本文關(guān)鍵詞： 膠質(zhì)瘤 IDH1突變 Ki-67 微血管密度（MVD）　出處：《石河子大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：檢測(cè)人膠質(zhì)瘤標(biāo)本的IDH1變異情況，同時(shí)建立穩(wěn)定的人膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型，不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)對(duì)腫瘤大小的觀察、微血管測(cè)定、抗原Ki-67檢測(cè)來(lái)初步探討膠質(zhì)瘤IDH1基因變異對(duì)膠質(zhì)瘤大小及腫瘤細(xì)胞增殖的影響，為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 方法：收集新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)外科經(jīng)外科手術(shù)切除并病理報(bào)告確診膠質(zhì)瘤的腫瘤標(biāo)本，PCR方法檢測(cè)IDH1基因變異及免疫組化法檢測(cè)微血管測(cè)定（MVD）、抗原Ki-67表達(dá)情況，變異及未變異的膠質(zhì)瘤標(biāo)本細(xì)胞培養(yǎng)傳代，采用立體定向儀，將自行培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種于成年雄性Wistar大鼠腦內(nèi)的方法，制作鼠人腦膠質(zhì)瘤模型。采用隨機(jī)數(shù)表將120只雄性wistar大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組60只、假手術(shù)組30只、空白組30只，手術(shù)組又分為兩組各30只，分別移植變異型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞和野生型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，假手術(shù)組移植等量生理鹽水，空白對(duì)照組給予常規(guī)飼養(yǎng)。小鼠均正常飼養(yǎng)，造模后的1W、2W、3W行影像學(xué)檢查并記錄腫瘤大小，3周后將各組大鼠處死取腦，行常規(guī)H E染色、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色、微血管測(cè)定（MVD）及抗原Ki-67檢測(cè)。 結(jié)果：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明變異型膠質(zhì)瘤組腫瘤大小與未變異組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，分別為197.55±18.84和205.51±20.84，且生長(zhǎng)速度也無(wú)差異；IDH1基因變異型膠質(zhì)瘤組Ki-67蛋白表達(dá)較未變異組膠質(zhì)瘤降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），IDH1基因變異型膠質(zhì)瘤血管密度計(jì)數(shù)（MVD）較未變異組減低（P0.05），表明IDH1基因變異可降低腫瘤的增殖活性。2.人體標(biāo)本實(shí)驗(yàn)表明IDH1基因變異型膠質(zhì)瘤Ki-67蛋白表達(dá)較野生型膠質(zhì)瘤降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.134，，P=0.039），IDH1變異型與野生型膠質(zhì)瘤Ki-67標(biāo)記指數(shù)分別為（14.44%±8.23%）和（21.19%±11.49%）；IDH1基因變異型膠質(zhì)瘤血管密度計(jì)數(shù)（MVD）較野生型減低（t=2.328，P=0.025），其血管密度計(jì)數(shù)分別為31.11±13.47和40.54±12.11；低級(jí)別膠質(zhì)瘤Ki-67及微血管密度（MVD）表達(dá)較高級(jí)別膠質(zhì)瘤低（t=9.138，P0.001；t=-8.369，P0.001），低級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHOI級(jí)、II級(jí)）和高級(jí)別膠質(zhì)瘤（WHO III級(jí)、IV級(jí)）Ki-67表達(dá)分別是8.36%±2.84%和25.55%±7.53%，其血管密度計(jì)數(shù)分別為23.94±8.03和45.54±8.19，兩者表達(dá)隨膠質(zhì)瘤級(jí)別增高而增高，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與人體腫瘤標(biāo)本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果基本一致。 結(jié)論：膠質(zhì)瘤IDH1基因變異對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及大小無(wú)明顯影響，但其對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖有影響。因?yàn)镮DH1基因變異影響腫瘤的能量代謝，而能量代謝受阻降低細(xì)胞的增殖活性，使大量細(xì)胞處于休眠期，導(dǎo)致新生血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂緩慢，新生腫瘤血管數(shù)量減低，惡變和轉(zhuǎn)移受到抑制，為IDH1基因變異延長(zhǎng)患者的生存期的機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to detect the variation of IDH1 in human glioma specimens and to establish a stable animal model of human glioma. The effect of IDH1 gene variation on glioma size and tumor cell proliferation was preliminarily studied by Ki-67 assay, which laid a solid foundation for further clinical application. Methods: the specimens of glioma were collected from neurosurgery department of Xinjiang Uygur Autonomous region people's Hospital after surgical resection and pathological report. PCR method was used to detect the variation of IDH1 gene and immunohistochemical method was used to detect the expression of Ki-67 and the expression of Ki-67. The self-cultured glioma cells were inoculated into the brain of adult male Wistar rats by stereotactic orientation instrument. Using random number table, 120 male wistar rats were randomly divided into operation group (n = 60), sham operation group (n = 30) and blank group (n = 30). The operation group was divided into two groups: 30 rats in each group were transplanted with variant human glioma cells and wild-type glioma cells respectively, and the sham-operation group were transplanted with the same amount of normal saline. The rats in the blank control group were given routine feeding. The mice were fed normally. The rats in each group were killed and brain samples were taken by routine H _ E staining after imaging examination and recording of tumor size 3 weeks after the model was made. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) immunofluorescence staining, microvessel determination and antigen Ki-67 detection. Results 1. There was no significant difference in tumor size between variant glioma group and non-variant group (197.55 鹵18.84 and 205.51 鹵20.84, respectively). There was no difference in growth rate. The expression of Ki-67 protein in IDH1 gene variant gliomas was significantly lower than that in non-variant gliomas (P 0.05). The vascular density count of IDH1 gene variant glioma was significantly lower than that of no mutation group (P 0.05). The results showed that IDH1 gene mutation could reduce the proliferative activity of tumor. 2. The human specimens showed that the Ki-67 protein expression of IDH1 gene variant glioma was lower than that of wild-type glioma. The difference was statistically significant (2.134P 0.039). The Ki-67 labeling index of IDH1 variant gliomas and wild-type gliomas were 14.44% 鹵8.23% and 21.19% 鹵11.49%, respectively. The vascular density count of IDH1 gene variant glioma was lower than that of wild-type glioma. The blood vessel density counts were 31.11 鹵13.47 and 40.54 鹵12.11, respectively. The expression of Ki-67 and MVD in low grade gliomas was higher than that in high grade gliomas. TV-8.369 (P0.001), low grade glioma (WHOI class II) and high grade glioma (III grade). The expression of Ki-67 in grade IV was 8.36% 鹵2.84% and 25.55% 鹵7.53%, respectively. The blood vessel density counts were 23.94 鹵8.03 and 45.54 鹵8.19, respectively. The results of animal experiments and human tumor specimens were basically consistent. Conclusion: IDH1 gene mutation has no significant effect on tumor growth and size, but it has an effect on tumor cell proliferation, because IDH1 gene mutation affects tumor energy metabolism. But the energy metabolism block reduces the cell proliferation activity, causes the large number of cells to be in the dormant phase, causes the neovascularization endothelial cell division slowly, the neovascularization blood vessel quantity reduces, the malignant transformation and the metastasis are inhibited. To provide a new theoretical basis for prolonging the survival of patients with IDH1 gene mutation.
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R739.4

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本文編號(hào)：1444367