本文選題：高血糖　切入點：腦缺血再灌注　出處：《寧夏醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的研究高血糖SD大鼠局灶性腦缺血再灌注后P38MAPKα和β在腦組織中的磷酸化狀態(tài)，以及在各細胞中的表達和時空規(guī)律，，以此探討P38MAPK在高血糖加重腦缺血損傷中的作用。 方法通過腹腔注射STZ制備1型糖尿病模型，線栓法制備大腦中動脈局灶性腦缺血30min/再灌注模型。然后通過HE染色，對比觀察糖尿病高血糖局灶腦缺血/再灌注組(高血糖組)和正常血糖局灶腦缺血/再灌注組(正常血糖組)腦組織的病理學變化，神經(jīng)癥狀評分了解局灶腦缺血/再灌注后大鼠神經(jīng)功能缺損情況，采用免疫組化法、免疫熒光染色法和Western Blotting法檢測磷酸化P38MAPKα和β(p-p38α，p-p38β)的表達。 結果(1)大鼠局灶腦缺血/再灌注術后，大鼠腦缺血后均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損，高血糖缺血再灌注組的腦功能評分明顯較正常血糖手術組升高(P 0.05).(2)光鏡下見正常血糖手術組在缺血30min分鐘再灌注1d時可見明顯腦水腫改變，神經(jīng)元腫脹、固縮和溶解甚至死亡。再灌注3d時缺血中心區(qū)明顯神經(jīng)元、星形膠質細胞溶解壞死，出現(xiàn)空泡結構，再灌注7d時可見腦水腫減輕，神經(jīng)元減少，部分神經(jīng)元核淡染，在固縮及腫脹的神經(jīng)元周圍可見膠質細胞的圍繞，體積較小的神經(jīng)膠質細胞增多，缺血半暗帶消失，梗死區(qū)周邊膠質細胞增多。再灌注14d時梗死區(qū)范圍縮小，沒有明顯的腦水腫，膠質細胞明顯增多，聚集成群，形成膠質細胞結節(jié).高血糖手術組在缺血30min再灌注1d和3d是較正常血糖手術組腦水腫加重，梗死范圍擴大，神經(jīng)元的腫脹、固縮和溶解增加，死亡神經(jīng)元明顯多于正常血糖組，圍繞死亡神經(jīng)元的星形膠質細胞也明顯增加。再灌注7d后缺血中心區(qū)膠質細胞數(shù)量較正常血糖組增加。(3)磷酸化P38MAPK α的免疫組化及Western Blot結果:假手術組及缺血組對側腦組織僅見p-P38MAPK α的少量表達，缺血組p-P38MAPK α陽性表達均顯著高于假手術組及缺血組對側(P 0.05)。在缺血中心區(qū)及周邊區(qū)，p-P38MAPK α正常血糖組再灌注3d時開始增加，再灌注14d時p-P38MAPK α陽性表達明顯增高，達到高峰，至再灌注28d時p-P38MAPK α陽性表達下降。高血糖組p-P38MAPK α在各亞組間陽性表達趨勢同正常血糖各亞組間，同時間點高血糖組p-P38MAPK α陽性表達高于正常血糖組(P0.05)。(4)磷酸化P38MAPKβ免疫組化及Western Blot結果：假手術組及缺血組對側腦組織僅見p-P38MAPK β的少量表達，缺血組p-P38MAPK β陽性表達均顯著高于假手術組及缺血組對側(P 0.05)。在缺血中心區(qū)及周邊區(qū)，缺血組再灌注1d，3d，7d，14d，28d各亞組間p-P38MAPKβ陽性表達無明顯差異，同時間點高血糖組p-P38MAPK α陽性表達高于正常血糖組（P0.05）。（5）免疫熒光雙標記檢測磷酸化p38α和β的結果：早期p-p38α與神經(jīng)元共表達，后期則與小膠質細胞共表達；p-p38β與神經(jīng)元共表達。 結論（1）在大鼠糖尿病局灶型腦缺血再灌注模型中，高血糖可加重缺血再灌注腦組織損傷，增加腦水腫和腦梗死的面積，加重缺血再灌注引起的神經(jīng)元變性和凋亡，從而加重大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀和體征。（2）在大鼠局灶型腦缺血再灌注模型中，P38MAPKα和β均被激活參與損傷，而高血糖可加重P38MAPKα和β激活程度，從而加重腦缺血再灌注損傷；（3）P38MAPKα和β均可通過加重神經(jīng)元損害從而加重腦缺血再灌注的損傷；（4）p38MAPK信號通路通過可發(fā)生不同程度的磷酸化和激活狀態(tài)，并通過調節(jié)其上下游因子，參與介導高血糖加重腦缺血再灌注損傷。
[Abstract]:Objective to study the phosphorylation state of P38MAPK alpha and beta in brain tissue and the expression of SD and its spatio-temporal patterns in various tissues after focal cerebral ischemia-reperfusion in hyperglycemic rats, so as to explore the role of P38MAPK in hyperglycemia aggravating cerebral ischemia injury.
Methods type 1 diabetes model by intraperitoneal injection of STZ was prepared by the middle cerebral artery, focal cerebral ischemia reperfusion model of 30min/ suture method. Then HE staining, observation of diabetic hyperglycemia in focal cerebral ischemia / reperfusion group (high glucose group) and normal blood glucose in focal cerebral ischemia / reperfusion group (the normal blood glucose group) pathological changes of brain tissue and neurological symptom score to focal cerebral ischemia / reperfusion in rats after nerve function defect, by immunohistochemistry, immunofluorescence staining and Western Blotting method to detect the phosphorylation of P38MAPK alpha and beta (p-p38 alpha, p-p38 beta) expression.
Results (1) in rats with focal cerebral ischemia / reperfusion after cerebral ischemia in rats showed neurological deficit, high blood glucose in ischemia reperfusion group the neurological score was significantly higher than that of normal blood glucose group increased (P 0.05). (2) under the light microscope, the normal blood glucose group in 30min minutes ischemia surgery 1D reperfusion showed obvious changes in cerebral edema, neuron swelling, shrinkage and dissolution and even death. 3D reperfusion in ischemic central area obviously neurons, glial cells astrocytes dissolved necrosis, vacuolar structure, 7d reperfusion visible brain edema, neuron loss, neuronal nuclear staining, visible around the glial cells around pyknosis and swelling of neurons, glial cells with small volume increased, the ischemic penumbra surrounding the infarct area disappeared, glial cells increased. 14d reperfusion infarction area reduced, no obvious brain edema, glial cells increased significantly, poly Integrated group, formation of glial nodules. High blood glucose group in ischemia 30min reperfusion 1D and 3D is lower than normal blood glucose group cerebral edema and infarct expansion, neuron swelling, shrinkage and dissolution increased, neuronal death is significantly higher than the normal blood glucose group, around the dead neurons, astrocytes also increased significantly. The number of 7D after reperfusion in ischemic central area of glial cells than normal glucose group increased (3). Immunohistochemistry and Western Blot results in phosphorylation of P38MAPK alpha: sham operation group and ischemia group on the expression of a small amount of brain tissue only p-P38MAPK alpha, alpha p-P38MAPK expression in ischemia group were significantly higher than those in sham operation group and ischemia group the side (P 0.05). In the ischemic central area and the surrounding area, began to increase p-P38MAPK alpha in normal blood glucose group at 3D after reperfusion, 14d reperfusion p-P38MAPK alpha positive expression was significantly increased, and reached the peak at 28d after reperfusion, to p-P The expression of 38MAPK decreased. High blood glucose group p-P38MAPK alpha in each sub group positive expression trend with normal blood glucose among groups at the same time, high blood glucose group p-P38MAPK positive expression was higher than that of the normal blood glucose group (P0.05). (4) the phosphorylation of P38MAPK beta immunohistochemistry and Western Blot results: sham operation group and the expression of a small amount of ischemia side brain tissue ischemia group only p-P38MAPK beta, p-P38MAPK beta expression was significantly higher than that in sham operation group and ischemia group (P 0.05) on the side. In the ischemic central area and the surrounding area, ischemia reperfusion group 1D, 3D, 7d, 14d, 28d showed no significant difference between the subgroups of p-P38MAPK beta positive expression, at the same time, high blood glucose group p-P38MAPK expression was higher than that of the normal blood glucose group (P0.05). (5) double immunofluorescence detection of phosphorylated p38 alpha and beta alpha and p-p38 results: early neurons co expression, the latter with microglia co expression of p-p38 beta with God; It is expressed in common.
Conclusion (1) in diabetic rat regional cerebral ischemia reperfusion model, hyperglycemia can aggravate the ischemia reperfusion injury of brain tissue, increase cerebral edema and cerebral infarction area, neuronal degeneration and apoptosis increase induced by ischemia reperfusion, which aggravates rat nervous system symptoms and signs in (2). Rat focal cerebral ischemia reperfusion model, P38MAPK alpha and beta are involved in activation and injury, hyperglycemia can aggravate P38MAPK alpha and beta activation, thereby increasing the cerebral ischemia reperfusion injury; (3) P38MAPK alpha and beta can aggravate neuronal damage aggravated from cerebral ischemia reperfusion injury; (4) the degree of phosphorylation and activation occurs via the p38MAPK signaling pathway, and by regulating its downstream factors involved in mediating hyperglycemia and cerebral ischemia reperfusion injury.

【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

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本文編號：1730125