本文選題：嗅鞘細(xì)胞 + 熱預(yù)處理��； 參考：《湖南師范大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：近年來大量研究證實(shí)嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells, OECs)與神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSCs)聯(lián)合移植治療中樞神經(jīng)損傷具有顯著療效。但細(xì)胞移植后,NSCs向神經(jīng)元分化效率低是制約細(xì)胞移植療效的因素之一。本實(shí)驗(yàn)擬在體外運(yùn)用熱預(yù)處理的方法提高OECs條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元分化比例,并探討對(duì)OECs熱預(yù)處理促進(jìn)NSCs向神經(jīng)元分化的機(jī)制。 方法：新生3d昆明小鼠,提取嗅球,分離、培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞并鑒定,再將純化的OECs分為3組。370EC組：無血清條件培養(yǎng)基下OECs置于37℃培養(yǎng)48h；400EC組：無血清條件培養(yǎng)基下OECs置于40℃培養(yǎng)箱預(yù)處理6h,再置于37℃培養(yǎng)42h；400EC+R組：在OECs無血清條件培養(yǎng)基里加入20μg低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1a)抑制劑(YC-1),于40℃培養(yǎng)箱預(yù)處理6h,再置于37℃培養(yǎng)42h。MTT法檢測預(yù)處理后OECs細(xì)胞活力。收集各組OEC上清液(OCM),標(biāo)記為370CM,400CM,400CM+R。取P3代小鼠神經(jīng)干細(xì)胞系C17.2細(xì)胞,培養(yǎng)至80%細(xì)胞融合,清除含血清培養(yǎng)基后分別加入三組OEC上清液,通過免疫熒光計(jì)數(shù)、Western-blot方法檢測C17.2NSCs向神經(jīng)元分化比例情況,并用RT-PCR、Western-blot和ELISA方法分別檢測OECs及OCM中HIF-1a及其靶基因EPO、VEGF表達(dá)。 結(jié)果：MTT細(xì)胞活力檢測示3組OECs的細(xì)胞活力無顯著差異。NSCs在加入370CM組、400CM組和400CM+R組上清液誘導(dǎo)后,通過免疫熒光計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn),400CM組中分化細(xì)胞神經(jīng)元標(biāo)志物β微管蛋白(β-tublinⅢ, Tuj-1)、微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associated protein2, MAP-2)陽性細(xì)胞數(shù)目(31.40±1.08%、31.80±1.60%)顯著高于370CM組(23.60±1.36%、22.80±1.66%)和400CM+R組(22.60±1.50%、24.00±2.30%),370CM與400CM+R兩組之間Tuj-1、MAP-2陽性細(xì)胞數(shù)目無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western-blot也證實(shí),在400CM誘導(dǎo)組中,Tuj-1蛋白表達(dá)顯著高于370CM組和400CM+R組,而370CM和400CM+R兩組之間Tuj-1、MAP-2蛋白表達(dá)無顯著差異。RT-PCR結(jié)果示400EC組HIF-1a及其下游靶基因EPO、VEGF轉(zhuǎn)錄水平較370EC.400EC+R組明顯增高；Western blot結(jié)果提示400EC組HIF-1a蛋白表達(dá)含量顯著高于370EC、400EC+R組；Elisa檢測發(fā)現(xiàn)400CM組中EPO、VEGF含量顯著高于370CM、400CM+R組。 結(jié)論：OECs經(jīng)熱預(yù)處理后,其上清液能更有效的誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元定向分化,提高其分化比例。熱預(yù)處理后HIF-1a表達(dá)上調(diào)是促進(jìn)NSCs向神經(jīng)元定向分化的重要因素,HIF-1a下游靶基因EPO、VEGF激活和表達(dá)可能是提高NSCs向神經(jīng)元分化比例的機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1732711