本文選題：神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子-β　切入點(diǎn)：膠質(zhì)瘤　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：膠質(zhì)瘤是成人最常見(jiàn)的原發(fā)性腦腫瘤,活躍的微血管增生與惡性膠質(zhì)瘤,尤其多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)的高侵襲性和不良預(yù)后密切相關(guān)。盡管近年來(lái)膠質(zhì)瘤的抗血管生成治療取得了一定進(jìn)展,但由于膠質(zhì)瘤血管新生化的復(fù)雜機(jī)制,某些血管靶向藥物引發(fā)了相應(yīng)的化療抵抗,亟需鑒定膠質(zhì)瘤源性血管形成的特異性調(diào)控因子。芽生式血管生成曾被認(rèn)為是腫瘤血管形成的唯一方式。最近,研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)和惡性腫瘤細(xì)胞可衍生為血管組成細(xì)胞,從而構(gòu)成新的腫瘤供血管道,這為我們深入認(rèn)識(shí)腫瘤血管新生化的機(jī)制展示了一個(gè)新的視角。腫瘤血管新生化常涉及胚胎血管發(fā)育中某些分子調(diào)控途徑的再活化。值得注意的是,胚胎發(fā)育中,神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)和血管內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,ECs)共定位于一個(gè)神經(jīng)血管單元,神經(jīng)形成和血管發(fā)生之間相互促進(jìn),且存在共同的調(diào)控因子,而且有研究報(bào)道NSCs轉(zhuǎn)分化為ECs。已有研究證明,在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和演進(jìn)中,膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(glioma stem cells,GSCs)和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞(tumor endothelial cells,TECs)之間也存在如此的動(dòng)態(tài)相互作用,也有研究相繼報(bào)道GSCs或GBM瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為T(mén)EC。神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子-β(Glia maturation factor-β,GMF-β)最早被界定為一種神經(jīng)膠質(zhì)分化因子,該因子介導(dǎo)膠質(zhì)細(xì)胞的分化和某些神經(jīng)元的生長(zhǎng),還可促進(jìn)神經(jīng)組織再生。既往研究顯示GMF-β可負(fù)反饋調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖,促其膠質(zhì)分化,并可介導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的某些化療敏感性。然而,另有研究報(bào)道,乳腺癌和卵巢癌組織中GMF-β過(guò)表達(dá)與臨床不良預(yù)后相關(guān)�；谀z質(zhì)瘤中神經(jīng)分化和血管發(fā)生之間可通過(guò)共同調(diào)控因子相互促進(jìn)的研究背景,并結(jié)合GMF-β在膠質(zhì)瘤和其它腫瘤中多面作用的報(bào)道,本課題組假設(shè),作為神經(jīng)膠質(zhì)分化因子的GMF-β也可能介導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞構(gòu)成腫瘤新生血管,從而參與促進(jìn)膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展。我們首先檢測(cè)各級(jí)膠質(zhì)瘤中GMF-β表達(dá)模式,并分析其與血管新生的關(guān)系及其臨床意義,又進(jìn)一步從體外觀測(cè)GMF-β是否可介導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外成管以及內(nèi)皮轉(zhuǎn)分化,最后在異種原位移植膠質(zhì)瘤模型中驗(yàn)證gmf-β介導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為tec的作用。主要方法、研究結(jié)果及結(jié)論如下:1.通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用gmf-β/cd31免疫組織化學(xué)雙標(biāo)染色和過(guò)碘酸雪夫氏(periodicacid-schiff,pas)組織化學(xué)染色技術(shù),檢測(cè)146例各級(jí)別人膠質(zhì)瘤組織樣本中g(shù)mf-β表達(dá)模式,并統(tǒng)計(jì)分析其與微血管密度(microvesseldensity,mvd)、預(yù)后和其它臨床病理參數(shù)的關(guān)系。①在各級(jí)別膠質(zhì)瘤的腫瘤細(xì)胞和瘤內(nèi)微血管內(nèi)皮細(xì)胞中均檢測(cè)到gmf-β表達(dá),且腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮中g(shù)mf-β表達(dá)水平不僅與膠質(zhì)瘤級(jí)別正相關(guān)(p0.001;p0.0001),也與mvd線性正相關(guān)(r=0.367,p0.001;r=0.557,p0.0001);②gbm中微血管旁膠質(zhì)瘤細(xì)胞的gmf-β表達(dá)水平顯著高于遠(yuǎn)離微血管的膠質(zhì)瘤細(xì)胞(p0.0001),而且與腫瘤血管內(nèi)皮gmf-β表達(dá)水平以及mvd之間均存在線性正相關(guān)關(guān)系(r=0.770,p0.0001;r=0.620,p0.0001)。③腫瘤血管內(nèi)皮的gmf-β高表達(dá)是膠質(zhì)瘤患者不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。雖然kaplan meier生存曲線和單因素cox回歸分析顯示膠質(zhì)瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮的gmf-β表達(dá)是膠質(zhì)瘤患者的不良預(yù)后指標(biāo)(p值均0.001),進(jìn)一步多因素cox回歸分析明確了腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的(而非腫瘤細(xì)胞的)gmf-β表達(dá)水平是膠質(zhì)瘤患者pfs(風(fēng)險(xiǎn)比1.244,95%可信區(qū)間1.136-1.363,p0.0001)和os(風(fēng)險(xiǎn)比1.236,95%可信區(qū)間1.126-1.358,p0.0001)的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。④膠質(zhì)瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮的gmf-β表達(dá)水平與其它臨床參數(shù)的相關(guān)性。pearsonχ2檢驗(yàn)分析顯示gmf-β表達(dá)與某些不良預(yù)后指標(biāo)以及放化療情況相關(guān)。瘤細(xì)胞gmf-β高表達(dá)與高腫瘤級(jí)別、高ki67增殖指數(shù)以及患者接受放療均存在顯著相關(guān)性(p值均0.05)。腫瘤血管內(nèi)皮gmf-β高表達(dá)與高腫瘤級(jí)別、患者高齡(p值均0.001)以及患者接受化療和放療均存在顯著相關(guān)性(p值均0.05)。另外,腫瘤血管內(nèi)皮gmf-β表達(dá)與膠質(zhì)瘤發(fā)生部位相關(guān),顳葉膠質(zhì)瘤呈現(xiàn)血管內(nèi)皮gmf-β高表達(dá)趨勢(shì)(p值0.05)。2.通過(guò)慢病毒過(guò)表達(dá)/干擾載體的構(gòu)建,相應(yīng)上調(diào)/下調(diào)人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤u87細(xì)胞的gmf-β基因(gmfb)表達(dá),觀測(cè)gmf-β對(duì)u87細(xì)胞體外成管和內(nèi)皮轉(zhuǎn)分化的作用。①應(yīng)用二維基質(zhì)膠成管實(shí)驗(yàn),評(píng)估u87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外血管發(fā)生活性,發(fā)現(xiàn)u87細(xì)胞成管能力依賴于內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基�！澳Ｊ皆u(píng)分”和“分支點(diǎn)計(jì)數(shù)”兩種量化系統(tǒng)評(píng)估顯示,u87細(xì)胞成管能力低于臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec(p值均0.05)。②內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入去鐵胺(deferoxamine,dfo)模擬的缺氧條件,誘導(dǎo)u87細(xì)胞中g(shù)mf-β和內(nèi)皮特異標(biāo)記cd31mrna表達(dá)平行上調(diào)。③gmf-β敲低導(dǎo)致u87細(xì)胞成管能力下降,U87-sh GMFB細(xì)胞的成管能力顯著低于對(duì)照組U87-mock細(xì)胞(P0.001;P0.0001)④GMF-β敲低抑制U87細(xì)胞體外增殖活性,與U87-mock組對(duì)比,U87-shGMFB組瘤細(xì)胞增殖被顯著抑制(P0.05)。⑤U87-OE-GMFB細(xì)胞中GMF-β過(guò)表達(dá)相應(yīng)上調(diào)內(nèi)皮特異標(biāo)記CD31mRNA表達(dá),U87-sh GMFB細(xì)胞中GMF-β敲低則下調(diào)CD31m RNA表達(dá)。3.我們?cè)谑笤灰浦材z質(zhì)瘤模型中,進(jìn)一步驗(yàn)證GMF-β介導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞衍生TECs的作用。所有異種移植U87人膠質(zhì)瘤組織樣本均進(jìn)行免疫組化人GMF-β/CD31雙標(biāo)染色。①GMF-β過(guò)表達(dá)導(dǎo)致異種原位移植U87膠質(zhì)母細(xì)胞瘤內(nèi)瘤細(xì)胞源性新生血管增多以及荷瘤鼠生存期縮短。統(tǒng)計(jì)分析顯示,與U87-vector對(duì)照組比較,U87-OE-GMFB組荷瘤鼠生存期顯著縮短(P0.01),而且U87-OE-GMFB組移植瘤中人CD31陽(yáng)性微血管密度顯著增高(P0.001)。②GMF-β敲低導(dǎo)致異種原位移植U87膠質(zhì)瘤內(nèi)瘤細(xì)胞源性血管缺如以及成瘤抑制。統(tǒng)計(jì)分析顯示,與U87-mock組比較,U87-shGMFB組移植瘤體積顯著減小(P0.0001)伴人CD31陽(yáng)性微血管密度顯著降低(P0.001)。綜上所述,人膠質(zhì)瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中均存在GMF-β的特異表達(dá),而且與膠質(zhì)瘤級(jí)別、MVD和臨床預(yù)后顯著相關(guān),尤其TECs中GMF-β高表達(dá)是膠質(zhì)瘤患者不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。GMF-β介導(dǎo)U87膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的體外成管和CD31表達(dá),促進(jìn)U87細(xì)胞原位移植瘤的瘤體生長(zhǎng)以及瘤細(xì)胞源性血管形成。我們的研究結(jié)果提示GMF-β可作為一個(gè)新型的膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)記和預(yù)后指標(biāo),并有望為膠質(zhì)瘤血管靶向治療提供一個(gè)具有細(xì)胞特異性的分子靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Expression of vascular endothelial growth factor-C and angiogenesis in esophageal squamous cell carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2006年28期

2 Michael G.Walker;Gene Expression Versus Sequence for Predicting Function: Glia Maturation Factor Gamma Is Not A Glia Maturation Factor[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2003年01期

，

本文編號(hào)：1659483