本文關鍵詞： 強直性肌營養(yǎng)不良1型 CTG重復序列 微小RNA 臨床研究　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：1.分析和總結強直性肌營養(yǎng)不良1型(myotonic dystrophy type 1, DM1)患者骨骼肌和多系統(tǒng)受累特點,提高對該病復雜臨床表現(xiàn)的認識水平。2.分析中國北方漢族人群正常DMPK等位基因CTG重復序列拷貝數(shù)的分布特點,豐富對中國漢族人DM1發(fā)病率的認識。3.驗證在DM1中存在異常表達的miRNA,探索其在DM1發(fā)病機制中的作用。方法：1.選取2009年3月一2015年12月在我院神經(jīng)內(nèi)科門診經(jīng)分子診斷確診為DM1的患者85例,回顧性分析其肌肉受累程度及多系統(tǒng)受累特點。2.采用PCR片段長度分析法對197名中國北方漢族人(62名DM1患者和135名健康體檢者)正常DMPK基因CTG重復片段多態(tài)性進行分析,并將該分布特點與中國其他地區(qū)人群和其他種族人群進行比較。3.選取12例DM1患者的活檢股四頭肌標本為實驗組,12例(年齡和性別匹配)骨科手術患者的正常股四頭肌標本為對照組,采用熒光定量PCR技術檢測兩組標本間miR-196a、miR-182、miR-451、miR-200c, miR-146a, miR-133a、miR-1, miR-206, CELF1, MBNL1, CELF2和MYF5的相對表達水平進行驗證；4.選擇熒光素酶實驗對miR-196a和miR-182與CELF2的調(diào)控關系進行驗證。結果：1.85例DM1患者(男52例,女33例)中47例有陽性家族史；首發(fā)癥狀以肢體無力最常見(60%)。肌強直、肌無力、肌萎縮的發(fā)生率分別為96.50%、92.90%、68.60%,主要以頭面諸肌、頸前肌、肢體遠端肌受累明顯。69例完成了MIRS分級,1級2例、2級7例、3級24例、4級33例、5級3例,患者MIRS分級和病程(r=0.352,P=0.003)及年齡(r=0.242,P=0.045)具有相關性。MIRS分級與起病年齡(r=0.036,P=0.771)之間無明顯相關性。MIRS分級≥4的患者與≤3的患者病程中位數(shù)(四分位數(shù)間距)分別為10.0(2.3,18.8)年和4.0(2.0,10.0),兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(Z=-2.570,P=0.010)；平均發(fā)病年齡分別為37.9士10.5歲和33.3±13.3歲,兩組間差異無統(tǒng)計學意義(t=-1.619,P=0.110)；73例完成了多系統(tǒng)受累的評估,其中60例存在多系統(tǒng)受累,病程中位數(shù)(四分位數(shù)間距)為7.0(2.3,11.0)年；13例不伴多系統(tǒng)受累,病程中位數(shù)(四分位數(shù)間距)為4.0(2.0,13.5)年,兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(Z=1.456,P=0.029)。2.62名DM1患者和135名無癥狀親屬中共檢出332個正常DMPK等位基因,所含CTG拷貝數(shù)從5到32不等。其中CTG拷貝數(shù)為5的頻率最高(24.40%),其次為12拷貝(22.90%),13拷貝(18.70%),11拷貝(17.80%)和14拷貝(5.10%),大等位基因(CTG≥19)的出現(xiàn)頻率為2.70%。3. miR-196a、miR-182、miR-146a、miR-200c在DM1中低表達；CELF2、MYF5在DM1中高表達；miR-1、miR-133a、miR-206、miR-451、CELF1和MBNL1在DM1中未發(fā)現(xiàn)差異表達。TargetScan提示CELF2可作為miR-182和miR-196a勺靶基因,熒光素酶實驗顯示miR-196a和miR-182可調(diào)控CELF2的表達。結論：1.典型的DM1為青中年隱襲起病,陽性家族史有助于診斷。肌強直以舌肌和大魚際最敏感,叩擊這兩個部位有助于不典型肌強直癥狀的檢出�；颊卟〕淘介L,MIRS分級越高,合并多系統(tǒng)損害的可能性越大。骨骼肌以外,白內(nèi)障發(fā)生率最高,對本病有一定的提示作用。2.正常DMPK基因CTG序列在中國北方人群中的分布特點與南方人群略有不同,DM1的流行病學特征需要進一步行多地區(qū)、多民族的大樣本研究加以明確。3. miR-196a、miR-182可與CELF2的3’UTR區(qū)結合,調(diào)控CELF2的表達,進而參與DMl的發(fā)病機制。
[Abstract]:Objective: to analyze and summarize the 1. myotonic dystrophy type 1 (myotonic dystrophy 1 type, DM1) in skeletal muscle of patients and characteristics of multi system involvement, improve the clinical features of the disease complex distributed cognition level.2. analysis in Han population in North Chinese normal DMPK allele CTG repeat copy number, rich expression to exist in DM1 Chinese Han people know.3. the incidence of DM1 was validated by miRNA, and explore its role in pathogenesis in DM1. Methods: 1. from March 2009 December 2015 in the outpatient department of Neurology in our hospital by the molecular diagnosis of 85 patients with DM1 diagnosed by PCR were retrospectively analyzed, the muscle involvement and fragment length the characteristics of multi system involvement.2. analysis 197 China North Han people of (62 DM1 patients and 135 healthy persons) analysis of normal DMPK gene CTG repeat polymorphism, and the distribution characteristics Compare.3. to select 12 cases of DM1 patients with biopsy of femoral head four muscle specimens as the experimental group and the population in other areas China and other ethnic groups, 12 patients (age and sex matched) of surgical patients in the Department of orthopedics of normal femoral head four muscle specimens as control group, using fluorescence quantitative PCR detection among two groups were miR-196a, miR-182. MiR-451, miR-200c, miR-146a, miR-133a, miR-1, miR-206, CELF1, MBNL1, the relative expression level of CELF2 and MYF5 verification; verification regulation between the 4. choice of luciferase experiment of miR-196a and miR-182 and CELF2. Results: 1.85 cases of DM1 patients (male 52 cases, female 33 cases) in 47 cases with positive family history the symptoms of limb weakness; the most common (60%). Myotonia, muscle weakness, muscle atrophy rates were 96.50%, 92.90%, 68.60%, mainly in the facial muscles, anterior cervical muscle, distal limb muscle affected obvious.69 patients completed the MIRS grade, 1 grade 2 In 2 cases, 7 cases of grade 3, grade 24 cases, 33 cases of grade 4, grade 5 in 3 cases, patients with MIRS grade and duration (r=0.352, P=0.003) and age (r=0.242, P=0.045) associated with.MIRS grade and age of onset (r=0.036, P=0.771) than in patients with no obvious correlation existed between.MIRS grade of more than 4 3 the patients with median (four percentile interval) were 10 (2.3,18.8) and 4 (2.0,10.0), the difference was statistically significant between the two groups (Z=-2.570, P=0.010); the average age was 37.9 + 10.5 and 33.3 + 13.3 years, there was no significant difference between the two groups (t=-1.619, P=0.110); 73 patients completed the assessment of multi system involvement, including 60 cases with multi system involvement, the course of the median (four percentile interval) was 7 (2.3,11.0) years; 13 cases with multi system involvement, the course of the median (four percentile interval) for 4 years (2.0,13.5), the difference was statistically significant between the two groups (Z=1.456, P=0.029.2.62) DM1 patients and 135 asymptomatic relatives were detected in 332 normal alleles of DMPK, containing the CTG copy number from 5 to 32 dollars. The copy number of CTG is the highest frequency of 5 (24.40%), followed by 12 copies (22.90%), 13 copies, 11 copies (18.70%) and 14 (17.80%) copy (5.10%), large allele (CTG = 19) the frequency of 2.70%.3. miR-196a, miR-182, miR-146a, miR-200c, CELF2, DM1 in low expression; high expression of MYF5 in DM1; miR-1, miR-133a, miR-206, miR-451, CELF1 and MBNL1 were found in the differential expression of.TargetScan suggests that the CELF2 and miR-196a miR-182 as the the target gene in DM1, luciferase experiments showed that miR-196a and miR-182 can regulate the expression of CELF2. Conclusion: 1. typical DM1 for young and middle-aged insidious onset, positive family Shi Youzhu in diagnosis. In the thenar muscle and tongue myotonia is most sensitive, tapping the two parts contribute to the atypical symptoms of myotonia The patients were detected. The longer the duration, the higher the grade of MIRS, with the possibility of multi system damage is greater. The skeletal muscle, the highest incidence of cataract, this disease has suggested a role for.2. in normal DMPK gene CTG sequence in the northern Chinese population in the southern population distribution and a slightly different epidemiological characteristics of DM1 the need for further large sample multi area, multi ethnic study to define.3. miR-196a, miR-182 can be combined with the 3 UTR region and CELF2, the regulation of the expression of CELF2 and pathogenesis in DMl.

【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R746.2

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本文編號：1523820