發(fā)布時(shí)間：2018-02-02 07:19

  本文關(guān)鍵詞： 癲癇持續(xù)狀態(tài) TNF-α IL-1β GABAAR NR2B GFAP IBA1 NGB 塞來(lái)昔布 八臂迷宮實(shí)驗(yàn) 認(rèn)知功能　出處：《蘭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探討癲癇發(fā)作與炎癥反應(yīng)的關(guān)系及癲癇發(fā)作對(duì)大鼠認(rèn)知功能的影響。方法健康成年雄性SD大鼠110只,按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為癲癇模型組(EP,n=80)、塞來(lái)昔布預(yù)處理組(EP-C,n=20)和對(duì)照組(n=10),癲癇模型組再依據(jù)觀察時(shí)間分為:0h、1h、3h、12h、24h、10d及30d。應(yīng)用鋰-匹羅卡品(Lithium-pilocarpine,Li-Pilo)127(mg/kg)/20(mg/kg)建立大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus,SE)模型,觀察各組大鼠致癇期間行為學(xué)變化,視頻監(jiān)測(cè)并記錄各組大鼠急慢性期發(fā)作特點(diǎn),包括癇性發(fā)作始發(fā)時(shí)間、自發(fā)性癇性發(fā)作頻次及持續(xù)時(shí)間;采用尼氏(Nissl)染色檢測(cè)海馬各區(qū)神經(jīng)元損傷情況;酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)海馬組織TNF-α、IL-1β蛋白含量;SABC免疫組化法檢測(cè)海馬各區(qū)TNF-α、IL-1β、GABAAR、NMDAR2B、GFAP、IBA1及NGB陽(yáng)性表達(dá)水平;采用Timm染色檢測(cè)海馬CA3區(qū)和DG區(qū)苔蘚纖維出芽(mossy fiber sprouting,MFS)情況。另外,隨機(jī)選取成年健康雄性SD大鼠30只,采用RMT-100大鼠八臂迷宮于SE前及SE后第5d、10d、15d、25d及35d分別進(jìn)行迷宮實(shí)驗(yàn),觀察并記錄其WME、RME、總測(cè)試時(shí)間、總?cè)氡鄞螖?shù)及平均探究時(shí)間。結(jié)果1.腹腔注射Pilo后5.72±2.43min大鼠出現(xiàn)外周膽堿能反應(yīng),8±2.50min出現(xiàn)單側(cè)前肢陣攣及雙前肢交替陣攣等癥狀,25.76±8.35min出現(xiàn)癲癇Ⅳ級(jí)及以上發(fā)作癥狀,如雙前肢同時(shí)持續(xù)陣攣、后肢站立、傾倒、失平衡等。正常對(duì)照組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中始終無(wú)任何癇性發(fā)作行為表現(xiàn)。2.SE后,海馬組織各區(qū)神經(jīng)元損傷壞死嚴(yán)重,隨著發(fā)作時(shí)程進(jìn)展,CA1、CA3區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)呈近直線下降趨勢(shì),其中(12h、24h、10d、30d)CA1區(qū)、(0h、12h、24h、10d、30d)CA3區(qū)和(12h、24h、10d、30d)DG區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05~0.001)。3.SE后,海馬組織IL-1β、TNF-α蛋白含量顯著升高,前者于24h達(dá)頂峰后輕度下降,而后者于1h達(dá)頂峰3h降到最低水平后又呈回彈升高趨勢(shì),但均持續(xù)高于對(duì)照組,其中,(3h、12h、24h、10d)IL-1β和1h TNF-α蛋白含量均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。另外,免疫組化證實(shí),海馬各區(qū)IL-1β和TNF-α表達(dá)水平也均上調(diào),其中IL-1β在海馬各區(qū)均于12h達(dá)頂峰后逐漸降低,但持續(xù)高于對(duì)照組,(12h、24h)CA1、(12h、24h)CA3和12h DG區(qū)IL-1β表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05~0.001);而TNF-α在海馬CA1、CA3、DG區(qū)分別于SE后3h、1h、12h達(dá)頂峰后輕度下降,但均持續(xù)高于對(duì)照組,其中3h CA1、(1h、3h、24h、10d)CA3和(0h、1h、3h、12h)DG區(qū)TNF-α表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05~0.001)。4.SE后,海馬各區(qū)NR2B和GABAAR表達(dá)水平均上調(diào),前者在CA1、CA3和DG區(qū)分別于SE后24h、10d和12h達(dá)頂峰后下降,但持續(xù)高于對(duì)照組,其中(12h、24h、30d)CA1區(qū)、(10d、30d)CA3區(qū)和12h DG區(qū)表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05~0.001);而后者在CA1、CA3和DG區(qū)分別逐漸升高到SE后24h、24h、12h后呈輕度下降趨勢(shì),均于10d降到最低水平后出現(xiàn)回彈升高趨勢(shì),其中(24h、10d、30d)CA1區(qū)、30d CA3區(qū)和30d DG區(qū)表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05~0.001)。5.SE后海馬各區(qū)GFAP和IBA1表達(dá)水平均出現(xiàn)不同程度上調(diào),其中GFAP在海馬CA1、CA3和DG區(qū)表達(dá)水平分別于10d、12h和24h達(dá)頂峰后輕度下降,但持續(xù)高于對(duì)照組,(3h、12h、24h、10d)CA1區(qū)、(12h、24h、10d)CA3區(qū)和(12h、24h)DG區(qū)GFAP表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05~0.001);然而,CA1、CA3區(qū)IBA1表達(dá)水平持續(xù)升高,均于30d達(dá)頂峰,而DG區(qū)于24h達(dá)頂峰后輕度下降,但仍持續(xù)高于對(duì)照組,(10d、30d)CA1區(qū)、(24h、10d、30d)CA3區(qū)和(12h、24h)DG區(qū)IBA1表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05~0.001)。6.EP-C組大鼠癇性發(fā)作達(dá)Ⅳ級(jí)時(shí)間及首次出現(xiàn)SRS時(shí)間均較EP組延長(zhǎng),且SRS頻次也較EP組明顯減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。7.EP-C組大鼠海馬各區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)均較EP組增多,且兩組海馬CA1、CA3區(qū)和EP組DG區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)均較對(duì)照組顯著減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。8.EP組海馬CA3區(qū)Timm顆粒較EP-C組明顯,且兩組海馬CA3區(qū)、DG區(qū)Timm顆粒均較對(duì)照組明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。9.SE后海馬CA1、CA3、DG區(qū)NGB表達(dá)水平均上調(diào),CA1、DG區(qū)NGB表達(dá)于24h達(dá)頂峰后輕度下降,但持續(xù)高于對(duì)照組,而CA3區(qū)NGB表達(dá)呈持續(xù)升高趨勢(shì)。其中(24h、10d、30d)CA1區(qū)、(24h、10d、30d)CA3區(qū)和(12h、24h、10d、30d)DG區(qū)NGB表達(dá)水平均較對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05-0.001)。10.SE后,隨著癲癇發(fā)作時(shí)程進(jìn)展,WME和RME次數(shù)均呈逐漸遞增趨勢(shì),其中(第15d、25d、35d)WME次數(shù)、(第10d、15d、25d、35d)RME次數(shù)和(第10d、15d、25d、35d)總?cè)氡鄞螖?shù)均較SE前增多(p0.05~0.001)。SE后各時(shí)間點(diǎn)迷宮總測(cè)試時(shí)間和第5d迷宮實(shí)驗(yàn)平均探究時(shí)間均較SE前延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。11.RME次數(shù)分別與海馬CA1、CA3區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.579p=0.000;r=-0.454 p=0.002),WME次數(shù)與CA1、CA3區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)也呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.470 p=0.001;r=-0.507 p=0.000)。結(jié)論1.炎癥反應(yīng)與癲癇發(fā)作之間存在復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系,抗炎治療可明顯延遲癲癇充分點(diǎn)燃時(shí)間及減少自發(fā)性癇性發(fā)作次數(shù),提示抗炎治療可能具有抗癲癇作用,靶向某些炎癥反應(yīng)相關(guān)通路可能為研發(fā)新型抗癲癇藥物提供參考依據(jù);2.癲癇發(fā)作嚴(yán)重影響大鼠認(rèn)知功能,隨著發(fā)作時(shí)程進(jìn)展,認(rèn)知損害逐漸加重,且認(rèn)知障礙嚴(yán)重程度與海馬神經(jīng)元存活數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān),提示癲癇相關(guān)性認(rèn)知障礙可能與癲癇發(fā)作所致海馬組織本身病理改變相關(guān);另外,癲癇發(fā)作所致腦組織相對(duì)缺氧改變,可能也是癲癇相關(guān)性認(rèn)知功能障礙的一個(gè)原因。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of epilepsy on cognitive function in rats with inflammation and epilepsy. Methods 110 adult male SD rats were randomly divided into the epilepsy model group (EP, n=80), celecoxib pretreatment group (EP-C, n=20) and control group (n=10) according to the observation of epileptic model group, time is divided into: 0h, 1H, 3h, 12h, 24h, 10d and 30D. using lithium pilocarpine (Lithium-pilocarpine, Li-Pilo) 127 (mg/kg) /20 (mg/kg) in rats with status epilepticus (Status epilepticus, SE) model, observe the epileptic rats during the behavioral changes, video monitoring and recording of rats in acute and chronic onset seizures, including the departure time, spontaneous seizure frequency and duration; (Nissl) by Nissl staining in hippocampus neuron injury; enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) detection in the hippocampus of TNF- alpha, IL-1 beta. The content of SABC; immunohistochemistry in hippocampus of TNF- alpha, IL-1 beta, GABAAR, NMDAR2B, GFAP, IBA1 and NGB positive expression; Timm staining was used to detect the hippocampal CA3 and DG regions of mossy fiber sprouting (mossy fiber sprouting, MFS). In addition, randomly selected adult healthy male SD rats 30, the RMT-100 rats eight arm maze at SE and SE after 5D, 10d, 15d, 25d and 35d respectively maze test, observe and record the WME, RME, the total test time, the total number and the average time of inquiry into the arm. Results 1. after intraperitoneal injection of Pilo 5.72 + 2.43min rats the peripheral cholinergic responses, 8 + 2.50min unilateral forelimb clonus and double forelimb clonus alternating symptoms, 25.76 + 8.35min grade and above epileptic symptoms, such as double and sustained forelimb clonus, hind stand, dumping, loss of balance. The normal control group in the whole experimental process has no epileptic 鍙戜綔琛屼負(fù)琛ㄧ幇.2.SE鍚，

本文編號(hào)：1483962