本文關(guān)鍵詞：氯喹抑制自噬對海馬神經(jīng)元（HT22細胞）缺氧—復(fù)氧損傷的影響　出處：《南華大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:本研究模擬腦缺血-再灌注損傷,復(fù)制海馬神經(jīng)元(HT22細胞)缺氧-復(fù)氧損傷模型以觀察缺氧-復(fù)氧對海馬神經(jīng)元自噬的影響,探討自噬變化在海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷過程中的可能作用。方法:1.根據(jù)文獻自制密閉缺氧裝置,待HT22海馬神經(jīng)元融合度達80%后,放入缺氧裝置內(nèi),通入95%N2+5%CO2混合氣體造成細胞缺氧。實驗分三組,以相應(yīng)時間的正常培養(yǎng)為對照,分別觀察缺氧1h、3h和6h對HT22細胞自噬和功能的影響。檢測指標包括,Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的變化以及P62的表達水平,MTT比色法檢測細胞存活率,乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒比色法檢測HT22細胞的功能。2.缺氧1h后恢復(fù)氧供應(yīng)以復(fù)制缺氧-復(fù)氧損傷模型。實驗分三組:以相應(yīng)時間的正常培養(yǎng)和缺氧培養(yǎng)為對照,Western blot觀察復(fù)氧1h、3h、6h對HT22細胞自噬的影響。3.以缺氧1h復(fù)氧1h為缺氧-復(fù)氧損傷模型觀察自噬抑制劑氯喹對海馬神經(jīng)元(HT22細胞)功能的影響。實驗分為四組:⑴對照組⑵氯喹組⑶缺氧-復(fù)氧組⑷缺氧-復(fù)氧+氯喹組。檢測指標包括,Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的變化以及P62的表達水平,乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒比色法檢測HT22細胞的功能。結(jié)果:1.HT22細胞缺氧1h、3h、6h時,各組自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值表達均增高,P62蛋白的表達均減弱;細胞的存活率均下降,LDH釋放量均增加;自噬程度以缺氧1h組最為突出。2.HT22細胞復(fù)氧1h、3h、6h時,與相應(yīng)時間的正常培養(yǎng)和缺氧培養(yǎng)相比各組自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值表達均增高,P62蛋白的表達均減弱,以復(fù)氧1h自噬程度最為突出。3.氯喹抑制HT22細胞缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的自噬,自噬相關(guān)蛋白Beclin-1表達減弱、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值以及P62蛋白的表達增高,細胞損傷減輕。結(jié)論:1.缺氧誘導(dǎo)HT22細胞自噬,引起細胞損傷。2.缺氧HT22細胞復(fù)氧后誘導(dǎo)自噬更加顯著。3.氯喹抑制自噬可減輕缺氧-復(fù)氧后HT22細胞的損傷,提示減弱自噬可能具有保護缺血再灌注細胞的功效。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R743

【參考文獻】

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本文編號：1313562