本文關(guān)鍵詞：Nox家族和ROS在大鼠腦缺血再灌注損傷模型中的動態(tài)表達(dá)及特異性Nox-2和Nox-4抑制劑對其的干預(yù)研究　出處：《蘇州大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分Nox家族和ROS在大鼠腦缺血再灌注損傷模型中的動態(tài)表達(dá)情況目的:檢測NOX家族(Nox1、Nox2、Nox3、Nox4、Nox5、Duox1和Duox2)以及ROS在短暫性大腦中動脈閉塞(MCAO)模型大鼠半影區(qū)以及對側(cè)相應(yīng)區(qū)域的腦組織中經(jīng)閉塞2h后再灌注,不同時間點(diǎn)的表達(dá)情況。方法:任選56只成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為以下兩個實驗組:假手術(shù)組(Sham,1組)和MCAO組(7組)。利用線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO)模型。栓塞2 h后,去除魚線,制備再灌注模型(MCAO/R),于再灌注0h、3h、6h、12h、24h以及48h時分別取出大鼠額顳底皮層腦組織做標(biāo)本,半影區(qū)(Ischemic)以及對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)的腦組織樣本中NOX家族成員(Nox1、Nox2、Nox3、Nox4、Nox5、Duox1和Duox2)m RNA、蛋白表達(dá)情況分別采用半定量PCR法、Western Blot方法以及免疫熒光染色技術(shù)檢測其表達(dá)水平的變化;同時采用熒光分光度計檢測DCFH-DA熒光探針熒光強(qiáng)度法檢測其腦組織中ROS在再灌注不同時間點(diǎn)的表達(dá)情況。結(jié)果:1、在MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注后,其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中Duox1、Nox2以及Nox4-m RNA的表達(dá)較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)中相應(yīng)蛋白-m RNA的表達(dá)顯著上調(diào);而Duox2、Nox1以及Nox3-m RNA的表達(dá)在半影區(qū)(Ischemic)和對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)的腦組織中均無明顯改變。2、在MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注后,其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中Duox1、Nox2以及Nox4-蛋白的表達(dá)較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)中相應(yīng)蛋白-蛋白的表達(dá)顯著上調(diào);而Duox2、Nox1以及Nox3-蛋白的表達(dá)在半影區(qū)(Ischemic)和對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)的腦組織中均無明顯改變。3、免疫熒光染色結(jié)果顯示,MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注3h時時,Nox2和Nox4在其半影區(qū)腦組織神經(jīng)元中的表達(dá)較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域腦組織神經(jīng)元中的表達(dá)顯著上調(diào)。4、免疫熒光染色結(jié)果顯示,MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注3h時時,Nox2和Nox4在其半影區(qū)腦組織星行膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域腦組織星行膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)亦顯著上調(diào)。5、在MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注后,其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中ROS的表達(dá)水平較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)腦組織中ROS的表達(dá)水平顯著上調(diào)。結(jié)論:1、MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注時,Nox家族成員Duox2、Nox2以及Nox4在其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中的表達(dá)較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)腦組織表達(dá)顯著上調(diào)。2、MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注3h時時,Nox2和Nox4在其半影區(qū)腦組織神經(jīng)元和星行膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域腦組織神經(jīng)元和星行膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)顯著上調(diào)。3、MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注時,其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中ROS的表達(dá)水平較對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)腦組織中ROS的表達(dá)水平顯著上調(diào)。第二部分特異性Nox-2和Nox-4抑制劑對大鼠腦缺血再灌注損傷模型的干預(yù)研究目的:探索特異性Nox-2和Nox-4抑制劑對大鼠腦缺血再灌注損傷模型的干預(yù)作用。方法:任選32只成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為以下四個實驗組:假手術(shù)組(Sham,1組)和MCAO組(3組)。利用線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO)模型,其中兩組分別以特異性Nox-2抑制劑(gp91ds-tat)或特異性Nox-4抑制劑(GKT37831)預(yù)處理,同時以未經(jīng)抑制劑處理的MCAO模型作為對照組。栓塞2 h后,去除魚線,制備再灌注模型(MCAO/R),于再灌注24h時取出大鼠額顳底皮層腦組織做標(biāo)本,其半影區(qū)(Ischemic)以及對側(cè)相應(yīng)區(qū)域(Contralateral)的腦組織樣本,①ROS的表達(dá)情況:采用熒光分光度計檢測DCFH-DA熒光探針熒光強(qiáng)度法檢測;②腦組織損傷體積比例大小:采用體積比例法進(jìn)行比較;③細(xì)胞凋亡情況:采用TUNEL免疫熒光染色法進(jìn)行檢測;④;⑤白蛋白(Albumin)蛋白表達(dá)水平:采用Western Blot方法進(jìn)行檢測。結(jié)果:在MCAO模型大鼠經(jīng)閉塞2h后再灌注24h時,經(jīng)Nox2抑制劑(gp91ds-tat)或Nox4抑制劑(GKT37831)處理的MCAO模型大鼠其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中:1、ROS的表達(dá)水平較未經(jīng)Nox2抑制劑(gp91ds-tat)或Nox4抑制劑(GKT37831)處理的MCAO模型大鼠其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中ROS的表達(dá)顯著下調(diào);2、腦組織損傷體積比例較未經(jīng)Nox2抑制劑(gp91ds-tat)或Nox4抑制劑(GKT37831)處理的MCAO模型大鼠其半影區(qū)(Ischemic)腦組織損傷體積比例顯著降低;3、腦組織細(xì)胞凋亡比例較未經(jīng)Nox2抑制劑(gp91ds-tat)或Nox4抑制劑(GKT37831)處理的MCAO模型大鼠其半影區(qū)(Ischemic)腦組織細(xì)胞凋亡比例顯著降低;5、腦組織白蛋白(Albumin)蛋白表達(dá)水平較未經(jīng)Nox2抑制劑(gp91ds-tat)或Nox4抑制劑(GKT37831)處理的MCAO模型大鼠其半影區(qū)(Ischemic)腦組織白蛋白(Albumin)蛋白表達(dá)水平顯著降低。結(jié)論:Nox2抑制劑(gp91ds-tat)和Nox4抑制劑(GKT37831)可以顯著抑制MCAO模型大鼠缺血再灌注時其半影區(qū)(Ischemic)腦組織中ROS的表達(dá)水平、腦組織損傷體積比例、腦組織細(xì)胞凋亡比例以及腦組織白蛋白(Albumin)蛋白的上調(diào),進(jìn)而起到腦保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1326668