外周血全基因組miRNAs表達譜作為篩選癲癇生物標志物的研究
本文選題:癲癇 切入點:miRNA 出處:《青島大學》2016年博士論文 論文類型:學位論文
【摘要】:背景:癲癇是慢性反復發(fā)作性短暫腦功能失調綜合征,WHO報告全球活動性癲癇平均患病率約4-10‰,在發(fā)展中國家這一比例達到6-10‰,目前全世界約有5000萬癲癇病人[1],我國大約有900萬癲癇患者,每年以40萬發(fā)病人數(shù)遞增。癲癇所給予患者及家庭造成負擔是沉重的。目前診斷癲癇主要是依據(jù)詳盡的臨床病史、神經(jīng)查體、腦電圖(EEG)、神經(jīng)影像學、家族史等,但是癲癇是一類發(fā)作性疾病,在發(fā)作間期患者可以表現(xiàn)為完全正常,而且患者及家屬給予的病史往往也不夠詳盡,所以診斷仍有一定困難,因此尋找早期診斷癲癇的客觀、準確、方便檢測的特異性生物標志物是一項急需解決的重要問題。micro RNA(mi RNA)是一種單鏈的、非編碼的小分子RNA,近些年來,主要在腫瘤及一些其他疾病中研究,即使在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中,也主要探究人或動物模型的腦組織及腦脊液中mi RNA的表達,而mi RNA在血液中具有非凡的穩(wěn)定性,且會隨著機體生理病理情況的改變而發(fā)生變化,所以我們推測mi RNA在癲癇患者外周全血中可能存在差異表達,那將在早期診斷癲癇中成為一種潛在的生物標志物,從而具有重要應用前景。方法:1、初篩:抽取兩組對象(病例組50例,對照組50例)的清晨空腹外周血2ml,應用試劑盒PAX-gene Blood mi RNA kit(Qiagen)進行mi RNA的提取,提取過程完全按照試劑盒的操作指南進行。每個樣本留取RNA溶液20μL,并將每組分別混合,得到病例組和對照組混合RNA各1ml。將兩組混合RNA進行Hiseq2000高通量測序技術分析病例組和對照組全血所有mi RNAs的表達譜。2、復篩:提取病例組50例、對照組50例的單個樣本的mi RNA,提取方法同初篩。并用逆轉錄試劑盒One Step Prime Script mi RNA c DNA Synthesis Kit(Takara,日本)反轉錄為c DNA。對初篩篩選出的差異性表達mi RNAs進行進一步擴增。3、驗證:對復篩中差異性mi RNA在大樣本(病例組100例、對照組100例)的單個樣本中進行進一步驗證。方法同復篩。4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果:1、運用高通量測序進行初篩:全血mi RNA高通量測序顯示共有200種mi RNA在兩組全血中的表達差異具有統(tǒng)計學意義。選取符合標準的mi RNA進行下一步復篩。2、運用q RT-PCR進行復篩:結果顯示,let-7f-5p,-130a-3p,-146a-5p,126-5p,novel-mi R-164的表達水平顯著上調,mi R-194-5p,-181c-5p的表達水平顯著下調。3、運用q RT-PCR進行大樣本驗證:與對照組對比中,病例組全血let-7f-5p,-130a-3p,-146a-5p,126-5p的表達水平顯著上調,與復篩階段的變化一致;mi R-181c-5p表達水平顯著下調,與復篩階段變化一致。而mi R-194-5p和novel-mir-164在病例組和對照組間的表達差異無統(tǒng)計學意義。因此排除mi R-194-5p和novel-mir-164作為癲癇的生物標志物。考慮臨床操作的簡便性和經(jīng)濟性,我們認為mi R-126-5p的診斷價值最高,有望成為診斷癲癇的潛在生物標志物。結論:本研究首次對癲癇患者外周全血全基因組mi RNAs譜進行表達分析,并篩選出5種表達變化的mi RNAs:let-7f-5p,-130a-3p,-146a-5p,-126-5p和mi R-181c-5p,尤其是mi R-126-5p,以其較高的靈敏度和特異度,有望成為早期癲癇診斷的生物學標志物。
[Abstract]:......
【學位授予單位】:青島大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R742.1
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本文編號:1614230
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