本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點(diǎn)：細(xì)胞增殖　出處：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是具有高度惡性，高侵襲性的原發(fā)腦腫瘤。多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）是最常見(jiàn)、最致命的。目前主流的治療方法是多種方法結(jié)合處理，一些適當(dāng)?shù)妮o助治療會(huì)延長(zhǎng)患者的生存預(yù)期。 目前的神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療包括在安全情況下最大限度的切除腫瘤，聯(lián)合術(shù)后放療及口服DNA烷化劑。替莫唑胺（TMZ）的療效根據(jù)GBM的組織來(lái)源及甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）啟動(dòng)子的甲基化的情況有所不同。NVP-BEZ235被證明在體內(nèi)和體外是通過(guò)抑制自噬和增加細(xì)胞凋亡提高TMZ對(duì)惡性膠質(zhì)瘤的療效。PI3K參與NF-κB-MGMT調(diào)節(jié)。也有將PI3K抑制劑與TMZ聯(lián)合治療以提高療效的研究。PI3K抑制劑能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)。因?yàn)楝F(xiàn)階段PI3K抑制的研究，BEZ235作為一個(gè)具有潛在抗腫瘤的藥物已經(jīng)作為第一批PI3K抑制劑作為臨床試驗(yàn)中。本研究主要目的在于測(cè)試在耐化療的MGMT陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中TMZ和BEZ235聯(lián)合治療是否比單獨(dú)BEZ及TMZ治療抗腫瘤活性更加有效。 本課題從三個(gè)方面對(duì)PI3K抑制劑BEZ235在MGMT陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤細(xì)胞治療的研究：1.PI3K/Akt/mTOR抑制劑之一NVP-BEZ235對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。2. BEZ235對(duì)相關(guān)腫瘤細(xì)胞甲基化和非甲基化程度的影響。3.比較細(xì)胞系各處理組中MGMT蛋白表達(dá)情況。 目的： 探討MGMT陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞系與MGMT陰性細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系之間TMZ治療效果差距，同時(shí)通過(guò)對(duì)PI3K/mTOR抑制劑的NVP-BEZ235聯(lián)合常規(guī)膠質(zhì)瘤化療藥物TMZ聯(lián)合運(yùn)用，研究不同情況下聯(lián)合處理后是否能提高對(duì)耐TMZ的MGMT陽(yáng)性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的治療效果。 方法： 實(shí)驗(yàn)選取MGMT陽(yáng)性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系T98G及MGMT陰性細(xì)胞系A(chǔ)172，將對(duì)數(shù)期的細(xì)胞接種于6孔板、96孔板中，實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，在A172腫瘤細(xì)胞系內(nèi)，使用TMZ處理組及不使用藥物組。T98G細(xì)胞系內(nèi)，對(duì)照組不使用任何藥物，處理組又分為單獨(dú)使用抗腫瘤藥物TMZ組，單獨(dú)使用PI3K/Akt抑制劑BEZ235組，TMZ聯(lián)合PI3K/Akt抑制劑BEZ235組。1.在24,48,72小時(shí)處理時(shí)間中使用MTT法分析腫瘤細(xì)胞系個(gè)實(shí)驗(yàn)組增殖抑制率，了解各組處理后細(xì)胞增殖抑制率的效果及程度。2.使用Methylation PCR比較T98G、A172各自單獨(dú)使用TMZ處理組，，及T98G中TMZ聯(lián)合BEZ235處理組各組的MGMT基因的甲基化及非甲基化程度。3.量化處理，使用Western Blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)上部分中各組的MGMT Protein表達(dá)及分析統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.TMZ在MGMT陽(yáng)性細(xì)胞系T98G中效果明顯較A172細(xì)胞系差，在TMZ聯(lián)合使用不同濃度的BEZ235處理中，效果均較單獨(dú)TMZ使用效果好。2. Methylation PCR量化處理結(jié)果提示T98G組中TMZ聯(lián)合BEZ235處理效果較單獨(dú)使用TMZ的A172和T98G的抑制率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.量化免疫印跡（Western Blot）實(shí)驗(yàn)結(jié)果后，各實(shí)驗(yàn)組MGMT蛋白含量的表達(dá)也符合甲基化PCR的結(jié)果，提示了BEZ235處理后明顯的減少了T98G細(xì)胞中MGMT的去甲基化程度。 結(jié)論： 1.MGMT陽(yáng)性細(xì)胞系中單獨(dú)使用TMZ效果不佳，聯(lián)合使用BEZ235后，效果較單獨(dú)使用增強(qiáng)，其增強(qiáng)效果存在時(shí)間及濃度依賴特點(diǎn)；單獨(dú)使用BEZ235也對(duì)T98G細(xì)胞存在細(xì)胞殺傷性。 2.在T98G細(xì)胞系中，BEZ235聯(lián)合TMZ處理顯示更強(qiáng)細(xì)胞毒性，提示BEZ235可通過(guò)NF-κB-MGMT通路及抑制腫瘤活性。 3.通過(guò)甲基化PCR分析MGMT啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)，作為PI3K抑制劑(PI3Ki)起作用的BEZ235能顯著逆轉(zhuǎn)MGMT啟動(dòng)子的非甲基化，進(jìn)而減少M(fèi)GMT蛋白表達(dá)。
[Abstract]:Glioma is a highly aggressive and highly aggressive primary brain tumor. Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and the most lethal. Currently, the mainstream treatment is multiple ways of combining treatment, and some appropriate adjuvant therapy will prolong the survival expectation of patients.
Glioma treatment currently included in the safety case maximum resection combined with postoperative radiotherapy and DNA. Oral alkylating agent temozolomide (TMZ) curative effect according to the tissue source and GBM methylguanine -DNA methyltransferase (MGMT) promoter methylation of.NVP-BEZ235 was demonstrated in different in vitro and in vivo by inhibiting autophagy and increase the apoptosis of.PI3K to improve the curative effect of TMZ on malignant glioma in NF- kappa B-MGMT regulation. There will be PI3K inhibitors and TMZ combination therapy to improve the therapeutic effect of.PI3K inhibitor can inhibit the growth of tumor. Because the present research of PI3K inhibition, BEZ235 as a potential anti tumor the drug has been as the first batch of PI3K inhibitors in the clinical trials. The main purpose of this study is to test the resistance to chemotherapy of MGMT positive glioma cell lines TMZ and BEZ235 combined treatment Whether treatment is more effective than the antitumor activity of BEZ and TMZ alone.
This paper from the three aspects of the research of PI3K inhibitor BEZ235 in MGMT positive glioma cell therapy: effect of BEZ235 on the expression of MGMT.2. correlated with tumor cell methylation and non methylation of the.3. cells in the treatment group of NVP-BEZ235 protein 1.PI3K/Akt/mTOR inhibitor effect on tumor cell proliferation.
Objective:
Between MGMT positive tumor cells and MGMT negative cell tumor cell line TMZ treatment gap, at the same time through the PI3K/mTOR inhibitor NVP-BEZ235 combined with conventional chemotherapy combined with TMZ glioma, whether to improve MGMT positive glioma cell line TMZ resistant to treatment effect to study under different conditions after the combined treatment.
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本文編號(hào)：1628975