本文關(guān)鍵詞：人工合成多肽降解α-突觸核蛋白對帕金森病的治療作用　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：隨著研究深入,越來越多的證據(jù)表明：α-突觸核蛋白纖維性聚集體的產(chǎn)生是帕金森病發(fā)病的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)且大量的科學(xué)研究結(jié)果證實降低α-突觸核蛋白表達水平可有效的、特異性的治療帕金森病,然而當(dāng)其轉(zhuǎn)為臨床應(yīng)用時卻出現(xiàn)了很大阻礙。本論文通過人工合成多肽Tat-βsyn-degron,觀察其是否可通過蛋白酶體系統(tǒng)直接降解內(nèi)源性α-突觸核蛋白；并進一步研究該多肽是否對帕金森病具有保護作用及作用機制,為臨床帕金森病的治療提供新的理論基礎(chǔ)和治療方案。方法：1.多肽的構(gòu)建和驗證：利用p-突觸核蛋白的第36-45個氨基酸可以高效特異地與α-突觸核蛋白結(jié)合的特點,及近來研發(fā)出的可通過蛋白酶體途徑快速且可逆的降解內(nèi)源性α-突觸核蛋白的特性,合成實驗肽Tat-βsyn-degron和相應(yīng)的對照肽Tat-βsyn。原代培養(yǎng)的大鼠皮層神經(jīng)元給予不同濃度(5μM～50μM)的實驗肽(Tat-βsyn-degron peptide)和對照肽fat-βsyn peptide (50μM)處理24hrs,用免疫印跡的方法檢測α-突觸核蛋白表達的變化；應(yīng)用蛋白酶抑制劑MG132 (10μM)處理大鼠皮層神經(jīng)元24hrs,以探討人工合成的實驗肽對α-突觸核蛋白的作用及其機制；2.用1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+) (20μM)處理中腦腹側(cè)神經(jīng)元48hrs,將其作為研究多巴胺能神經(jīng)元的神經(jīng)元載體。用實驗肽(Tat-βsyn-degron peptide) (25μM)和對照肽Tat-βsyn peptide (25μM)處理48hrs,后通過免疫印跡實驗方法檢測α-突觸核蛋白和酪氨酸羥化酶(TH)的表達變化；3.構(gòu)建帕金森病動物模型,將C57BL/6(20-25g)小鼠隨機分為四組：Con組(Saline)、慢性MPTP組(MPTP),慢性MPTP加實驗肽組(MPTP +Tat-βsyn-degron)、慢性MPTP加對照肽組(MPTP+Tat-βsyn)。每天給予腹腔注射帕金森毒性藥物1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP),連續(xù)5天,而對照組給予等量的生理鹽水。實驗肽(Tat-βsyn-degron peptide) (6μmol/kg)和對照肽(Tat-psyn peptide) (6μmol/kg)每12hr給藥一次,與MPTP同日給藥,且在MPTP給藥完成后繼續(xù)給藥7天。所有實驗鼠給藥完成后通過：1)平衡疲勞轉(zhuǎn)動棒行為學(xué)測試,檢測多肽對帕金森病樣行為的改善作用；2)免疫印跡實驗檢測紋狀體內(nèi)α-突觸核蛋白以及酪氨酸羥化酶(TH)表達的變化；3)免疫組化實驗檢測紋狀體和黑質(zhì)區(qū)酪氨酸羥化酶(TH)的表達變化。結(jié)果：1.人工合成的多肽可以通過蛋白酶體途徑有效的降解內(nèi)源性α-突觸核蛋白,且具有劑量依賴性和時間依賴性；2.體外實驗研究發(fā)現(xiàn),實驗肽可以有效降解內(nèi)源性α-突觸核蛋白的水平,對MPP+所致多巴胺能神經(jīng)元毒性損傷具有保護作用；然而對照肽雖在降解α-突觸核蛋白方面未能發(fā)揮效能,但是卻表現(xiàn)出了微弱的神經(jīng)元保護作用,我們推測這一神經(jīng)元保護效能可能是由于對照肽抑制了α-突觸核蛋白的聚合。3.體內(nèi)實驗研究表明：1)實驗肽明顯降解了紋狀體內(nèi)的α-突觸核蛋白,而對照肽并未發(fā)揮此作用；2)實驗肽對MPTP所誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元的損傷具有保護作用；3)實驗肽可以有效改善MPTP所致的帕金森病模型鼠的行為學(xué)缺陷。結(jié)論：1.人工合成的多肽可以穿透細胞質(zhì)膜,通過蛋白酶體系統(tǒng)有效的、高度特異性的降解內(nèi)源性α-突觸核蛋白；2.人工合成的多肽可以在體內(nèi)及體外對帕金森毒素所致多巴胺能神經(jīng)元的損傷起到保護作用。
[Abstract]:AIM : To study the effect and mechanism of 偽 - synuclein on Parkinson ' s disease . Conclusion : 1 . The synthetic peptide can effectively degrade the level of 偽 - synuclein in striatum , and it has protective effect on the damage of dopaminergic neurons induced by MPTP .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5

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本文編號：1437803