本文關(guān)鍵詞： 線粒體 NDUFS3 Drp1 Marf　出處：《桂林醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過(guò)構(gòu)建Drp1(dynamin-related protein 1)、Marf(mitoechondrial assembly regulatory factor)轉(zhuǎn)基因果蠅,探討Drp1、Marf對(duì)果蠅間接飛行肌的影響,以及Drp1、Marf對(duì)線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)的調(diào)控及其功能影響的相關(guān)性研究。方法:使用MHC-Gal4啟動(dòng)子,利用經(jīng)典的GAL4/UAS系統(tǒng),使果蠅線粒體形態(tài)調(diào)控基因Drp1和Marf特異性表達(dá)于肌肉組織中。通過(guò)敲除Drp1和過(guò)表達(dá)Marf基因干預(yù)調(diào)控其在果蠅肌肉線粒體的表達(dá),改變線粒體的形態(tài),觀察果蠅翅膀的異常形態(tài)以及飛行能力,并通過(guò)透射電子顯微鏡觀察果蠅肌肉組織間接飛行肌肌肉的排列和線粒體的形態(tài)學(xué)是否改變。通過(guò)ATP試劑盒檢測(cè)線粒體ATP產(chǎn)能功能,并進(jìn)一步應(yīng)用Western Blot蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)線粒體氧化呼吸鏈復(fù)合物I亞單位NDUFS3蛋白量表達(dá)量,來(lái)探討Drp1、Marf對(duì)線粒體線粒體功能的影響。結(jié)果:相比于對(duì)照組,通過(guò)敲除Drp1和過(guò)表達(dá)Marf基因均使果蠅間接飛行肌發(fā)生障礙,表現(xiàn)為飛行能力變差,翅膀的異常率增高;電鏡可觀察到Drp1、Marf的轉(zhuǎn)基因果蠅胸部肌肉組織線粒體呈融合狀態(tài),形態(tài)結(jié)構(gòu)受損,果蠅間接飛行肌肉排列不規(guī)則,肌纖維存在斷裂。線粒體氧化呼吸產(chǎn)生的ATP含量減少以及Western Blot蛋白檢測(cè)線粒體氧化呼吸復(fù)合物I亞單位NDUFS3蛋白表達(dá)含量均明顯下調(diào)。結(jié)論:敲除Drp1和過(guò)表達(dá)Marf基因果蠅模型都可以改變線粒體的形態(tài)結(jié)構(gòu),影響果蠅的飛行功能;敲除Drp1和過(guò)表達(dá)Marf基因的果蠅模型都可以使線粒體功能下調(diào);推測(cè)無(wú)論是線粒體分裂受限還是融合過(guò)度,都會(huì)使線粒體功能發(fā)生障礙。
[Abstract]:Objective: to construct Drp1 (dynamin-related protein 1), Marf (mitoechondrial assembly regulatory factor) to investigate the effects of transgenic Drosophila, Drp1, and Marf on Drosophila indirect flight muscle and Drp1, study the related regulation and functional effects of Marf on mitochondrial morphology. Methods: using the MHC-Gal4 promoter using the classical GAL4/UAS system the Drosophila mitochondrial morphology, gene expression and regulation of Drp1 and Marf in muscle tissue specificity. The deletion of Drp1 and overexpression of Marf gene intervention to regulate the expression in Drosophila muscle mitochondria, mitochondrial morphology change, observe the abnormal shape of the Drosophila wings and flying ability, and observed by transmission electron microscopy morphology of Drosophila muscle tissue indirectly the arrangement of flight muscle and mitochondria are changed. By detecting the production function of mitochondrial ATP ATP kit, and further application of Western The expression of Blot protein was detected by Western blotting of mitochondrial respiratory chain complex I subunit NDUFS3 protein, to explore the Drp1, effects of Marf on mitochondrial function. Results: compared with control group, the Drp1 knockdown and overexpression of Marf gene showed that Drosophila indirect flight muscle disorders, performance of flight capacity variation the abnormal rate increased, wings; electron microscope can be observed Drp1, Marf transgenic Drosophila chest muscle tissue mitochondria showed fusion, morphological damage, Drosophila indirect flight muscles are irregular, muscle fiber fracture. ATP content of mitochondrial oxidative respiration and the decrease of the Western Blot protein detection of mitochondrial respiratory complexes were significantly the content of reduced expression of I subunit of NDUFS3 protein. Conclusion: the morphological structure of Drp1 knockout and overexpression of Marf gene in Drosophila model can change the effect of the fly Drosophila mitochondria. Row function; knockout of Drp1 and overexpression of Marf gene Drosophila model can reduce mitochondrial function. It is speculated whether mitochondrial splitting or overfusion will cause mitochondrial dysfunction.

【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R741

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本文編號(hào)：1540361