發(fā)布時間：2018-03-17 17:07

  本文選題：顳葉癲癇　切入點：內(nèi)吞　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：本研究旨在了解鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)的癲癇發(fā)作大鼠模型和顳葉癲癇患者中dynamin1表達(dá)水平,并將dynamin1特異性抑制劑運(yùn)用于體內(nèi)和體外實驗以探究dynamin1與癲癇發(fā)作的關(guān)系。 方法:課題組前期收集癲癇患者及對照組人腦組織,在癲癇患者和對照組人腦組織中,用逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測dynamin1基因的mRNA水平,并用western blot和免疫熒光法,測定dynamin1在人腦組織的蛋白表達(dá)水平和表達(dá)部位。對于匹魯卡品誘導(dǎo)建立的大鼠癲癇模型,用上述相同實驗測定動物腦組織中dynamin1表達(dá)情況。側(cè)腦室注射dynamin1特異抑制劑dynasore后再造模觀察大鼠模型行為學(xué)變化,并采用膜片鉗技術(shù)觀察dynasore對癇樣放電興奮性的影響。 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)匹魯卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇模型中不同時間點(1天,3天,7天)和對照組相比, dynamin1的mRNA水平和蛋白水平較對照組均增高，，且癲癇患者與對照組比較，dynamin1的mRNA水平和蛋白水平明顯高于對照組。Dynamin1主要在神經(jīng)元的胞漿和軸突表達(dá),星形膠質(zhì)細(xì)胞未見表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)dynasore為10μM組大鼠癲癇發(fā)作潛伏期明顯延長,發(fā)作程度減輕，發(fā)作頻率降低。全細(xì)胞膜片鉗記錄到用無鎂外液誘導(dǎo)出持續(xù)癇樣放電后，濃度為10μM的dynasore能明顯減少動作電位頻率。但在行為學(xué)和膜片鉗實驗中，一致發(fā)現(xiàn)dynasore濃度為1μM和160μM時與DMSO組和生理鹽水組未見明顯差異。 結(jié)論：我們的研究發(fā)現(xiàn)在癲癇動物模型和癲癇患者中，dynamin1的mRNA水平和蛋白水平均升高，其特異性抑制劑dynasore在特定濃度（10μM）下具有在體內(nèi)匹羅卡品/體外癲癇腦片模型抗癲癇發(fā)作作用，說明dynamin1可能和癲癇發(fā)作相關(guān)，其特異性抑制劑dynasore具有抗癲癇發(fā)作的效應(yīng)，但其具體抗癲癇發(fā)作機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of dynamin1 in rat model of lithium-pilocarpine induced epilepsy and temporal lobe epilepsy, and to investigate the relationship between dynamin1 and seizure by using dynamin1 specific inhibitor in vivo and in vitro. Methods: the human brain tissues of epileptic patients and control group were collected. The mRNA level of dynamin1 gene was detected by reverse transcriptase PCR (RT PCR) and western blot and immunofluorescence assay in epileptic and control human brain tissues. The protein expression level and expression site of dynamin1 in human brain tissue were determined. The expression of dynamin1 in brain tissue was measured by the same experiment mentioned above. The behavioral changes of rat model were observed after the injection of dynasore, a specific inhibitor of dynamin1, and the effect of dynasore on the excitability of epileptiform discharge was observed by patch clamp technique. Results: compared with the control group, the mRNA and protein levels of dynamin1 in the rat epilepsy model induced by pilocarpine were higher than those in the control group at different time points (1 day, 3 days and 7 days), and compared with the control group, the levels of mRNA and protein were higher than those of the control group. The levels of mRNA and protein in epileptic patients were significantly higher than those in control group. The expression of dynamin1 was mainly found in the cytoplasm and axon of neurons, but not in astrocytes. It was found that the latency of epileptic seizure was prolonged in rats with 10 渭 M dynasore. After sustained epileptiform discharge was induced by magnesium free solution, the frequency of action potential was significantly reduced by 10 渭 M dynasore. However, in behavioral and patch clamp experiments, the frequency of action potential was significantly decreased in behavioral and patch clamp experiments. It was found that there was no significant difference between DMSO group and normal saline group when the concentration of dynasore was 1 渭 M and 160 渭 M. Conclusion: our study found that the levels of mRNA and protein in epileptic animal model and epileptic patients were increased. Dynasore, a specific inhibitor, has antiepileptic effects on pilocarpine / epileptic brain tablets in vivo and in vitro at a specific concentration of 10 渭 M, suggesting that dynamin1 may be associated with epileptic seizures, and its specific inhibitor, dynasore, has an antiepileptic effect. However, the mechanism of antiepileptic seizure needs further study.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R742.1

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本文編號：1625665