IVH動物模型。具體步驟為:對模型組和治療組早產(chǎn)兔在出生后3小時內(nèi)進行50%丙三醇(10ml/Kg)腹腔注射,制作GM-IVH動物模型,正常組不進行任何處理。在生后1天內(nèi)對三組早產(chǎn)兔進行顱腦超聲檢查,觀察治療組和模型組早產(chǎn)兔是否伴有顱內(nèi)出血。對治療組早產(chǎn)兔在生后第2天、第4天、第6天給予側(cè)腦室注射透明質(zhì)酸酶(1U/μL),劑量為20μL/kg,對照組在相同時間點給予側(cè)腦室注射生理鹽水,劑量為20μL/kg,正常組不予任何處理,精心飼養(yǎng)各組早產(chǎn)兔。2將每組早產(chǎn)兔隨機分為第3天、第7天兩個亞組,每組7只,在第3天、第7天對各組早產(chǎn)兔進行麻醉處死,迅速剝離腦組織,觀察標本形態(tài)后在冰上快速提取腦室周圍腦組織并對標本進行編號,將一部分標本放入-80℃冰箱中保存,供蛋白印跡實驗使用。其余標本置于4%多聚甲醛中固定,進行免疫組化染色和蘇木精-伊紅染色。3應用免疫組化法觀察三組標本中腫瘤壞死因子、CD44的表達是否存在差異。采取蛋白印跡實驗對比三組標本中腫瘤壞死因子、CD44的表達情況。4統(tǒng)計方法:使用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件及Microsoft Excel 2003軟件進行統(tǒng)計學分析,計量資料若符合正態(tài)分布,則用均數(shù)±標準差(x±SD)描述,比較前先進行方差齊性檢驗,若方差齊,兩個樣本均數(shù)比較使用獨立樣本t檢驗(Independent Samples Test),多樣本均數(shù)比較采用LSD檢驗,若不滿足方差齊性檢驗則采用秩和檢驗(rank-sum test)的方法。檢驗水準設(shè)為0.05,P小于0.05提示差異有統(tǒng)計意義。結(jié)果:1成功復制GM-IVH動物模型對懷孕29天的孕兔進行剖腹產(chǎn),獲得29天早產(chǎn)兔,在生后三小時內(nèi)給予丙三醇腹腔注射,誘發(fā)顱內(nèi)出血。通過對各組早產(chǎn)兔完善顱腦超聲檢查、觀察早產(chǎn)兔大體標本形態(tài)及進行顯微鏡觀察等途徑證明成功復制了GM-IVH早產(chǎn)兔動物模型。2早產(chǎn)兔腦組織中CD44的表達模型組GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織標本中CD44的表達在生后第3天最高,第7天降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。治療組和正常組早產(chǎn)兔腦組織中CD44的表達在生后第7天高于第3天,差異達統(tǒng)計學意義(P0.05)。在同時間段比較(3天、7天),模型組兔腦組織標本中CD44表達最高,正常組最低,治療組位于兩者之間,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3早產(chǎn)兔腦組織中TNF-a的表達模型組和治療組GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織標本中TNF-a的表達在生后第3天高于生后第7天,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。正常組早產(chǎn)兔腦組織標本在生后第3天和第7天比較,TNF-a的表達無差異(P0.05)。在相同時間段里(3天、7天),TNF-a在模型組腦組織標本中表達最高,其次為治療組,正常組表達最低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:早產(chǎn)兔發(fā)生GM-IVH后腦組織中TNF-a含量升高,提示GM-IVH存在繼發(fā)性炎癥反應,提示隨時間進展,炎癥反應由強逐漸減弱。此外,早產(chǎn)兔GM-IVH后同樣存在透明質(zhì)酸受體CD44的高表達,隨時間進展CD44表達逐漸降低,提示GM-IVH后腦組織中存在透明質(zhì)酸的積累,透明質(zhì)酸可與其受體CD44結(jié)合后共同參與GM-IVH后的繼發(fā)炎癥反應。當對GM-IVH早產(chǎn)兔給予側(cè)腦室注射透明質(zhì)酸酶后,發(fā)現(xiàn)TNF-a和CD44在相同時間段里(3天、7天)治療組中表達低于模型組,提示透明質(zhì)酸酶可以通過水解透明質(zhì)酸來抑制CD44的表達活性,繼而減輕GM-IVH后的繼發(fā)炎癥反應。
[Abstract]:Objective : To study the expression of hyaluronic acid receptor CD44 and tumor necrosis factor ( TNF - a ) in brain tissue of premature infants . The results showed that the expression of CD44 in the brain tissue of premature rabbit was higher than that in the third day after birth , and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . It was suggested that the expression of hyaluronic acid in the brain tissue was lower after GM - IVH . The expression of hyaluronic acid in the brain tissue was lower than that in the model group after GM - IVH was injected into the lateral ventricle .

【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743.34

【參考文獻】

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本文編號：1790253