發(fā)布時間：2018-03-21 13:38

  本文選題：癲癇　切入點：谷氨酸　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:觀察EAAT2在氯化鋰-匹魯卡品點燃癲癇大鼠腦組織中的表達情況,明確p38MAPK抑制劑SB203580對EAAT2的表達有無影響。方法:健康成年雄性SD大鼠隨機分為以下四個組:正常對照組(n=5)、癲癇組(0h、24h、3d、1W、2W五個時間點,n=5×4)、SB203580組(n=5)及溶劑對照組(n=5)。經(jīng)腹腔依次注射氯化鋰-匹魯卡品建立癲癇實驗動物模型,應(yīng)用Racine評分標(biāo)準(zhǔn)評估各組大鼠發(fā)作程度及首次癲癇發(fā)作持續(xù)時間,HE染色觀察各組大鼠海馬區(qū)病理形態(tài)學(xué)改變;Western Blot、免疫組化以及免疫熒光檢測EAAT2在各組大鼠腦組織中的表達情況。結(jié)果:1.行為學(xué)結(jié)果顯示:腹腔注射匹魯卡品后10 min,癲癇組、溶劑對照組和SB203580組Racine評分依次為2.57±0.48、2.55±0.52和0.66±0.48),20min分別為:3.37±0.50、3.69±0.55和1.75±0.43),30min分別為:4.88±0.46、4.87±0.45和2.87±0.32。大鼠首次癲癇發(fā)作持續(xù)時間癲癇組為(62.56±9.22)s,溶劑對照組為(58.79±8.41)s,SB203580組為(28.35±4.00)s。各時間點Racine評分和首次癲癇發(fā)作持續(xù)時間在癲癇組和溶劑對照組中比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),同前兩組比較,SB203580組首次癲癇發(fā)作持續(xù)時間明顯縮短,并且Racine評分明顯降低(P0.01)。2.HE染色結(jié)果示:正常對照組大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞核大小規(guī)則,未見異常病理性改變。癲癇發(fā)作3d時,大鼠海馬組織出現(xiàn)細(xì)胞核固縮以及大部分神經(jīng)細(xì)胞壞死。3.Western Blot檢測EAAT2發(fā)現(xiàn):正常對照組大鼠海馬及顳葉新皮質(zhì)中EAAT2有基礎(chǔ)水平表達;癲癇發(fā)作后24 h EAAT2的表達較正常對照組上調(diào),3d時表達到頂峰(P0.05);SB203580組,癲癇發(fā)作后第3d,EAAT2的表達較癲癇組(3d)顯著升高(P0.05);4.免疫組化結(jié)果示:正常對照組海馬EAAT2陽性細(xì)胞數(shù)為(12.60±3.44)個,癲癇組為(21.00±3.87)個,SB203580組為(33.42±9.52)個。與正常組比較,癲癇組海馬中EAAT2陽性細(xì)胞數(shù)增多(P0.05);與癲癇組的對比,SB203580組大鼠海馬組織中EAAT2陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05)。5.免疫熒光對EAAT2在大鼠海馬中的細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn),神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞胞膜和胞漿中均有表達。結(jié)論:p38MAPK抑制劑SB203580可升高癲癇大鼠腦組織中EAAT2的表達,并可減輕大鼠的癲癇發(fā)作程度。
[Abstract]:Objective: to observe the expression of EAAT2 in the brain of epileptic rats induced by lithium chloride and pilocarpine. Methods: healthy adult male Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups: normal control group (control group), control group (control group), control group (control group), control group (control group), control group (control group), control group (n = 5) and solvent control group (n = 5). The animal model of epilepsy was established by ejecting lithium chloride and pilocarpine. Using Racine score to evaluate the severity of seizure and duration of the first epileptic seizure in each group and to observe the pathomorphological changes of hippocampal area of rats in each group by HE staining, immunohistochemistry and immunofluorescence detection of EAAT2 in brain tissue of rats in each group. Results: 1. Behavioral results showed: 10 min after intraperitoneal injection of pilocarpine, epilepsy group, The Racine scores of solvent control group and SB203580 group were 2.57 鹵0.48v 2.55 鹵0.52 and 0.66 鹵0.48g / 20min, respectively, which were 3.37 鹵0.50 鹵0.69 鹵0.55 and 1.75 鹵0.43m 30 minutes, respectively, and were 4.88 鹵0.46v 4.87 鹵0.45 and 2.87 鹵0.32 respectively. In the epileptic group of the first seizure duration, the scores were 62.56 鹵9.22 / s and 58.79 鹵8.41 / s / 203580, 28.35 鹵4.00 / s, respectively. The Racine score at each time point and the first epileptic attack were 28.35 鹵4.00 s in the solvent control group and in the solvent control group respectively. Duration was compared between epileptic group and solvent control group. Compared with the former two groups, the duration of the first seizure in SB203580 group was significantly shortened, and the Racine score was significantly decreased by P0.01. 2. The results of HE staining showed that the hippocampal tissue structure of normal control group was clear and the size of nucleus was regular. No abnormal pathological changes were observed. At 3 days after seizure, nucleus pyknosis and necrosis of most nerve cells were observed in hippocampal tissue of rats. The expression of EAAT2 in hippocampal and temporal lobe neocortex of normal control group was detected by Western Blot. The expression of EAAT2 at 24 h after seizure was significantly higher than that in the control group at 3 days after seizure, and the expression of EAAT2 was significantly higher than that in the epileptic group on the 3rd day after seizure. The immunohistochemical results showed that the number of EAAT2 positive cells in hippocampus of normal control group was 12.60 鹵3.44). The epileptic group was 21.00 鹵3.87, SB203580 was 33.42 鹵9.52, compared with the normal group, The number of EAAT2 positive cells in hippocampus increased in epileptic group and the number of EAAT2 positive cells in hippocampus of SB203580 group was significantly increased compared with that of epileptic group. The localization of EAAT2 in hippocampus of rats was observed by immunofluorescence. Conclusion SB203580, a inhibitor of p38 MAPK, can increase the expression of EAAT2 in the brain tissue of epileptic rats and alleviate the seizures in rats.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742.1

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本文編號：1644084