發(fā)布時(shí)間：2018-04-14 17:07

  本文選題：M1型小膠質(zhì)細(xì)胞 + M2型小膠質(zhì)細(xì)胞��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：缺血性腦卒中(Ischemic Stroke)是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,占腦血管疾病的70%,致死、殘率高,嚴(yán)重威脅著人類的健康,給家庭和社會帶來巨大的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。近年來針對缺血性腦卒中的研究已成為神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn),但其病理機(jī)制及干預(yù)靶點(diǎn)仍不清楚,臨床上缺乏有效治療手段。米諾環(huán)素(Minocycline)是半合成第二代四環(huán)素類衍生物,具有抗炎、殺菌功效,作為抗生素已廣泛使用于臨床。米諾環(huán)素易透過血腦屏障的特性備受神經(jīng)科學(xué)研究者青睞。近年大量研究證實(shí)米諾環(huán)素在腦出血、腦外傷等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中具有神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。Tang等發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素可通過內(nèi)源性大麻素受體激活,調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞從M1型(細(xì)胞毒)向M2型(神經(jīng)保護(hù))轉(zhuǎn)換,改善新生兒腦出血后神經(jīng)功能障礙。項(xiàng)目組前期研究發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素能顯著抑制新生兒腦出血后小膠質(zhì)細(xì)胞增殖、炎癥因子釋放的腦繼發(fā)損傷因素;Yrjanheikki等通過動物實(shí)驗(yàn)及離體細(xì)胞培養(yǎng)首次證實(shí)米諾環(huán)素可減少M(fèi)CAO誘導(dǎo)的大鼠神經(jīng)元凋亡,但米諾環(huán)素的治療靶點(diǎn)及相關(guān)分子機(jī)制仍不清楚。研究證實(shí)激活后的M1型小膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)炎癥的主要參與者,分泌腫瘤壞死因子(TNF-α),白介素-6(IL-6)等多種神經(jīng)炎癥因子,促進(jìn)周圍神經(jīng)細(xì)胞凋亡,加重腦損傷;M2型小膠質(zhì)細(xì)胞可分泌腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),胰島素樣生長因子(insulin-like growth factors-1,IGF)等神經(jīng)保護(hù)因子,促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B(Nuclea Factor-Kappa B,NF-κB)是多種炎癥介質(zhì)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白,其中發(fā)揮主要生理功能的是兩個亞基蛋白P50與P65,兩者構(gòu)成二聚體。NF-κB抑制蛋白(Inhibitor Of NF-κB,IκB)的磷酸化降解是NF-κB激活的主要途徑。近期研究證實(shí)NF-κB可調(diào)控NLRP炎癥小體激活,而且在缺血性腦卒中(Ischemic stroke)后繼發(fā)腦損傷的過程中參與并發(fā)揮作用,是細(xì)胞凋亡的主要調(diào)控途徑之一。本研究擬通過MCAO模型觀察大鼠缺血后早期腦梗塞面積、神經(jīng)元凋亡、小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化以及學(xué)習(xí)記憶功能改變,從以下兩個部分探討米諾環(huán)素在大鼠缺血性腦卒中早期腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。一、缺血性腦卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞表型變化及特征目的動態(tài)觀察MCAO后M1型小膠質(zhì)細(xì)胞和M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量變化,探討小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)換在缺血性腦卒中后的作用及意義。方法通過線栓法制備大鼠缺血性腦損傷(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分成對照組和MCAO 6小時(shí)、24小時(shí)組以及72小時(shí)組,通過Western blot實(shí)驗(yàn)檢測小膠質(zhì)細(xì)胞特異性抗體(Iba-1)表達(dá)情況,使用Q-pcr技術(shù)檢測M1型小膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白CD16、CD11以及M2型小膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白CD86、CD206表達(dá)情況。結(jié)果在不同時(shí)間段斷頭取腦,使用大鼠缺血半球腦組織實(shí)施WB免疫印跡實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)MCAO后6小時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白(Iba-1)含量顯著增加,并在24小時(shí)后程上升趨勢,在MCAO72小時(shí)后Iba-1蛋白含量逐漸降低,可能與M2型小膠質(zhì)細(xì)胞逐漸增多相適應(yīng)。CD86與CD206相似是M2小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白之一,CD11b與CD16是M1型小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白,其編碼基因的改變也可間接說明大鼠腦缺血后保護(hù)性M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在缺血早期M1型小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白增加,在72小時(shí)時(shí)相對減少,而M2型小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)情況正相反,證實(shí)大鼠MCAO后小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)可能發(fā)生轉(zhuǎn)換,假設(shè)該現(xiàn)象與自身修復(fù)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān),M2型小膠質(zhì)細(xì)胞增加是機(jī)體修復(fù)的信號。結(jié)論該研究通過動物在體實(shí)驗(yàn)證實(shí)大鼠缺血性腦卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)在72小時(shí)內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)換的可能,提出小膠質(zhì)細(xì)胞從損傷早期M1形態(tài)向后期M2型轉(zhuǎn)換可能是機(jī)體自身修復(fù)機(jī)制啟動的原因。因此,在MCAO后外源性干預(yù)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)換可能是缺血性腦卒中臨床治療的新策略。二、米諾環(huán)素調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞表型對大鼠缺血性腦卒中的保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究目的通過實(shí)驗(yàn)觀察大鼠早期缺血性腦損傷的病理生理特點(diǎn),探討米諾環(huán)素在缺血性腦損傷早期的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)及可能機(jī)制。方法線栓法制備大鼠缺血性腦損傷(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,在MCAO 6、24 h分別給予米諾環(huán)素腹腔注射,通過TTC染色觀察腦梗死面積、TUNEL染色及尼氏染色檢測神經(jīng)元凋亡情況;免疫熒光染色了解小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化以及Western blot檢測凋亡通路NF-κB表達(dá)情況。使用Morris水迷宮檢測手術(shù)28 d后大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果米諾環(huán)素減少M(fèi)CAO 6 h后大鼠腦梗塞面積[(43.0±5.3)cm3vs(36.0±6.8)cm3,P0.01],減少腦神經(jīng)元凋亡數(shù)量并促進(jìn)M2型(神經(jīng)保護(hù)型)小膠質(zhì)細(xì)胞增殖,MCAO24 h后米諾環(huán)素治療不能改善腦梗塞以及神經(jīng)元細(xì)胞凋亡(P0.05)。米諾環(huán)素顯著減少M(fèi)CAO 6 h誘導(dǎo)的凋亡信號通路蛋白NF-κB的表達(dá)(P0.01)。MCAO 28 d后大鼠學(xué)習(xí)記憶能力較假手術(shù)組顯著降低;米諾環(huán)素顯著改善MCAO后學(xué)習(xí)記憶能力(P0.05),而MCAO 24 h后米諾環(huán)素不能改善大鼠神經(jīng)功能障礙,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論米諾環(huán)素能促進(jìn)缺血性腦卒中早期活化小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化并抑制凋亡信號通路,減輕腦缺血誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥及細(xì)胞凋亡,改善大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王擁軍;王春雪;繆中榮;;中國缺血性腦卒中和短暫性腦缺血發(fā)作二級預(yù)防指南2014[J];中華神經(jīng)科雜志;2015年04期

2 張淵;張建波;唐俊;楊云峰;陳志;朱剛;;900MHz電磁輻照對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和血腦屏障通透性的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

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本文編號：1750240