本文選題：癲癇　切入點(diǎn)：miRNA　出處：《青島大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:癲癇是慢性反復(fù)發(fā)作性短暫腦功能失調(diào)綜合征,WHO報告全球活動性癲癇平均患病率約4-10‰,在發(fā)展中國家這一比例達(dá)到6-10‰,目前全世界約有5000萬癲癇病人[1],我國大約有900萬癲癇患者,每年以40萬發(fā)病人數(shù)遞增。癲癇所給予患者及家庭造成負(fù)擔(dān)是沉重的。目前診斷癲癇主要是依據(jù)詳盡的臨床病史、神經(jīng)查體、腦電圖(EEG)、神經(jīng)影像學(xué)、家族史等,但是癲癇是一類發(fā)作性疾病,在發(fā)作間期患者可以表現(xiàn)為完全正常,而且患者及家屬給予的病史往往也不夠詳盡,所以診斷仍有一定困難,因此尋找早期診斷癲癇的客觀、準(zhǔn)確、方便檢測的特異性生物標(biāo)志物是一項急需解決的重要問題。micro RNA(mi RNA)是一種單鏈的、非編碼的小分子RNA,近些年來,主要在腫瘤及一些其他疾病中研究,即使在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中,也主要探究人或動物模型的腦組織及腦脊液中mi RNA的表達(dá),而mi RNA在血液中具有非凡的穩(wěn)定性,且會隨著機(jī)體生理病理情況的改變而發(fā)生變化,所以我們推測mi RNA在癲癇患者外周全血中可能存在差異表達(dá),那將在早期診斷癲癇中成為一種潛在的生物標(biāo)志物,從而具有重要應(yīng)用前景。方法:1、初篩:抽取兩組對象(病例組50例,對照組50例)的清晨空腹外周血2ml,應(yīng)用試劑盒PAX-gene Blood mi RNA kit(Qiagen)進(jìn)行mi RNA的提取,提取過程完全按照試劑盒的操作指南進(jìn)行。每個樣本留取RNA溶液20μL,并將每組分別混合,得到病例組和對照組混合RNA各1ml。將兩組混合RNA進(jìn)行Hiseq2000高通量測序技術(shù)分析病例組和對照組全血所有mi RNAs的表達(dá)譜。2、復(fù)篩:提取病例組50例、對照組50例的單個樣本的mi RNA,提取方法同初篩。并用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒One Step Prime Script mi RNA c DNA Synthesis Kit(Takara,日本)反轉(zhuǎn)錄為c DNA。對初篩篩選出的差異性表達(dá)mi RNAs進(jìn)行進(jìn)一步擴(kuò)增。3、驗證:對復(fù)篩中差異性mi RNA在大樣本(病例組100例、對照組100例)的單個樣本中進(jìn)行進(jìn)一步驗證。方法同復(fù)篩。4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果:1、運(yùn)用高通量測序進(jìn)行初篩:全血mi RNA高通量測序顯示共有200種mi RNA在兩組全血中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。選取符合標(biāo)準(zhǔn)的mi RNA進(jìn)行下一步復(fù)篩。2、運(yùn)用q RT-PCR進(jìn)行復(fù)篩:結(jié)果顯示,let-7f-5p,-130a-3p,-146a-5p,126-5p,novel-mi R-164的表達(dá)水平顯著上調(diào),mi R-194-5p,-181c-5p的表達(dá)水平顯著下調(diào)。3、運(yùn)用q RT-PCR進(jìn)行大樣本驗證:與對照組對比中,病例組全血let-7f-5p,-130a-3p,-146a-5p,126-5p的表達(dá)水平顯著上調(diào),與復(fù)篩階段的變化一致;mi R-181c-5p表達(dá)水平顯著下調(diào),與復(fù)篩階段變化一致。而mi R-194-5p和novel-mir-164在病例組和對照組間的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。因此排除mi R-194-5p和novel-mir-164作為癲癇的生物標(biāo)志物�？紤]臨床操作的簡便性和經(jīng)濟(jì)性,我們認(rèn)為mi R-126-5p的診斷價值最高,有望成為診斷癲癇的潛在生物標(biāo)志物。結(jié)論:本研究首次對癲癇患者外周全血全基因組mi RNAs譜進(jìn)行表達(dá)分析,并篩選出5種表達(dá)變化的mi RNAs:let-7f-5p,-130a-3p,-146a-5p,-126-5p和mi R-181c-5p,尤其是mi R-126-5p,以其較高的靈敏度和特異度,有望成為早期癲癇診斷的生物學(xué)標(biāo)志物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.1

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本文編號：1614230