本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點(diǎn)：HOXA4　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤,具有高發(fā)病率和低生存率的特點(diǎn),雖然目前先進(jìn)的診斷技術(shù)和包括手術(shù)、放療、化療聯(lián)合治療技術(shù)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展,但高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者的臨床預(yù)后仍較差,其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的平均生存期僅為12-14.6個(gè)月,5年存活率不到3%。研究發(fā)現(xiàn),生物分子學(xué)因素參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后。因此,探討能夠?yàn)槟z質(zhì)瘤基因治療提供依據(jù)的新型分子靶點(diǎn)至關(guān)重要。HOX基因是一類存在于真核生物中具有高度保守性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,分為HOXA、HOXB、HOXC、HOXD 4簇,又根據(jù)染色體的位置及簇間基因相似性分為39個(gè)基因。HOX基因均含有可編碼同源結(jié)構(gòu)域的保守序列,其表達(dá)的蛋白可識(shí)別5￠-TAAT-3￠為核心的10-12 bp的DNA序列并與之特異性結(jié)合,不但可調(diào)控胚胎細(xì)胞的增殖分化,而且在成熟細(xì)胞分化中起到重要的積極/消極監(jiān)控作用。HOX基因表達(dá)水平的失調(diào)可導(dǎo)致個(gè)體發(fā)育的形態(tài)結(jié)構(gòu)異常,也可以通過(guò)改變凋亡相關(guān)蛋白或信號(hào)通路導(dǎo)致包括膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腫瘤的發(fā)生發(fā)展。HOXA4、HOXB1作為同源異型盒基因家族的一員在不同腫瘤的發(fā)病機(jī)制中起到了重要的作用,但在人膠質(zhì)瘤中的表達(dá)以及調(diào)控機(jī)制仍不清楚。本課題將通過(guò)二部分實(shí)驗(yàn)對(duì)HOXA4、HOXB1在人膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況、臨床意義、生物學(xué)行為影響及相關(guān)調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究。第一部分HOXA4在膠質(zhì)瘤中作為癌基因通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)增殖,抑制凋亡目的:探討HOXA4在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平以及與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系,并通過(guò)HOXA4對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響進(jìn)一步分析相關(guān)調(diào)控機(jī)制。方法:(1)通過(guò)生物信息學(xué)GEO、CGGA數(shù)據(jù)庫(kù)初步分析HOXA4在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)情況;q RT-PCR和IHC檢測(cè)40例人膠質(zhì)瘤組織及8例正常腦組織的HOXA4 m RNA及蛋白表達(dá)水平;q RT-PCR和Western bolt檢測(cè)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株A172、U251、U87和人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA1800中HOXA4 m RNA及蛋白表達(dá)。(2)c2檢驗(yàn)分析HOXA4與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特性的關(guān)系;Kaplan-Meier法分析HOXA4與膠質(zhì)瘤患者生存率的關(guān)系;Cox回歸模型分析HOXA4與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系。(3)體外通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分析HOXA4對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲、周期和凋亡的影響;體內(nèi)通過(guò)裸鼠皮下荷瘤模型分析HOXA4對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的影響。(4)通過(guò)Western bolt和IHC方法體內(nèi)外檢測(cè)HOXA4對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白β-catenin、DVL2、Gsk3β、Cyclin D1和P53表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)HOXA4作為癌基因在人膠質(zhì)瘤中高表達(dá),與膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān)。(2)膠質(zhì)瘤患者HOXA4表達(dá)水平與患者生存率及預(yù)后密切相關(guān)。(3)HOXA4能促進(jìn)膠質(zhì)瘤增殖、侵襲,抑制凋亡。(4)Western bolt和IHC體外和體內(nèi)檢測(cè)顯示HOXA4表達(dá)抑制后β-catenin、DVL2和Cyclin D1蛋白表達(dá)水平明顯下降,Gsk3β和P53蛋白表達(dá)水平明顯升高。結(jié)論:HOXA4作為癌基因在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平明顯升高,并與膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān)。HOXA4高表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者預(yù)后較差,并且HOXA4表達(dá)水平為膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的診斷因素。HOXA4可通過(guò)參與Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲,抑制凋亡。第二部分HOXB1在人膠質(zhì)瘤中作為抑癌基因受mi R-3175調(diào)控目的:探討HOXB1在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平以及與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系,通過(guò)研究HOXB1和mi R-3175對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響進(jìn)一步分析兩者靶向調(diào)控機(jī)制。方法:(1)通過(guò)生物技術(shù)信息學(xué)GEO、CGGA數(shù)據(jù)庫(kù)初步分析HOXB1在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)情況;q RT-PCR和IHC檢測(cè)40例人膠質(zhì)瘤組織及8例正常腦組織的HOXB1表達(dá);q RT-PCR和Western bolt檢測(cè)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株A172、U251、U87和人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA1800中HOXB1表達(dá)。(2)c2檢驗(yàn)分析HOXB1與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特性關(guān)系;Kaplan-Meier法分析HOXB1與膠質(zhì)瘤患者生存率關(guān)系;Cox回歸模型分析HOXB1與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后關(guān)系。(3)通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分析HOXB1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響。(4)生物信息學(xué)分析靶向調(diào)控HOXB1的上游mi RNA;通過(guò)q RT-PCR分析mi R-3175在人膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平;通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分析mi R-3175對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響。(5)熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)mi R-3175對(duì)HOXB1 3′-UTR的調(diào)控作用;q RT-PCR和Western blot分析mi R-3175在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(A172、U251、U87)中對(duì)HOXB1表達(dá)的調(diào)控作用;Spearman相關(guān)性分析人膠質(zhì)瘤組織中HOXB1和mi R-3175表達(dá)的關(guān)系。(6)MTT實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)mi R-3175對(duì)低表達(dá)HOXB1致瘤性細(xì)胞增殖、凋亡方面的調(diào)控作用;Western bolt檢測(cè)mi R-3175對(duì)低表達(dá)HOXB1致瘤性相關(guān)凋亡蛋白Procaspase-3、P53和Cytochrome C表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)HOXB1作為抑癌基因在人膠質(zhì)瘤中低表達(dá),并與膠質(zhì)瘤的惡性程度呈負(fù)相關(guān)。(2)膠質(zhì)瘤患者HOXB1表達(dá)水平與患者生存率及預(yù)后密切相關(guān)。(3)HOXB1能抑制膠質(zhì)瘤增殖、侵襲,促進(jìn)凋亡。(4)mi R-3175在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平升高,可促進(jìn)膠質(zhì)瘤增殖、侵襲,抑制凋亡。(5)熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析發(fā)現(xiàn)mi R-3175可通過(guò)3′-UTR堿基互補(bǔ)作用于HOXB1基因靶點(diǎn),并且高表達(dá)mi R-3175可下調(diào)HOXB1 m RNA及蛋白表達(dá)水平,低表達(dá)mi R-3175可上調(diào)HOXB1 m RNA及蛋白表達(dá)水平;Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)人膠質(zhì)瘤組織中HOXB1與mi R-3175呈負(fù)相關(guān)(R=-0.466)(6)MTT實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)mi R-3175表達(dá)抑制后可顯著阻止膠質(zhì)瘤細(xì)胞低表達(dá)HOXB1增殖促進(jìn)作用和凋亡抑制作用;Western bolt檢測(cè)發(fā)現(xiàn)mi R-3175表達(dá)抑制后逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤低表達(dá)HOXB1的致瘤性后Cytochrome C和P53蛋白表達(dá)水平明顯升高,Procaspase-3蛋白表達(dá)水平明顯下降。結(jié)論:HOXB1在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平明顯下降,作為抑癌基因能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲,促進(jìn)凋亡。HOXB1低表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者生存期較差,并且HOXB1表達(dá)水平為膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的診斷因素。mi R-3175在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)水平明顯升高,能促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲,抑制凋亡,并且可直接調(diào)控靶基因HOXB1的表達(dá)水平。mi R-3175表達(dá)抑制可有效阻止膠質(zhì)瘤中低表達(dá)HOXB1的致瘤性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1709825