本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點：TGF-β2　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 研究microRNA-200a在不同惡性程度膠質(zhì)瘤組織以及膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況,其表達(dá)情況是否與膠質(zhì)瘤的惡性生物學(xué)行為有關(guān),并探討其與TGF-β2的靶向關(guān)系。方法 采用Real-time PCR方法檢測79例不同惡性程度人膠質(zhì)瘤組織、15例正常腦組織(來自顱腦損傷術(shù)后患者)、人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中miR-200a的表達(dá)情況。通過對膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(U251、A172)抑制或者過表達(dá)miR-200a后,克隆形成實驗檢測細(xì)胞克隆形成能力,MTT法檢測細(xì)胞增殖活力,Transwell方法檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力。用Targetscan軟件預(yù)測,并用熒光素酶報告基因法驗證miR-200a與TGF-β2 mRNA 3’UTR互補結(jié)合關(guān)系,對膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(U251、A172)抑制或者過表達(dá)miR-200a后通過western blot及q RT-PCR方法檢測TGF-β2的變化情況。結(jié)果 qRT-PCR結(jié)果提示,相對于正常人腦組織,不同惡性程度的膠質(zhì)瘤組織中miR-200a的表達(dá)明顯下降,并且隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增高miR-200a的表達(dá)水平呈下降趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),與正常腦組織相比,膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中miR-200a的表達(dá)亦明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。通過瞬時轉(zhuǎn)染miR-200a模擬物(mimic)及抑制劑后(inhibitor),miR-200a的水平分別得到了明顯的提高和抑制,與陰性對照組相比,mimic組的增殖水平及侵襲能力受到抑制,而inhibitor組得到了顯著提升(P0.05)。Targetscan軟件預(yù)測,并采用熒光素酶報告基因證實了TGF-β2是miR-200a的靶基因。上述瞬時轉(zhuǎn)染后,進(jìn)一步研究提示TGF-β2的mRNA及蛋白水平出現(xiàn)明顯的下調(diào)和上調(diào)(P0.01)。結(jié)論 miR-200a在膠質(zhì)瘤中表達(dá)降低,并且與惡性程度呈負(fù)相關(guān),提示其可能與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系。miR-200a能抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖及侵襲能力,其作用機制可能與其靶基因TGF-β2有關(guān),可能為膠質(zhì)瘤分子靶向治療提供新思路。
[Abstract]:Objective to study the expression of microRNA-200a in glioma tissues and glioma cell lines with different degrees of malignancy, and whether the expression of microRNA-200a is related to the malignant biological behavior of gliomas. Methods Real-time PCR method was used to detect the expression of miR-200a in 79 cases of human glioma tissues with different degrees of malignancy and 15 cases of normal brain tissues (from postoperative patients with craniocerebral injury and human glioma cell lines). After inhibition or overexpression of miR-200a in glioma cell line U251 A172, Targetscan software was used to predict the invasion ability of glioma cells, and luciferase reporter gene method was used to verify the complementary binding relationship between miR-200a and TGF- 尾 2 mRNA 3UTR. The expression of TGF- 尾 2 was detected by western blot and qRT-PCR methods. The results of qRT-PCR showed that the expression of miR-200a in glioma tissues with different malignant degrees was significantly lower than that in normal human brain tissues. The expression of miR-200a decreased with the increase of malignant degree of glioma, and the difference was statistically significant (P 0.01). Compared with the normal brain tissue, the expression of miR-200a in glioma cell line also decreased significantly. The level of miR-200a mimicoid was significantly increased and inhibited by transient transfection of miR-200a mimicoid and inhibitor, and the proliferation and invasion ability of mimic group were inhibited as compared with the negative control group. However, the inhibitor group was predicted by P0.05N. Targetscan software, and the luciferase reporter gene was used to confirm that TGF- 尾 2 was the target gene of miR-200a. Further studies indicated that the mRNA and protein levels of TGF- 尾 2 were down-regulated and up-regulated (P 0.01). Conclusion the expression of miR-200a in gliomas is decreased and negatively correlated with the degree of malignancy. The results suggest that it may be closely related to the occurrence and development of glioma. MiR-200a can inhibit the proliferation and invasion of human glioma cells, and its mechanism may be related to its target gene TGF- 尾 2, which may provide a new idea for the molecular targeting therapy of glioma.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

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本文編號：1611068