本文選題：ARPP-19 + 增殖�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分:ARPP-19在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和意義目的神經(jīng)膠質(zhì)瘤是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)腫瘤,其中高級(jí)別膠質(zhì)瘤惡性程度高,預(yù)后很差,5年生存率不到10%。至今為止,神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展和生長(zhǎng)的具體分子機(jī)制尚不清楚。ARPP-19是c AMP調(diào)節(jié)的磷蛋白19(c AMP-regulated phosphoprotein 19)的簡(jiǎn)稱。它是alpha-endosulfine(ENSA阿爾法-內(nèi)磺肽)家族體系中重要的成員之一,是所有哺乳動(dòng)物腦部分布比較廣泛的一個(gè)蛋白,作為蛋白激酶A的底物發(fā)揮生理作用。ARPP-19在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要信號(hào)調(diào)節(jié)的作用。研究表明,ARPP-19的異常表達(dá)會(huì)導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生,如導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的產(chǎn)生、誘發(fā)阿爾茲海默癥。近些年,人們逐步認(rèn)識(shí)ARPP-19的生理功能,發(fā)現(xiàn)它對(duì)多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用。盡管最近的研究證明了ARPP-19在細(xì)胞有絲分裂以及腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著一定作用,但是有關(guān)ARPP-19具體到在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的作用及其異常表達(dá)的臨床意義至今尚無報(bào)道。特異性周期蛋白D1(cyclin D1)可以促進(jìn)細(xì)胞增殖,如過度表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控。c-myc基因定位與8q24,是myc基因家族一員。c-myc與正調(diào)節(jié)的生長(zhǎng)因子協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞增殖,而與具有負(fù)調(diào)控的生長(zhǎng)抑制基因結(jié)合后可加速細(xì)胞凋亡。cyclin D1和c-myc均與細(xì)胞生長(zhǎng)周期相關(guān),故我們選擇兩者以了解ARPP-19如何調(diào)節(jié)cyclin D1和c-myc基因的表達(dá),來推測(cè)ARPP-19在腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移過程中的作用。為此,本研究旨在明確ARPP-19在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其臨床意義;為了探索ARPP-19在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中發(fā)揮作用的機(jī)制。方法選擇人的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172用來做體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究。將合成ARPP-19的si RNA轉(zhuǎn)染A172人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR定量檢測(cè)轉(zhuǎn)染ARPP-19的si RNA以后的ARPP-19 m RNA水平的的表達(dá);通過細(xì)胞軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染ARPP-19 si RNA的A172細(xì)胞的增殖、非錨定依賴生長(zhǎng)和腫瘤細(xì)胞的惡性行為,通過Transwell小室和細(xì)胞劃痕創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染了ARPP-19的si RNA的A172細(xì)胞遷移及侵襲能力,應(yīng)用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染了ARPP-19的si RNA的A172細(xì)胞和對(duì)照組NC的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中Cyclin D1和c-myc蛋白表達(dá)的變化,同時(shí)選擇β-ACTIN作為內(nèi)部參照基因作蛋白上樣量平衡。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)安醫(yī)大二附院2009-2015年間81例神經(jīng)膠質(zhì)瘤石蠟標(biāo)本的ARPP-19蛋白的表達(dá)水平,通過門診或電話隨訪患者并收集無病生存和總生存的相關(guān)數(shù)據(jù),使用皮爾森卡方檢驗(yàn)和卡普蘭-邁耶曲線(Kaplan-Meier curves)分析ARPP-19與患者的無病生存率(RFS)和總生存率(OS)之間的相關(guān)性。結(jié)果在轉(zhuǎn)染了ARPP-19的si RNA后A172細(xì)胞中,ARPP-19的m RNA表達(dá)明顯下降。ARPP-19被si RNA敲低以后五天之內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示A172細(xì)胞的生長(zhǎng)數(shù)目明顯降低,軟瓊脂克隆形成率明顯降低,轉(zhuǎn)移能力和侵襲能力也有了很大程度的降低劃痕創(chuàng)傷愈合能力也被大大削弱。關(guān)于下游機(jī)制,Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示當(dāng)A172細(xì)胞的ARPP-19的表達(dá)水平被敲低以后,cyclin D1和c-myc的表達(dá)水平也相應(yīng)降低。81例膠質(zhì)瘤患者中,高級(jí)別膠質(zhì)瘤43例,低級(jí)別38例。臨床病理資料顯示ARPP-19的表達(dá)水平與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的腫瘤高分級(jí)具有顯著相關(guān)性,而與年齡、性別、KPS評(píng)分的相關(guān)性不顯著。ARPP-19在高級(jí)別神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平明顯高于低級(jí)別神經(jīng)膠質(zhì)瘤(ARPP-19 P=0.001),ARPP-19高表達(dá)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的無病生存率(RFS)以及整體生存率(OS)明顯低于ARPP-19低表達(dá)患者(RPF P=0.002;OS P=0.001)。結(jié)論ARPP-19能夠促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的增殖和轉(zhuǎn)移,可能是是通過正向調(diào)節(jié)cyclin D1和c-myc的表達(dá)而發(fā)揮作用。ARPP-19的蛋白表達(dá)水平與神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后具有顯著正相關(guān)性,即高表達(dá)患者預(yù)后差,低表達(dá)患者預(yù)后好。提示ARPP-19可能作為神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者疾病進(jìn)展和生存預(yù)測(cè)的生物指標(biāo)。第二部分:LC3B,p62在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和意義目的細(xì)胞自噬autophagy是真核生物中進(jìn)化保守的、依賴溶酶體途徑的、對(duì)胞質(zhì)蛋白和細(xì)胞器進(jìn)行降解、對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過程。自噬是維持細(xì)胞穩(wěn)定性和代謝平衡的一個(gè)基本生理代謝機(jī)制;同時(shí),細(xì)胞自噬在促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及抗腫瘤治療耐受方面也發(fā)揮著重要作用。近年來在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)自噬的增強(qiáng)或減弱:一方面,細(xì)胞自噬可能抑制腫瘤的發(fā)生,自噬水平的下降也導(dǎo)致腫瘤的惡化和進(jìn)展,因此惡性腫瘤則表現(xiàn)為自噬降低。另一方面,自噬使腫瘤細(xì)胞迅速降解過多錯(cuò)誤表達(dá)的蛋白質(zhì)以適應(yīng)惡性生長(zhǎng)的需要、或者免受饑餓、化療、放療所導(dǎo)致的損傷而持續(xù)生存。導(dǎo)致自噬促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)惡性環(huán)境的適應(yīng),表現(xiàn)為自噬增高。文獻(xiàn)顯示,細(xì)胞自噬一般參與了神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性發(fā)展過程。文獻(xiàn)報(bào)道,在細(xì)胞自噬生理過程中自噬小體的形成是關(guān)鍵的步驟,而微管蛋白1輕鏈3(microtubleassociated protein 1 light chain3,MAP1LC3,簡(jiǎn)稱LC3)是編碼自噬相關(guān)蛋白的重要基因,其編碼形成自噬小體膜的重要蛋白,因此,在細(xì)胞自噬的研究過程中,人們常將LC3蛋白作為一個(gè)標(biāo)志物來衡量細(xì)胞自噬的程度、頻度等。但LC3蛋白在其中發(fā)揮的具體作用我們還知之甚少,即LC3參與了增強(qiáng)自噬的過程還是降低自噬的過程。LC3蛋白包含三個(gè)亞基(LC3A,LC3B,LC3C),一般通過檢測(cè)LC3B亞基來衡量整個(gè)LC3表達(dá)水平。同時(shí)根據(jù)LC3B的表達(dá)水平觀察其形成的自噬小體在膠質(zhì)瘤中的作用。在細(xì)胞自噬中還有一種蛋白發(fā)揮著關(guān)鍵作用,它就是p62。Sequestosome 1(p62/SQSTM1)是一種由應(yīng)激誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)蛋白并作用于選擇性自噬。p62包含多種蛋白作用域,可作為將要被自噬作用降解的小泡的受體,也可作為要被清除的泛素化蛋白聚集物的受體。p62蛋白可結(jié)合泛素,也可與LC3結(jié)合,從而靶向自噬體并促進(jìn)泛素化蛋白的清除。p62作為細(xì)胞自噬生理過程中一些酶作用過程中不可或缺的底物,在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮重要作用�，F(xiàn)有文獻(xiàn)已知P62在惡性腫瘤中的高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、惡性行為及病人預(yù)后差高度相關(guān)。本研究擬檢測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)瘤標(biāo)本LC3B和p62蛋白表達(dá)水平,并分析它們與各臨床病理參數(shù)以及病人的生存率之間的相關(guān)性。了解LC3B在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特點(diǎn);同時(shí)了解作為參與自噬過程中自噬小體組建的LC3B和參與自噬降解過程中的底物的p62在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的相關(guān)性。方法收集安醫(yī)大二附院2009-2015年間81例經(jīng)膠質(zhì)瘤的石蠟固標(biāo)本,利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)LC3B,p62蛋白的表達(dá)水平;通過電話隨訪和門診隨訪的方式統(tǒng)計(jì)上述病人的無病生存和總生存情況。使用皮爾森卡方檢驗(yàn),卡普蘭-邁耶曲線(Kaplan-Meier curves)分析它們與各臨床病理參數(shù)以及與病人的無病生存率(RFS)和總生存率(OS)之間的相關(guān)性。結(jié)果81例膠質(zhì)瘤患者中,高級(jí)別膠質(zhì)瘤43例,低級(jí)別38例。LC3B和p62的表達(dá)水平與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的腫瘤高分級(jí)具有顯著相關(guān)性,而與年齡、性別、KPS評(píng)分的相關(guān)性不顯著。相對(duì)于低級(jí)別膠質(zhì)瘤,LC3B和p62在高級(jí)別的神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中為高表達(dá)(LC3B P=0.015,p62 P=0.002)。LC3B蛋白表達(dá)水平較高的病人,與LC3B蛋白表達(dá)水平較低的病人相比表現(xiàn)出更低的3年無病生存率(RFS)(P=0.044)和3年整體生存率(OS)(P=0.022)。LC3B與p62蛋白二者之間皮爾森相關(guān)性系數(shù)是0.274。結(jié)論在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中,LC3B參與的細(xì)胞自噬促進(jìn)了腫瘤的惡性發(fā)展過程。同時(shí)LC3B和p62在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平和患者預(yù)后具有正相關(guān)性,提示LC3B和p62可能在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中協(xié)同發(fā)揮作用,共同促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的腫瘤發(fā)生、發(fā)展和惡性進(jìn)程。
[Abstract]:ARPP - 19 is one of the most common primary tumors in human central nervous system . The expression level of ARPP - 19 in high - grade glioma was significantly higher than that of low - grade glioma ( ARPP - 19 P = 0.001 ) , ARPP - 19 expression level was significantly lower than that of low - grade glioma ( ARPP - 19 P = 0.001 ) , ARPP - 19 expression level was significantly lower than that of ARPP - 19 low - expression patients ( P = 0.002 ; OS P = 0.001 ) . Conclusions ARPP - 19 plays an important role in promoting the growth and metastasis of glioma . The expression level of ARPP - 19 plays an important role in the development and prognosis of glioma . The correlation between the expression of LC3B and p62 protein in glioma specimens and the correlation between the expression of LC3B and p62 protein in glioma were investigated . The correlation coefficient between LC3B and p62 protein was 0.274 . Conclusion The correlation coefficient between LC3B and p62 protein in glioma is 0.274 . Conclusion The expression level of LC3B and p62 in glioma has positive correlation with the prognosis of patients , suggesting that LC3B and p62 may play a role in glioma and promote the oncogenesis , development and malignant progression of glioma .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1772127