本文關(guān)鍵詞：枸櫞酸咖啡因?qū)π律笫笕毖跞毖阅X損傷保護(hù)作用的研究　出處：《鄭州大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：新生兒缺氧缺血性腦損傷(Hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)是指各種圍生期高危因素引起腦組織不同程度缺氧、血流減少甚至中斷,導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷,是新生兒死亡及遺留腦性癱瘓、癲癇、智力障礙、行為缺陷等神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的重要原因,因此HIBD的早期干預(yù)成為眾多學(xué)者研究的重點(diǎn)。枸櫞酸咖啡因(caffeine citrate, CC)屬于甲基黃嘌呤類(lèi)藥物,為非選擇性腺苷受體(adenosine receptors, AR)拮抗劑,可透過(guò)血腦屏障,通過(guò)拮抗腺苷受體發(fā)揮生物學(xué)作用,臨床上廣泛用于治療早產(chǎn)兒呼吸暫停(Apnea of premature, AOP).研究表明,咖啡因不僅可以防治支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia, BPD),而且可以降低早產(chǎn)兒后期腦癱及認(rèn)知障礙的發(fā)生率。枸櫞酸咖啡因系通過(guò)直接作用于腦組織起保護(hù)作用還是通過(guò)改善通氣間接發(fā)揮神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用的,具體機(jī)制目前尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用7日齡新生Sprague-Dawley (SD)大鼠,結(jié)扎左頸總動(dòng)脈并缺氧制備HIBD動(dòng)物模型,治療組給予CC干預(yù)治療,從海馬神經(jīng)細(xì)胞增生與凋亡、腦白質(zhì)髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein, MBP)表達(dá)及遠(yuǎn)期大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變,探討CC對(duì)新生大鼠腦組織的保護(hù)作用,并進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)cC對(duì)缺氧缺血后腦組織腺苷A1受體(Adenosine 1 Receptors, AIR) mRNA和腺苷A2a受體(Adenosine2a Receptors, A2aR) mRNA表達(dá)的影響,探討CC對(duì)新生大鼠HIBD的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。材料與方法72只7日齡新生SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組、HIBD組、CC組,每組24只。假手術(shù)組僅分離左側(cè)頸總動(dòng)脈,不結(jié)扎不缺氧；HIBD動(dòng)物模型制備參照Rice法,HIBD組和CC組均結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈,然后放于母鼠身旁恢復(fù)1 h,進(jìn)而置于37℃恒溫的容器中,通入80mL/L氧氣和920mL/L氮?dú)獾幕旌蠚怏w2h。CC干預(yù)組在缺氧缺血(Hypoxic-ischemic, HI)前、HI后0min、24h、48h、72h腹腔注射20mg/kg的CC,假手術(shù)組和HIBD組等時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等體積的生理鹽水。至12日齡時(shí)每組處死16只大鼠,余飼養(yǎng)至28日齡：(1)在12日齡處死前各組隨機(jī)選取8只新生大鼠,分別腹腔注射5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine, BrdU)標(biāo)記新生細(xì)胞,劑量為50mg/kg,1次/12h,連續(xù)5次,最后一次腹腔注射BrdU 4h后斷頭取腦,采用HE染色對(duì)各組大鼠腦組織HI側(cè)CA1區(qū)光鏡下行病理學(xué)觀察,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HI側(cè)腦組織海馬齒狀回顆粒下層BrdU、海馬CA1區(qū)活化半胱氨酸基天冬氨酸酶-3(Cleaved cysteine aspartic acid specific protease,活化Caspase-3)、皮層下白質(zhì)MBP的表達(dá)水平,TUENL法檢測(cè)海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞；(2)至12日齡時(shí),各組隨機(jī)選取8只新生大鼠,采用Real Time PCR測(cè)定HI側(cè)腦組織A1R mRNA、A2aR mRNA的水平；(3)余大鼠至28日齡時(shí)采用Y迷宮進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力的檢測(cè)。結(jié)果1.各組新生大鼠HI側(cè)腦組織海馬區(qū)病理學(xué)觀察假手術(shù)組大鼠HI腦海馬CA1區(qū)結(jié)構(gòu)完整、細(xì)胞層次清晰,形態(tài)正常；HI后腦組織出現(xiàn)不同程度的病理學(xué)改變,HIBD組表現(xiàn)為細(xì)胞排列紊亂、邊界不清；CC干預(yù)組較HIBD組細(xì)胞層次相對(duì)清晰,排列整齊。2.各組新生大鼠HI側(cè)腦組織海馬齒狀回BrdU.海馬CA1區(qū)活化Caspase-3及TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞、皮層下白質(zhì)MBP的表達(dá)情況HIBD組、CC組、假手術(shù)組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為56.50±0.91、59.10±0.54、41.25±1.27,前兩組均高于假手術(shù)組(P0.05),而前兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；各組活化Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)高低依次為HIBD組、CC組、假手術(shù)組,分別為：52.38±1.60、25.88±0.64、14.00±0.27,三組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；假手術(shù)組海馬CA1區(qū)可見(jiàn)少量TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞(9.13±0.35),HIBD組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(37.38±0.94)最多,CC組(14.75±0.56)較HIBD組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少,三組間兩兩相比有差異(P0.05)；HIBD組較假手術(shù)組皮層下白質(zhì)MBP(用IOD值表示)明顯減少(P0.05),給予CC干預(yù)后,MBP表達(dá)水平較HIBD組升高(P0.05)。3.各組大鼠HI側(cè)腦組織A1R mRNA、A2aR mRNA的表達(dá)HI后A1R mRNA較假手術(shù)組顯著上調(diào)(1.28±0.34 vs 1.02±0.18)(P0.05),而A2aR mRNA變化不明顯(1.13±0.36 vs 1.09±0.21)(P0.05),給予CC干預(yù)后A1R mRNA較HIBD組下降(0.94±0.17 vs 1.28±0.34),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而A2aR mRNA下降不明顯(0.96±0.14 vs 1.13±0.36)(P0.05)。4.各組大鼠遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力的比較28日齡時(shí),Y迷宮測(cè)試顯示大鼠學(xué)會(huì)逃避電擊次數(shù)由低到高依次為假手術(shù)組(31.25±1.41)、CC組(39.75±2.51)、HIBD組(58.50±3.14),三組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；記憶保持能力高低依次為CC組(85.00±3.27)、假手術(shù)組(83.75±3.24)、HIBD組(56.25±3.24),前兩組均高于HIBD組(P0.05),前兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論1.枸櫞酸咖啡因能夠減輕缺氧缺血后新生大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡和腦白質(zhì)損傷,提示對(duì)大鼠腦有一定的保護(hù)作用。2.枸櫞酸咖啡因?qū)π律笫驢IBD的保護(hù)作用可能與下調(diào)腺苷A1R表達(dá)有關(guān)。3.枸櫞酸咖啡因可以改善大鼠HIBD后遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R742

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周賽君;何金彩;王小同;陳江帆;舒丹;朱美娥;;咖啡因?qū)π∈罂臻g學(xué)習(xí)記憶能力及有關(guān)腦區(qū)記憶相關(guān)蛋白CREB表達(dá)的影響[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2008年02期

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本文編號(hào)：1308754